Establishment of Experimental Model of Hepatic Schistosoma Japonicum Egg Granulomas in Mice

An experimental model of hepatic Schistosoma japonicum egg granuloma was established in C57BL/6 mice sensitized with soluble egg antigen(SEA) by direct injection of vital egg suspension into the spleen. The mice infected with cercariae of Schistosoma japonicum in abdominal skin were used for comparative studies. The results showed that morbidity of hepatic Schistosoma japonicum egg granulomas in the group sensitized with SEA was 100% and that the morphology, cellular constituents, developing process and the diameter and size of the egg granulomas in the group sensitized with SEA were similar to those of the group infected with cercariae. The authors suggest that this experimental model is a useful and appropriate tool for the study on egg granulomas of Schistosoma japonicum.

日本血吸虫成虫和虫卵排泄分泌抗原对Ⅰ型糖尿病模型小鼠的影响

目的观察日本血吸虫成虫排泄分泌抗原(adult-worm excretory-secretory protein,AES)和虫卵排泄分泌抗原(excretory-secretory antigen of eggs,ESA)对Ⅰ型糖尿病小鼠的影响,并初步探讨其作用机制。方法将24只雄性昆明鼠随机分为空白对照组、PBS组、AES组和ESA组,每组6只。空白对照组不作任何处理,后3组给予链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)溶液注射制备Ⅰ型糖尿病模型,建模成功后分别用PBS、AES、ESA腹部皮下多点免疫,1周免疫1次,持续免疫4周。免疫干预1周后开始检测小鼠血糖,持续检测4周;免疫干预4周后采用ELISA法测定小鼠血清中IL-4和IFN-γ水平变化,采用HE染色法检测小鼠胰腺组织病理变化。结果与PBS组相比,AES组和ESA组小鼠血糖水平从免疫后第2周起出现下降趋势,且ESA组小鼠血糖水平低于AES组,免疫后第2、3、4周小鼠血糖水平组间差异有统计学意义(F=1214.00、1055.00、683.64,P均<0.05)。各组小鼠血清IL-4和IFN-γ水平组间差异有统计学意义(F=146.84、21.11,P均<0.05),ESA组小鼠血清中IL-4水平[(61.45±6.14)pg/mL]高于PBS组[(21.96±3.98)pg/mL]和AES组[(49.31±3.19)pg/mL],IFN-γ水平[(129.48±36.75)pg/mL]低于PBS组[(316.43±66.38)pg/mL]和AES组[(212.09±70.89)pg/mL],差异均有统计学意义(P均<0.05)。PBS组小鼠的胰岛萎缩,数量减少,空泡样变性;ESA组小鼠有轻微胰岛萎缩;AES组介于PBS组和ESA组之间。结论日本血吸虫ESA对Ⅰ型糖尿病小鼠有一定保护作用,其机制可能是ESA刺激机体导致Th1反应抑制和Th2反应增强,表现为IL-4升高和IFN-γ下降,在一定程度上减轻小鼠胰腺组织的病理损伤。

日本血吸虫感染可诱导共刺激分子(ICOS)转基因小鼠的免疫应答及其病理反应

目的观察ICOS转基因小鼠感染日本血吸虫后的免疫应答及其免疫病理反应。方法收集ICOS转基因小鼠及对照组野生型小鼠分别感染30条日本血吸虫尾蚴后4～8周的血清及脾淋巴细胞培养上清,用ELISA双抗体夹心法检测血清抗体IgG、IgG1、IgG2a的水平和培养上清中的Th1细胞因子γ干扰素(IFN-γ),Th2细胞因子白细胞介素-4(IL-4)水平。取小鼠感染后6、8周肝脏,常规石蜡连续切片,HE染色,在光镜观察单个虫卵肉芽肿病变。结果转基因小鼠IFN-γ的表达水平无显著变化,而6、8周时转基因小鼠的IL-4水平呈显著上调表达,分别为(20.8±1.6)pg/ml和(25.3±3.4)pg/ml(P<0.01)。转基因小鼠血清IgG、IgG1表达水平也均高于对照组。在转基因小鼠,反映Th1/Th2免疫平衡的Th2分化指数和IgG1/IgG2a比值也明显呈Th2优势应答,分别为2.20±0.68和5.59±0.31。感染6、8周转基因小鼠肝虫卵肉芽肿反应比对照组更为显著。转基因小鼠肝虫卵肉芽肿体积显著大于同期对照组的肉芽肿,增大率分别为24.48%和26.37%(P<0.01)。结论ICOS转基因小鼠感染日本血吸虫后表现出Th2优势应答的免疫学特征,表明ICOS在血吸虫病免疫病理中具有重要作用。

