Generation and analysis of 113 adult stage Schistosoma japonicum (Chinese strain) expressed sequence tags

To rapidly and economically obtain knowledge about adult stage Schistosoma japonicum (Chinese strain) expressed genes using expressed sequence tag (EST) Methods A directional cDNA library constructed from Schistosoma japonicum (Chinese strain ) adult stage RNA was used to generate expressed sequence tags(ESTs) These were compared against an EMBL parasites database and GENBANK database by BLASTn and BLASTx Results A total of 314 phage clones were randomly selected for generating expressed sequence tags(ESTs) From these clones, 132 EST quality sequence were obtained Among these EST quality sequences,113 ESTs were successfully submitted to the dbEST at GenBanK A total of 7 6% of these EST quality sequences were previously identified sequence of Schistosoma japonicum, while 4 5% were putatively identified sequences of Schistosoma japonicum A total of 23 5% of these EST quality sequences were putatively identified sequence of Schistosoma mansoni or other organisms 57 6% had no matches in the database and were classified as unknown sequences Most ESTs with the putative protein identified belonged to housekeeping proteins Information about several interesting genes was found Conclusion Partial cDNA sequencing to generate expressed sequence tags (ESTs) has the potential to rapidly and economically increase our knowledge about adult stage Schistosoma japonicum(Chinese strain) expressed genes

日本血吸虫23kDa膜蛋白DNA疫苗和蛋白质疫苗联合应用免疫保护性作用的研究

目的 研究 Sj C2 3DNA疫苗和 Sj C2 3蛋白疫苗联合免疫对 C5 7BL/ 6感染小鼠的免疫保护作用。方法 分别构建和制备 Sj C2 3DNA疫苗 (pc DNA3.1- Sj C2 3)和蛋白疫苗 (Sj C2 3大亲水片段融合蛋白 GST- HD)。 4 8只 C5 7BL / 6小鼠随机分为 A、B、C、D 4组 ,每组 12只。 A组 (Sj C2 3DNA+GST- HD联合应用组 )每只小鼠分别在第 0、2周经股四头肌注射 10 0μg Sj C2 3质粒 DNA,在第 4周经背部皮下多点注射 5 0 μg GST- HD+5 0 μg CFA;B组 (Sj C2 3DNA组 )每只小鼠分别在第 0、2、4周经股四头肌注射 10 0 μg Sj C2 3质粒 DNA;C组 (蛋白疫苗组 )于第 4周每鼠经背部皮下多点注射5 0μg GST- HD+5 0μg CFA 1次 ;D组 (对照组 )每鼠分别在第 0、2、4周肌注 10 0μg pc DNA 3.1。各组在末次免疫后 30 d每鼠以 4 5± 2条 /只日本血吸虫尾蚴攻击感染 ,攻击后 4 5 d剖杀小鼠 ,计数成虫及肝内虫卵数。在免疫前、末次免疫后和攻击后从小鼠尾静脉采血 ,分离血清 ,用 Western- blot法检测抗体反应。结果 联合组与质粒对照组相比 ,获得了 36 .9%的减虫率和 30 .7%减卵率 ;而单独Sj C2 3DNA疫苗组的减虫率为 2 6 .9% ,显著低于联合组 (P<0 .0 5 )和 2 2 .2 %的减卵率 ,单独蛋白疫苗组 (GST- HD)为 15 .2 %和 12 .2 %

日本血吸虫中国大陆株28kDa GST基因在大肠杆菌中的表达

在大肠杆菌ＴＢ１中表达合日本血吸虫中国大陆株２８ｋＤｅ抗原基因的重组质粒，表达产物是融 合蛋白，分子量为３３ｋＤａ。采用谷胱甘肽琼脂糖亲和层析柱纯化表达产物。２、４－二硝基氯苯／谷胱 甘肽分光光度测定法和琼脂糖－淀粉凝胶电泳显示重组抗原具有较高的谷胱甘肽Ｓ－转移酶（ＧＳＴ） 活力。酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）结果表明该重组抗原可检测到重组２８ｋＤａ ＧＳＴ或日本血吸虫 虫体ＧＳＴ免疫绵羊血清中的特异性抗体；免疫印迹试验（Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔｔｉｎｇ）分析揭示重组抗原的 ３３ｋＤａ抗原分子能被这两种免疫血清识别，证明它具有ＧＳＴ抗原性。

