日本血吸虫31／32kDa抗原纯化及诊断应用的研究(英文)

采用超凝胶柱层析结合超滤、透析、沉淀等方法分离纯化了日本血吸虫成虫３１／３２ｋＤａ抗原。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、银染和免疫印迹分析，证明免疫及生化纯度。银染及ＰＡＳ证实此抗原是一种不含糖的多肽类组分。用于ＥＬＩＳＡ和ＩＨＡ诊断日本血吸虫病，与ＳＥＡ同样敏感，而特异性明显较优。

日本血吸虫成虫31/32 kDa蛋白的纯化及保护性免疫力的研究

本文采用制备型聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和电渗析方法分离纯化日本血吸虫成虫 31/32 kDa 蛋白(Sj 31/32蛋白)。SDS-PAGE、免疫印迹试验(EITB)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测结果表明采用该方法分离纯化的 Sj 31/32 蛋白纯度高,且具有较高的活性。用纯化的 Sj 31/32 蛋白加福氏佐剂免疫的小鼠,不仅可减少虫负荷(减虫率 28.1％),还可降低血吸虫成虫的产卵量(减卵率 71.4％),抑制虫卵肉芽肿的形成。结果提示:Sj 31/32 蛋白具有较高的减卵率,可望作为混合多价疫苗候选组分。

日本血吸虫31/32kDa抗体的检测及其在诊断中的作用

利用纯化日本血吸虫３１／３２ｋＤａ 抗原（Ｓｊ３１／３２） 与可溶性虫卵抗原（ＳＥＡ）ＥＬＩＳＡ方法检测急、慢性日本血吸虫病血清，以探讨其作为抗原诊断血吸虫病的特异性、敏感性及疗效考核价值。结果急、慢性血吸虫病人血清抗Ｓｊ３１／３２ 抗体检出率为１００％ 和９５％ ，与正常人、肝吸虫和肺吸虫病人血清未出现交叉反应；抗ＳＥＡ 抗体检出率为９７－４ ％ 和９０％ ，与正常人和肝、肺吸虫有不同程度的交叉反应。血吸虫病人治疗后３ 个月、半年和１ 年抗Ｓｊ３１／３２ 抗体的阴转率分别为５２－５％ 、７２－５％ 和８２－５ ％ ， 而抗ＳＥＡ 抗体的阴转率则分明别为１５－０％ 、３７－５ ％ 和５０－０ ％ 。提示Ｓｊ３１／３２ 抗原诊断血吸虫病敏感性高、特异性强，并且具有较好的疗效考核价值，可用于血吸虫病现场和临床应用。

吡喹酮治疗对日本血吸虫31/32kDa抗体的影响

为探讨化疗对日本血吸虫 31/ 32 k Da抗体的影响 ,应用纯化日本血吸虫 31/ 32 k Da抗原 (Sj31/ 32 )和可溶性虫卵抗原 (SEA)对 94例经吡喹酮治疗后不同时期血吸虫病患者血清抗体进行检测。结果治疗后 3和 6个月血清31/ 32 k Da Ig G水平分别为 1.2 6± 0 .15和 0 .6 5± 0 .14(治疗前为 2 .0 3± 0 .2 0 ,P<0 .0 1) ,而 SEA Ig G水平则分别为 2 .87± 0 .19和 2 .30± 0 .2 0 (治疗前为 3.0 1± 0 .17,P>0 .0 5 )。各年龄组治疗前后血吸虫抗体水平均随治疗进展而降低 ,其中儿童和青少年 (3～ 2 0岁年龄组 ) Sj31/ 32 Ig G水平下降最快 ,治疗后 6个月时几乎接近正常值。治疗前Sj31/ 32 Ig G与 SEA Ig G水平之间高度相关 (r=0 .90 ) ,治疗后 3和 6个月两者之间的相关程度降低 (r分别为 0 .30和 0 .40 )。结果表明 ,吡喹酮治疗后患者血清中 Sj31/ 32 Ig G下降较快 ,Sj31/ 32 Ig

日本血吸虫31/32kDa抗体的检测及其在诊断中的作用

目的 :探讨纯化日本血吸虫 31 /32kDa抗原 (Sj31 /32 )诊断的特异性、敏感性及疗效考核价值。方法 :利用纯化Sj31 /32与可溶性虫卵抗原 (SEA)ELISA方法检测急、慢性日本血吸虫病患者血清。结果 :急、慢性血吸虫病患者血清抗Sj31 /32抗体检出率为 1 0 0 %和 95% ,与正常人、肝吸虫和肺吸虫病患者血清未出现交叉反应 ;抗SEA抗体检出率为 97.4 %和 90 % ,与正常人和肠道吸虫病患者有不同程度的交叉反应。血吸虫病人治疗后 3个月、半年和 1年抗Sj31 /32抗体的阴转率分别为 52 .5%、72 .5%和 82 .5% ,而抗SEA抗体的阴转率则分别为 1 5%、37.5%和 50 %。结论 :Sj31 /32抗原诊断血吸虫病敏感性高、特异性强 ,并且具有较好的疗效考核价值 。