日本血吸虫未成熟虫卵67kDa分子抗原诊断血吸虫病的研究

本文通过SDS－PAGE和电渗方法，从日本血吸虫未成熟虫卵可溶性抗原（SIEA）中分离纯化出67kDa蛋白分子，以该分子包被微板进行ELISA，检测了急、慢性日本血吸虫病人血清，其阳性检出率达100％和94．6％，与60例正常人血清、30例肝吸虫和31例肺吸虫病人血清均未出现明显交叉反应，慢性血吸虫病人治疗后3个月、半年和1年的阴转率分别为58．1％，75．4％和84．6％。提示SIEA67kDa分子抗原具有较好的疗效考核价值和现场应用前景。

日本血吸虫SIEA26-28kDa的抗雌虫生殖免疫作用——HGPRT是否是主要的靶抗原(英文)

目的 观察日本血吸虫SIEA2 6 2 8kDa抗原的抗雌虫生殖作用。方法用AcA柱层析纯化日本血吸虫早期胚卵中的SIEA和SIEA2 6 2 8kDa成分 ,并以此纯化产物免疫BALB/c小鼠。将小鼠分为三组 ,分别用SIEA、SIEA2 6 2 8kDa和免疫佐剂免疫动物 ,然后进行尾蚴攻击感染。 4 6天后剖杀动物 ,冲虫 ,然后作虫荷测定及虫卵分类计数。结果 SIEA2 6 2 8kDa免疫组雌虫子宫内减卵率为 5 4 .8% ,与对照组比较有极显著性差异 ;该实验组动物肝脏和小肠组织内的虫卵数比对照组分别降低了 4 8.0 7%和 77.4 1% ,且以成熟虫卵数的下降较为显著 ,分别降低了 83.6 %和 93.3% ;粪卵数的下降幅度最为显著 ,达87.2 6 %。结论 SIEA2 6 2 8kDa可作为一种抗卵胚发育及抗雌虫生殖的候选抗原分子。

细胞信号转导抑制剂介导Th1/Th2免疫偏移对血吸虫虫卵肉芽肿的影响

目的 观察酪氨酸蛋白激酶(TPK)、蛋白激酶C(PKC)和磷酯酰肌醇-3-激酶(P13-K)特异性抑制剂(分别为tyrphostin-25、D-sphingosine和wortmannin)对日本血吸虫感染小鼠虫卵肉芽肿病变的影响,并探讨其作用机制。 方法 于小鼠感染日本血吸虫后第35天起,经尾静脉分别注射3种信号转导分子抑制剂,连续5 d。在小鼠感染后6和8wk,观察小鼠肝肉芽肿病变,并用ELISA夹心法和硝酸还原酶法分别测定小鼠血清IFN-γ、IL-4和一氧化氮(NO)水平。结果 感染小鼠应用TPK和PKC抑制剂后均可显著抑制肝肉芽肿病变,PKC抑制剂可使肉芽肿减少率达56.2％～63.4％(P<0.01)。PKC抑制剂主要抑制Th2细胞因子IL-4的表达,其抑制率为34.1％和65.6％(P<0.01),而对NO水平的检测结果进一步证明了PKC抑制剂对IL-4表达的抑制作用。 结论 在日本血吸虫感染早期应用PKC抑制剂干预T淋巴细胞信号转导可显著抑制小鼠肝肉芽肿病变,其机制可能是由于抑制了Th2优势应答并介导Th2向Th1免疫反应偏移。

检测日本血吸虫抗体标准化间接血凝试剂盒的研制

目的研制检测日本血吸虫抗体(IHA)的标准化间接血凝试剂盒。方法通过不同筛目尼龙绢和低频超声等方法制备、纯化日本血吸虫可溶性虫卵抗原,致敏人"O"型血红细胞;按医学决定水平确定免疫学质量控制标准及参考,优选原材料质量,规范生产工艺,研究制定反应体系的标准化,生产IHA试剂盒并进行鉴定。结果用生产的IHA试剂盒检测50例急性血吸虫病人血清全部阳性,检测201份慢性血吸虫病患者血清,193份阳性,敏感性96.0%;200份健康人血清均为阴性,特异性100%;肝吸虫、姜片虫、钩虫及乙肝患者血清均为阴性,肺吸虫病的交叉反应率为19.4%(6/31)。IHA试剂盒批内变异和批间变异小,有效诊断率为97.9%。同一批试剂盒在室温、4℃条件下保存3年未见效价明显改变。结论研制的IHA试剂盒具有较高的特异性和敏感性,可标准化生产。该试剂盒具有操作方便、快速、结果判断容易,不需要特殊的仪器设备,价格低廉等优点,可广泛用于现场查病。