日本血吸虫脂肪酸结合蛋白(SjC FABP)核酸疫苗诱导小鼠免疫保护作用研究

目的 研究日本血吸虫中国大陆株脂肪酸结合蛋白分子 (Sj C FABP)核酸疫苗对 BALB/c小鼠的免疫保护性作用。方法 根据 Sj C2 1.7分子基因序列合成 1对特异性引物 P1和 P2 ,并使其5’端分别带有 Bam H1、Xho1的酶切位点序列 ,采用 PCR方法从重组质粒 Sj C FABP-p UC19中扩增出特异性目的基因的开放阅读框序列 ,并在其翻译起始密码子处引入 Kozark序列。限制性酶切后的基因片段被亚克隆到真核表达质粒 pc DNA3 .1中 ,构建成重组真核表达质粒 Sj C FABP-pc D-NA3 .1,大量制备纯化的重组真核表达质粒。 48只 BAL B/c小鼠分为对照组、实验组、加强组。对照组每只小鼠的股四头肌注射接种 10 0μg质粒 pc DNA3 .1DNA,实验组以同样的方式注射 10 0μg重组质粒 Sj C FABP-pc DNA3 .1DNA,加强组除注射 10 0μg重组质粒 Sj C FABP-PCDNA3 .1DNA外 ,同时注射 P3 5 -pc DNA3 .1,P40 -pc DNA重组质粒各 10 0μg。每隔 2周免疫 1次 ,共免疫3次。第 3次免疫后的第 3 0天每只小鼠经腹部皮肤感染 (4 5± 1)条尾蚴 ,45 d后剖杀 ,计数各组小鼠肝虫卵数及成虫数。于免疫前及末次免疫后 2周分别经尾静脉采血 ,测定抗体水平。在第 2次免疫后第 10天各组取 2只小鼠处死 ,取股四头肌进行免疫组化分析。结果 免疫组化分析显示实?

日本血吸虫中国大陆株磷酸丙糖异构酶DNA疫苗对猪保护性免疫作用研究

目的 探讨日本血吸虫中国大陆株磷酸丙糖异构酶 (Sj CTPI) DNA疫苗诱导猪的保护性免疫作用。方法 分别构建并制备 pc DNA 3.1- Sj CTPI DNA疫苗及 pc DNA3.1- P35和 P40 (IL - 12的两个亚单位 )的 DNA疫苗。取上海松江本地猪 (自幼阉割 ) 30头 ,分为 A、B、C 3组 ,每组 10头。 A组 (TPI组 )每头猪于两侧臂部肌肉注射 5 0 0 μg Sj CTPI DNA疫苗 ;B组 (TPI+IL- 12组 )每头猪肌肉注射 5 0 0 μg Sj CTPI DNA及 5 0 0 μg P35 DNA疫苗、5 0 0 μg P40 DNA疫苗。C组 (对照组 )每头猪肌肉注射 5 0 0 μg pc DNA3.1质粒 DNA。共免疫 3次 ,每次间歇 3周。末次免疫后 30 d,每猪攻击 6 0 0条日本血吸虫尾蚴 (背部贴片法 )。攻击后 45 d剖杀 ,经胸主动脉灌注 ,并从门静脉处收集成虫计数。从肝脏上同一部位切下小块肝组织 ,置 5 % KOH内溶解 ,后计算每克虫卵数。比较各组间的减虫率、减雌率和减卵率。在免疫前、末次免疫后和攻击后从猪耳静脉采血 ,分离血清 ,用 EL ISA法测抗体。结果 TPI组和 TPI+IL- 12组与质粒对照组相比 ,分别获得 48.3%和 46 .2 %的减虫率 ,5 3.6 %和5 9.6 %的减雌率 ,49.4%和 6 5 .8%的减卵率。TPI组的 10头猪中有 6头在免疫后可检出抗 r Sj CTPI抗体 ,TPI+IL- 12组 10头猪中有