日本血吸虫31/32KDa蛋白质基因扩增及克隆

目的 克隆日本血吸虫 31/ 32 KDa蛋白质的编码基因 ,用于血吸虫病免疫诊断和预防。方法 以日本血吸虫成虫 RNA为模板逆转录合成 c DNA链 ,参照 S.m 31/ 32编码序列设计合成引物 ,用 PCR法扩增 31/ 32 KDa蛋白质基因编码序列 ,将其克隆入 p GEM- T载体 ,并用双酶切和以质粒为模板的 PCR进行鉴定。结果 RT- PCR扩增出一条约 12 70 bp大小的特异性条带 ,重组质粒的双酶切和以质粒为模板的 PCR均获得了一条与 RT- PCR扩增出的条带大小相同。结论 日本血吸虫 31/ 32 KDa蛋白质重组 p GEM- T克隆载体的成功构建 ,为进一步研究提供条件。

佐剂对日本血吸虫31/32kDa蛋白保护性免疫力的影响

本实验用纯化的日本血吸虫３１／３２ｋ Ｄａ 蛋白（ Ｓｊ３１／３２ 蛋白）辅以ｐｏｌｙａｌｐｈａｏｌｅｆｉｎ（ Ｐ Ａ Ｏ）佐剂免疫小鼠，同时比较了 Ｓｊ３１／３２ 蛋白辅以福氏完全佐剂（ Ｆ Ｃ Ａ）对小鼠保护性免疫力的影响。 Ｓｊ３１／３２ 蛋白＋ Ｐ Ａ Ｏ 组小鼠减虫率为３７５５％ ，肝减卵率为６７０２％ ； Ｓｊ３１／３２ 蛋白组小鼠减虫率为２１１８％ ， 肝减卵率为 ４９０３％ ； Ｓｊ３１／３２ 蛋白＋ Ｆ Ｃ Ａ 组小鼠减虫率为 ２４０２％ ， 肝减卵率为５２２４％ 。结果提示， Ｓｊ３１／３２ 蛋白辅以 Ｐ Ａ Ｏ 佐剂的减虫作用优于 Ｓｊ３１／３２ 辅以 Ｆ Ｃ Ａ 的减虫作用（ Ｐ＜ ００５），且明显强于单纯 Ｓｊ３１／３２ｋ Ｄａ 蛋白的保护性免疫作用（ Ｐ＜ ００１）。

应用日本血吸虫成虫31/32KD抗原诊断血吸虫病

采用IHA和ELISA对纯化的日本血吸虫成虫31/32KD抗原与虫卵可溶性抗原的诊断特异性和敏感性进行比较。结果表明,前者的特异性高,检测正常人血清未见假阳性反应,与肝吸虫或肺吸虫病人血清无交叉反应;治后一年的阴转率达70％,故疗效考核价值较高。二种抗原的敏感性无显著差异。

日本血吸虫可溶性虫卵抗原38kDa分子Dipstick快速诊断模式的初步建立

目的 建立简便的血吸虫病Ｄｉｐｓｔｉｃｋ快速诊断比方法 以纯化的日本血吸虫虫卵可溶性抗原（ＳＥＡ）３８ｋＤａ分子为诊断抗原，以胶体金标记的鼠抗人ＩｇＧ为二抗，建立 Ｄｉｐｓｔｉｃｋ快速诊断体系；检测日本血吸虫病人血清，急性期３７例、慢性期３０例，正常人５２例，肝吸虫病人血清３０例。结果 所测得的阳性率分别为９４．６％、８６．７％、１．９％、０％．伯论 以 ＥＡ ３８ｋＤａ纯化分子建立的血吸虫病Ｄｉｐｓｔｉｃｋ快速诊断法具有较好的敏感性和特异性，且简便快捷。

日本血吸虫可溶性虫卵抗原38kDa分子的纯化及诊断价值的初步评估

[目的 ]探讨日本血吸虫虫卵可溶性抗原 (SEA) 38k Da分子诊断血吸虫病的应用价值。 [方法 ]用 SDS-PAGE配合电渗洗脱技术分离纯化了诊断靶抗原 SEA38k Da,并经 SDS- PAGE和 Western blot鉴定 ;将 SEA38k Da分子和 SEA用于 EL ISA法检测日本血吸虫病患者血清 ,急性期 31例、慢性期 31例 ,正常人 6 0例 ,华支睾吸虫病患者血清 30例 ,并殖吸虫病患者血清 30例。 [结果 ]SEA38k Da分子抗原和 SEA所测得的阳性率分别为90 .3%、90 .3%、1.7%、0、0和 90 .3%、83.9%、3.3%、0、0。将 SEA 38k Da分子和 SEA在 EL ISA中的 P/N比值进行比较 ,经 t检验 ,发现在检测急性血吸虫病患者 ,慢性血吸虫病患者和正常人血清时 ,两者间的 P/N比值在 3组间差异均有显著性意义 (P值均 <0 .0 0 1) ;SEA 38k Da分子在检测患者血清时的 P/N比值显著高于 SEA,而检测正常人血清时的 P/N比值显著低于 SEA。 [结论 ]纯化 SEA38k Da具有较好的敏感性和特异性 。