酚酶活性抑制对小鼠体内日本血吸虫产卵的影响

目的 观察小鼠体内日本血吸虫雌虫酚酶活性被抑制后对其产卵的影响。方法 小鼠感染日本血吸虫尾蚴 2 0 d后 ,按 5 0 0 m g/ (kg· d)腹腔注射酚酶抑制剂—丙烯基硫脲 ,感染后第 45 d剖杀小鼠 ,观察感染小鼠体内日本血吸虫雌虫子宫及小鼠肝脏中虫卵的数量及形态结构。结果 与感染对照组相比 ,实验组小鼠雌虫子宫内虫卵数及每克肝组织虫卵数均明显减少。虫卵形态表现异常 ,主要是缺失硬化的卵壳结构。结论 日本血吸虫雌虫酚酶活性被完全抑制后 ,雌虫不能产卵 ;不完全抑制则只能产生无正常卵壳的异常虫卵 ,证明具有活性的酚酶是虫卵正常形成过程中必不可少的成分 。

荣宝对血吸虫病畜粪虫卵影响的实验观察

目的观察荣宝对家畜粪便中血吸虫卵的杀灭作用。方法在含有血吸虫卵的家畜新鲜集卵粪渣中按0.5%、1.0%、2.0%、3.0%的比例分组加入荣宝混合,同时按0.25%、0.5%、1.0%、2.0%的荣宝比例分别与同一新鲜粪便作直接搅拌。另外,制作高度10.0cm和18.5cm的粪柱,并按1.0%和3.0%的比例分别在粪柱底面和顶层洒上荣宝,各组以相同的粪便和方法作对照,处理一定时间后,抽样（高度组在粪柱中部取样）观察各组毛蚴孵化情况。结果荣宝与集卵粪渣混合或与新鲜粪便直接搅拌处理24h以上时,集卵粪渣加入0.5%-3.0%比例荣宝、新鲜粪便加入0.25%-2.0%比例荣宝的粪便中血吸虫卵均不能孵化;如果混合处理在2h以下时,集卵粪渣中加入0.5%-1.0%荣宝仍可见毛蚴孵出,加入2.0%-3.0%荣宝则不能,最佳药物浓度为1.0%-2.0%,有效处理时间24h以上。10.0cm高度粪柱中加入3.0%荣宝处理4d或1.0%荣宝处理5d开始不能孵出毛蚴;18.5cm高度粪柱中加入1.0%或3.0%荣宝处理8d尚可见到毛蚴孵出。所有对照组在各处理时间均可孵出毛蚴。结论荣宝具有杀灭家畜粪便中血吸虫卵的作用,其粪、药混合处理方式优于分层处理。

日本血吸虫未成熟虫卵26-28kDa抗原的分离与纯化

本文采用超凝胶AcA柱层析方法和SDS-PAGE结合凝胶洗脱方法等,分离纯化了日本血吸虫未成熟虫卵可溶性抗原(SIEA)26-28kDa组分.SDS-PAGE、免疫印迹分析(EITB)和银染色等证明,采用该方法分离纯化的26-28kDa抗原纯度高,有较强的免疫活性,并证明该抗原组分在SIEA中含量丰富.纯化的SIEA26-28kDa可作为抗日本血吸虫生殖产卵和抗卵胚发育侯选抗原,用于抗病保护性免疫的研究.