日本血吸虫(中国大陆株)磷酸丙糖异构酶DNA疫苗的研制及其保护性免疫的研究

目的 研究日本血吸虫中国大陆株磷酸丙糖异构酶 DNA疫苗诱导 C5 7BL /6小鼠的保护性免疫作用。方法 分别以 p U C19- Sj CTPI和 pc DNA1.1- IL - 12为模板设计引物 ,将 PCR扩增到的Sj CTPI基因以及 IL - 12的亚单位 P35 和 P40 基因克隆到真核表达载体 pc DNA .3.1中。大量制备 pc D-NA3.1- Sj CTPI和 pc DNA 3.1- P35 、pc DNA3.1- P40 的质粒 DNA。把 45只 5～ 6周龄 C5 7BL /6小鼠分成 3组 ,对照组 (pc DNA组 )肌肉注射 10 0μg的 pc DNA3.1;实验组 (TPI组 )肌肉注射 10 0μg的pc DNA3. 1- Sj CTPI;加强组 (TPI+ IL - 12组 )肌肉注射 10 0μg的 pc DNA 3.1- Sj CTPI及 10 0μg的pc DNA3.1- P35 和 pc DNA3.1- P40 的混合物 ,分别于第 1、5周各免疫 1次 ,第 9周每鼠用 45条尾蚴攻击感染 ,攻击后 45 d剖杀小鼠 ,计数成虫、肝内虫卵。采用免疫组化法检测 Sj CTPI在局部肌组织内的表达 ,用脾细胞培养法检测特异性抗原刺激后的 IL - 2、IL - 4、IL - 10、IFN-γ在攻击前后的水平。分别于 2次免疫前和攻击前及攻击后 2周经尾静脉采血 ,分别采用 EL ISA和 Western- blot检测血清中抗 TPI抗体。结果 Sj CTPI可在 C5 7BL /6小鼠骨骼肌细胞膜、细胞浆中得到表达。细胞因子 IL -2的水平在攻击前、后 。

日本血吸虫(中国大陆株)磷酸丙糖异构酶(SjC-TPI)基因克隆与序列分析

根据已知日本血吸虫菲律宾株TPI序列，设计合成一对5’端分别带有BamH1，Sal1酶切位点的引物P1和P2，制备日本血吸虫成虫（中国大陆株）mRNA，采用反转录聚合酶链反应技术，从mRNA中扩增出日本血吸虫中国大陆株TPI基因片段，序列分析表明，日本血吸虫（中国大陆株）TPI基因开放阅读框架全长为759bp，与曼氏血吸虫TPI基因的同源性为84％。与日本血吸虫（菲律宾株）TPI基因的同源性为99.7％。

日本血吸虫童虫cDNA文库的免疫学筛选及阳性克隆的初步鉴定

目的 免疫法筛选日本血吸虫 (Schistosomajaponicum ,S j) 15d肝期童虫cDNA表达文库 ,并进行鉴定 ,以获得S j疫苗候选抗原分子。方法 采用紫外线照射致弱尾蚴免疫的兔血清 ,对S j中国大陆株 15d肝期童虫cDNA文库进行免疫学筛选 ,选取部分阳性克隆进行插入片段的核苷酸序列分析 ,将结果通过Internet送入NCBIGenBank进行同源性比较 ,并将发现的新基因送入GenBank登录。结果 对大约 10 4个噬菌斑进行了初筛 ,共获得 4 9个阳性克隆 ,复筛了其中的 12个克隆 ,获得 8个持续阳性反应克隆。对 6个克隆的核苷酸序列测定及同源性分析表明 ,2个为编码S j线粒体的基因 ,另外 4个为S j未知基因 ,新基因序列已被GenBank接受 ,并获得进入编号。 结论 从S j肝期童虫cDNA文库中筛选到一批S j基因 ,其中部分为未知基因 ,为血吸虫新的疫苗候选分子的研究提供了材料。

日本血吸虫副肌球蛋白全基因克隆、测序及体内表达

目的： 将日本血吸虫大陆株副肌球蛋白（ Ｓｊｃ９７） 编码区全基因克隆及测序， 并研究 Ｓｊｃ９７ 全基因核酸疫苗在小鼠体内的表达。方法： 抽提日本血吸虫成虫总 Ｒ Ｎ Ａ， 逆转录聚合酶链反应 （ Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ） 扩增编码 Ｓｊｃ９７的全基因ｃ Ｄ Ｎ Ａ， 双脱氧链末端终止法测 Ｄ Ｎ Ａ 序列。构建含 Ｓｊｃ９７ 全基因的质粒表达载体 （ｐ Ｃ Ｍ Ｖ Ｓｊｃ９７） ， 并用免疫荧光染色法研究ｐ Ｃ Ｍ Ｖ Ｓｊｃ９７ 在小鼠体内的表达特性。结果与结论： 用 Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ 扩增获得了 Ｓｊｃ９７ 的编码区全基因ｃ Ｄ Ｎ Ａ， 并测定了该基因编码区的全序列。与日本血吸虫菲律宾株、日本株及曼氏血吸虫副肌球蛋白编码区全基因比较， 核苷酸序列同源性分别为： ９９４ ％ 、９９２ ％ 和９１０ ％ ； 推导的氨基酸序列同源性分别为：９９７ ％ 、９９８ ％ 和９６０ ％ 。ｐ Ｃ Ｍ Ｖ Ｓｊｃ９７ 核酸疫苗能在注射的小鼠局部肌肉组织表达 Ｓｊｃ９７ 。

日本血吸虫(中国大陆株)表达基因的分离和EST序列测定

目的 运用表达序列标签技术（ＥＳＴ方法） ，从ＳｊｃＤＮＡ文库中分离、鉴定和测定血吸虫表达基因序列。方法 应用ＥＳＴ方法，从Ｓｊ ｃＤＮＡ 文库中随机挑选出单个重组克隆进行ＰＣＲ直接序列分析，通过互联网将获得的ＥＳＴ 序列送入ＮＣＢＩＧｅｎＢａｎｋ 进行同源性检索，并将发现的未知基因ＥＳＴ序列送入ＮＣＢＩｄｂＥＳＴ 以获得ＧｅｎＢａｎｋ 进入号。结果 分离了１００ 个Ｓｊ重组克隆，并已对２５ 个克隆ｃＤＮＡ 插入片段的ＰＣＲ 产物进行直接序列分析，获得了２１ 个ＥＳＴ 序列。其中２ 个ＥＳＴ 序列为ＧｅｎＢａｎｋ 中已知的血吸虫基因序列，１９ 个为未知基因序列。这１９ 个ＥＳＴ序列已被ＮＣＢＩｄｂＥＳＴ和ＧｅｎＢａｎｋ 接受并获得了新序列进入号。结论 采用ＥＳＴＰＣＲ直接序列分析方法可大量获得血吸虫表达基因ＥＳＴ序列，为进一步开展日本血吸虫（中国大陆株） 表达基因的研究奠定了基础。

日本血吸虫FKBP12基因的原核克隆表达及表达产物的纯化

目的 扩增、原核克隆和表达日本血吸虫 (Sj) FKBP12基因全长 c DNA,并进行表达产物的纯化。方法 从成虫 RNA中 RT- PCR扩增 Sj FKBP12基因完整的编码阅读框后 ,将其克隆入p GEX- 4 T- 1原核表达载体中 ,IPTG诱导高表达后用亲和层析柱对表达产物进行纯化。结果 将 SjFKBP12基因成功克隆入 p GEX- 4 T- 1表达载体中 ;诱导表达并成功纯化出重组 FKBP12蛋白。结论 成功克隆了 Sj FKBP12基因 ,并表达和纯化得到了 FKBP12蛋白 ,为研究 FKBP12的功能及其进行疫苗等研究奠定了基础。