芍药苷对小鼠巨噬细胞产生TGF-β1的影响

目的探讨芍药苷(paeoniflorin,PAE)对血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)刺激小鼠腹腔巨噬细胞(PMs)产生转化生长因子β1(TGF-β1)的影响。方法研磨法制备SEA,分别加入含有小鼠PMs的培养板、培养瓶及培养皿中,培养24h,ELISA法测定TGF-β1含量,RT-PCR检测PMs内TGF-β1基因的表达,Western blotting检测PMs内TGF-β1蛋白的表达;在含PMs的培养瓶和培养皿中分别加入10mg/LSEA5ml,培养12h,再分别加入不同浓度的PAE(0、7.5、15、30、60及120mg/L),继续培养12h和24h。RT-PCR与蛋白质印迹(Westernblotting)分别检测PAE对SEA刺激的PMs内TGF-β1基因与蛋白的表达。结果10mg/L的SEA可明显刺激PMs产生TGF-β1(235.86±3.43ng/L),PAE呈浓度依赖性地抑制TGF-β1mRNA的表达(r=-0.827,P<0.01)和TGF-β1蛋白的表达(r=-0.952,P<0.01)。结论PAE能抑制SEA刺激的PMs产生TGF-β1。

日本血吸虫卵与卫氏并殖吸虫成虫可溶性抗原内的共同抗原组分研究

应用凝胶电泳和免疫印斑技术对日本血吸虫卵与卫氏并殖吸虫成虫的水溶性抗原(JSEA、PAA)和尿素溶性抗原(JEA-u、PAA-u)进行了抗原蛋白组分比较分析。结果显示:两者的特异性抗原显色主带,JSEA、JEA-u分别有8条和3条,PAA、PAA-u分别有9条和2条;其中JSEA、JEA-u分别有1条和2条,PAA、PAA-u分别有1条和2条对异种抗血清呈现交叉反应显色带。表明两种吸虫的可溶性抗原均存在共同抗原组分。慢性血吸虫病患者血清与并殖吸虫成虫抗原的交叉反应仅见于PAA,而未见于PAA-u,提示PAA-u在避免交叉反应和抗原纯化方面比PAA较为优越。

青蒿琥酯早期预防性治疗日本血吸虫病家兔的肝脏病理变化

兔于感染日本血吸虫尾蚴后第7d,开始喂青蒿琥酯,每wkl次,剂量分别为20mg/kg·次×4次(1组)和40mg/kg·次×6次(2组).于感染后12wk剖检:1组6只兔中有3只未检获虫体,此3只兔的肝脏肉眼直观和在切片中未见虫卵和虫卵性肉芽肿形成;另3只兔分别检获1—2对虫体,肝切片偶见少量虫卵和虫卵肉芽肿.2组6只兔中,仅1只检获3条(?)虫,未检获雌虫,故此6只兔的肝切片未见虫卵和虫卵肉芽肿.结果表明,兔于感染血吸虫尾蚴后,用青蒿琥酯作早期预防性治疗,可使宿主肝脏免受虫卵损害或轻微损害.

日本血吸虫虫卵cDNA文库的免疫筛选和阳性克隆的鉴定

目的寻找可用于日本血吸虫病诊断或疗效考核的抗原分子。方法在安徽省安庆市某现场,采集经粪检(Kato-Katz法,2送6检)日本血吸虫卵阳性的10份患者血样,患者年龄13～64岁,EPG为4～172;并收集该10例患者经吡喹酮(60 mg/kg×2 d)治疗6个月后的血样,将吡喹酮治疗前和治疗后的血清各10份分别混合,分别筛选虫卵cDNA文库,将所获阳性克隆分类,测定阳性克隆插入片段的DNA序列,经BLAST程序分析同源性,并利用在线的生物信息学软件预测阳性克隆基因编码蛋白的结构和功能。结果初次筛选共获得75个阳性克隆,其中46个阳性克隆吡喹酮治疗前和治疗后的日本血吸虫病患者血清反应一致(为Ⅰ类),21个阳性克隆吡喹酮治疗前的血清强于治疗后的(为Ⅱ类);8个阳性克隆吡喹酮治疗后的血清强于治疗前的(为Ⅲ类)。结合反应强度、分类和插入片段的大小选择了14个阳性克隆进行测序和生物信息学分析,多数阳性克隆插入片段均属于虫卵毛蚴抗原家族,1个阳性克隆的插入片段与含EF-hand结构域的钙结合蛋白具有一定的同源性(分值=143),1个阳性克隆的插入片段与应激反应组分1前体具有较高的同源性(分值=487),其余阳性克隆的插入片段仅与假定蛋白有一定的同源性,蛋白功能无明确注释。结论用吡喹酮治疗前后的日本血吸虫病患者血清筛选虫卵cDNA文库,获得的29个阳性克隆在吡喹酮治疗前后有差异。

感染亚洲不同地域品系日本血吸虫小鼠的肝虫卵肉芽肿大小

目的 :了解亚洲不同地域品系日本血吸虫对宿主的致病性。方法 :应用相同宿主 C57BL小鼠在同等条件下感染亚洲 7地域品系日本血吸虫后 ,观察和比较其肝虫卵肉芽肿体积大小。结果 :虽然不同地域品系日本血吸虫对小鼠肝组织所致的虫卵肉芽肿体积大小有异 ,但以亲动物的中国台湾品系所致的单个卵的增生期虫卵肉芽肿平均体积为最小。它与亲人体的中国云南、中国广西、中国四川、中国皖鄂、日本、菲律宾 6地品系所致的增生期虫卵肉芽肿平均体积具有显著性的差别。结论 :中国台湾品系日本血吸虫尾蚴感染宿主后 ,寄生虫与宿主的相互关系可能具有某些独特性 ,或存在免疫应答程度上的差异。

日本血吸虫天然抗原分子的柱层析分离纯化与鉴定

目的分离纯化日本血吸虫成虫(AWA)和未成熟虫卵(SIEA)可溶性抗原中的单一蛋白,为血吸虫病免疫诊断、预防提供新的抗原分子。方法柱层析分离纯化成虫和未成熟虫卵可溶性抗原,SDS-PAGE及银染色进行分析鉴定。结果得到了三种不同大小血吸虫分子抗原AWA18000u,SIEA42000u,SIEA130000u。结论实验证明柱层析法是一种快速分离纯化血吸虫单一组分抗原简单而有效的方法。

快速分离和纯化感染6wk兔肝组织中的日本血吸虫虫卵

从感染兔肝组织中分离、纯化具有生物活性的日本血吸虫虫卵，是分子生物学研究的基本需要。本文采用匀浆—分级过滤—中速低温离心沉淀—反复洗涤法，获得高纯度、具有活性的虫卵，回收率达71％，毛蚴孵出率达90％以上。本方法经济简便、快速易行、效率高、适用于大批量操作。

日本血吸虫可溶性虫卵抗原38kDa分子Dipstick快速诊断模式的初步建立

目的 建立简便的血吸虫病Ｄｉｐｓｔｉｃｋ快速诊断比方法 以纯化的日本血吸虫虫卵可溶性抗原（ＳＥＡ）３８ｋＤａ分子为诊断抗原，以胶体金标记的鼠抗人ＩｇＧ为二抗，建立 Ｄｉｐｓｔｉｃｋ快速诊断体系；检测日本血吸虫病人血清，急性期３７例、慢性期３０例，正常人５２例，肝吸虫病人血清３０例。结果 所测得的阳性率分别为９４．６％、８６．７％、１．９％、０％．伯论 以 ＥＡ ３８ｋＤａ纯化分子建立的血吸虫病Ｄｉｐｓｔｉｃｋ快速诊断法具有较好的敏感性和特异性，且简便快捷。

日本血吸虫可溶性虫卵抗原38kDa分子的纯化及诊断价值的初步评估

[目的 ]探讨日本血吸虫虫卵可溶性抗原 (SEA) 38k Da分子诊断血吸虫病的应用价值。 [方法 ]用 SDS-PAGE配合电渗洗脱技术分离纯化了诊断靶抗原 SEA38k Da,并经 SDS- PAGE和 Western blot鉴定 ;将 SEA38k Da分子和 SEA用于 EL ISA法检测日本血吸虫病患者血清 ,急性期 31例、慢性期 31例 ,正常人 6 0例 ,华支睾吸虫病患者血清 30例 ,并殖吸虫病患者血清 30例。 [结果 ]SEA38k Da分子抗原和 SEA所测得的阳性率分别为90 .3%、90 .3%、1.7%、0、0和 90 .3%、83.9%、3.3%、0、0。将 SEA 38k Da分子和 SEA在 EL ISA中的 P/N比值进行比较 ,经 t检验 ,发现在检测急性血吸虫病患者 ,慢性血吸虫病患者和正常人血清时 ,两者间的 P/N比值在 3组间差异均有显著性意义 (P值均 <0 .0 0 1) ;SEA 38k Da分子在检测患者血清时的 P/N比值显著高于 SEA,而检测正常人血清时的 P/N比值显著低于 SEA。 [结论 ]纯化 SEA38k Da具有较好的敏感性和特异性 。