日本血吸虫Calpain的DNA疫苗诱导小鼠免疫保护性研究

目的 研究日本血吸虫中国大陆株Calpain的DNA疫苗对Balb/c小鼠的免疫保护性作用。方法 大量制备pVAC质粒DNA和pVAC -CalpainDNA疫苗 ,Balb/c小鼠 5 0只 ,随机均分为对照组和实验组 ,对照组每只小鼠的股四头肌注射接种 10 μgpVAC质粒DNA ,实验组以同样方式注射 10 μgpVAC -CalpainDNA疫苗 ,第 3周加强免疫一次。第 4周每只小鼠经腹部皮肤感染 ( 2 5± 1)条尾蚴 ,感染 6周后剖杀 ,从门静脉灌流收集计成虫数、碎脾计T淋巴细胞总数、从各鼠肝脏的同一部位切下小块肝组织 ,置 5 %KOH溶液消化后 ,计算每克肝组织虫卵数 ,比较减虫率、减雌率和减卵率。于免疫前、第一次免疫后 2周和感染后 2周分别从尾静脉采血 ,用ELISA测定抗体水平。结果 与对照组相比 ,实验组获得 36.84%的减虫率、36.36%的减雌率和 43.31%的减卵率 ,感染后实验组小鼠IgG抗体水平升高幅度大于对照组 ,对照组T淋巴细胞数显著多于实验组。结论 CalpainDNA疫苗可诱导小鼠产生较好的免疫保护作用 。

Sj28GST基因克隆和高效表达产物的纯化

目的 从日本血吸虫中国大陆株成虫cDNA文库中克隆 2 8kDa谷胱甘肽 -S -转移酶 (Sj2 8GST)基因 ,获得用于疫苗和T细胞表位研究的高纯度重组融合蛋白 2 8GST -TRX。方法 应用引物特异性PCR技术 ,从日本血吸虫中国大陆株成虫cDNA文库中扩增Sj2 8GST基因 ,经琼脂糖凝胶电泳结合碱基序列分析鉴定后 ,采用定向克隆技术构建Sj2 8GST -TRX融合蛋白重组表达载体并诱导其在大肠杆菌BL2 1(DE3)的表达 ,用Western -blotting测定以融合蛋白方式表达的Sj2 8GST的免疫原性 ,通过包涵体纯化结合Ni+柱亲和层析获得高纯度重组融合蛋白。结果 Sj2 8GSTPCR产物为约 6 4 0bp ,其碱基序列 (6 33bp)和推导的氨基酸序列 (2 11aa)与GenBank报道一致 ;获得了Sj2 8GST -TRX重组质粒 ;2 8GST -TRX融合蛋白在大肠杆菌以包涵体形式高效表达 ;在分子量为约 4 3kDa处有一能与羊抗Sj2 8GST抗体产生特异性反应的含 2 8GST融合蛋白条带 ;包涵体纯化法结合Ni+ 亲和层析可获得高纯度的重组融合蛋白。结论 获得到了日本血吸虫中国大陆株 2 8GST分子的全长基因和高纯度重组 2 8GST -TRX融合蛋白 ,该融合蛋白具有天然Sj2 8GST免疫原性。

日本血吸虫亲免素基因的扩增及序列分析

【目的】研究日本血吸虫亲免素基因编码序列的结构及进行初步的功能预测。【方法】用5'端和3'端锚定PCR从尾蚴文库中扩增,以获取日本血吸虫中国大陆株亲免素基因完整的开放阅读框(openreadingframe,ORF);用生物信息学技术确认其是否为亲免素编码基因并进行结构功能的初步分析和预测。【结果】用5'端和3'端锚定PCR从尾蚴文库中获得了亲免素基因5'端和3'端所缺序列,得到的亲免素基因cDNA的总序列长为1438bp,其ORF长1296bp,编码431个氨基酸。利用生物信息学技术鉴定其为日本血吸虫亲免素基因的完整cDNA序列。并用RT-PCR从日本血吸虫尾蚴mRNA扩增出亲免素基因的ORF。【结论】成功获得了日本血吸虫亲免素编码基因的全长cDNA,为进一步的功能研究打下了基础。

日本血吸虫亲环素A和乳酸脱氢酶编码基因的克隆及序列分析

目的 识别和克隆日本血吸虫新基因。方法 对本实验室获得的EST进行同源性分析 ,识别血吸虫新基因 ;根据EST设计引物 ,用锚着PCR法从cDNA文库中扩增出新基因全长cDNA ,并将其克隆入原核表达载体 pGEX - 4T - 1,用生物信息学技术对获得的编码基因进行结构与功能的分析。结果 EST同源性分析得到一个完整编码基因 ,开放阅读框(ORF) 4 95bp ,编码 16 4个氨基酸 ;锚着PCR法获得另一EST的 3’端所缺序列 ,得到完整编码阅读框 ,其ORF 999bp ,编码 332个氨基酸。利用生物信息学技术确定它们分别为日本血吸虫亲环素A(CyPA)和乳酸脱氢酶 (LDH)的编码基因。重组质粒经双酶切及测序鉴定证明日本血吸虫CyPA和LDH原核表达质粒构建成功。 结论 克隆到日本血吸虫亲环素A和乳酸脱氢酶编码基因的全长cDNA 。

日本血吸虫(中国大陆株)若干酶类基因的发现

目的 运用表达序列标签 (EST)技术 ,从日本血吸虫 (Schistosomajaponicum ,Sj)cDNA文库中分离、鉴定出有潜在应用价值的血吸虫基因序列。方法 应用EST方法 ,从日本血吸虫cDNA文库中随机挑选出单个重组克隆 ,PCR扩增出插入片段 ,并进行PCR产物直接测序 ;将获得的序列资料与EBI和GenBank进行BLASTn和BLASTx同源性检索 ,对可能的酶类基因序列进行分析。结论 采用EST策略 ,可获得日本血吸虫 (中国大陆株 )若干酶类基因序列EST ,为进一步的cDNA全长扩增和克隆奠定基础。

日本血吸虫SjC23蛋白质疫苗对核酸疫苗免疫增强作用的研究

目的 研究 Sj C2 3蛋白质疫苗对 Sj C2 3DNA疫苗增强小鼠的免疫保护作用的效果。方法 分别构建和制备 Sj C2 3DNA疫苗 (pc DNA3.1- Sj C2 3)和 Sj C2 3大亲水片段融合蛋白质 (GST-HD)疫苗。把 48只 BAL B/ c小鼠随机分为 A、B、C、D 4组 ,每组 12只。 A组 (DNA和蛋白质疫苗联合免疫组 )每只小鼠分别在第 0、2周经股四头肌注射 10 0μg Sj C2 3质粒 DNA,在第 4周经背部皮下多点注射 5 0 μg GST- HD+5 0 μg CFA;B组 (Sj C2 3DNA组 )每只小鼠分别在第 0、2、4周经股四头肌注射 10 0 μg Sj C2 3质粒 DNA;C组 (蛋白质疫苗组 )于第 4周每鼠经背部皮下多点注射 5 0 μgGST- HD+5 0 μg CFA1次 ;D组 (对照组 )每鼠分别在第 0、2、4周肌注 10 0 μg pc DNA3.1。各组在末次免疫后 4周每鼠以 45± 2条日本血吸虫尾蚴攻击感染 ,攻击后 45 d剖杀小鼠 ,计数成虫及肝内虫卵数。在免疫前、末次免疫后和攻击后从小鼠尾静脉采血 ,分离血清 ,用 Western- blot法检测抗体反应。结果 联合组与质粒对照组相比 ,获得了 42 .9%的减虫率和 6 0 .0 %的减卵率 ,均显著高于单独Sj C2 3DNA疫苗组 2 8.1%的减虫率和 37.9%的减卵率 ,及单独蛋白质疫苗组 (GST- HD) 2 3.8%减虫率和 39.5 %的减卵率 (P均 <0 .0 5 )。联合组抗体水平?

日本血吸虫新基因精氨酸酶的扩增及序列分析

目的 获取并真核克隆日本血吸虫新基因精氨酸酶全长cDNA。方法 对本实验室曾获得精氨酸酶基因利用生物信息学进行分析 ,发现其 5’端尚缺一段序列 ;根据已知序列设计引物 ,用 5’端单巢式PCR从尾蚴文库中扩增 ,以获得精氨酸酶基因完整的阅读框 (ORF) ;用生物信息学技术对获得的精氨酸酶编码基因进行结构与功能的分析 ;并将新基因的完整编码阅读框克隆入真核表达载体pCDNA3 1。结果 用 5’端单巢式PCR从尾蚴文库中获得了精氨酸酶 5’端所缺序列 ,得到其完整的ORF ,其ORF长 10 95bp ,编码 36 4个氨基酸。利用生物信息学技术鉴定其为日本血吸虫精氨酸酶的完整cDNA序列。重组质粒经双酶切DCR及测序鉴定证明日本血吸虫精氨酸酶真核表达质粒构建成功。结论 成功获得、识别、扩增并克隆日本血吸虫精氨酸酶编码基因的全长cDNA。

日本血吸虫磷酸丙糖异构酶小鼠免疫试验

目的：探讨从日本血吸虫大陆株成虫分离的天然磷酸丙糖异构酶抗原（ＳｊｃＴＰＩ）免疫小鼠后对尾蚴攻击感染的保护性作用。方法：采用丙酮沉淀法从日本血吸虫大陆株成虫中提取天然的ＴＰＩ抗原，并以所提纯的ＳｊｃＴＰＩ抗原加福氏佐剂经皮下和肌肉注射免疫ＮＩＨ小鼠，攻击感染后６ｗｋ收集小鼠血清并计数成虫负荷及肝、肠组织虫卵数。同时设有日本血吸虫成虫抗原（ＳＷＡＰ）免疫对照组和攻击感染对照组。结果：天然ＳｊｃＴＰＩ抗原免疫小鼠后减虫率为２１．４％－２５．０％，肝组织减卵率达５７．８％－６０．３％；ＥＬＩＳＡ法检测ＴＰＩ免疫小鼠血清抗ＴＰＩ抗体ＯＤ值明显高于对照组小鼠的ＯＤ值（Ｐ＜０．０５）。结论：天然的ＳｊｃＴＰＩ抗原具明显的免疫原性和抗原性，可以继续进行编码ＴＰＩ基因的克隆与表达。

日本血吸虫酪蛋白激酶Ⅱβ亚基的序列分析

目的 发现并克隆日本血吸虫新基因。方法 对已获得的日本血吸虫表达序列标签 (EST)进行同源性分析 ,识别血吸虫新基因 ;根据EST设计引物 ,用 3′RACE从mRNA中扩增获得新基因全长 ,用生物信息学技术对获得的编码基因进行结构与功能分析 ,将新基因的完整编码阅读框克隆入原核表达载体 pGEX -4T -1。 结果 用 3′RACE获得一个EST的 3′端所缺序列 ,得到完整编码阅读框 ,其开放阅读框 (ORF) 654bp ,编码 2 17个氨基酸。利用生物信息学技术确定其为日本血吸虫酪蛋白激酶Ⅱβ亚单位的编码基因。重组质粒经双酶切及测序鉴定 ,证明日本血吸虫CKⅡβ原核表达质粒构建成功。 结论 扩增并成功克隆日本血吸虫酪蛋白激酶Ⅱβ亚单位编码基因的全长cDNA 。