兔抗鼠TGF-β1抗体对日本血吸虫尾蚴cDNA文库的免疫学筛选

目的为获得日本血吸虫(Schistosomajaponicum,Sj)转化生长因子β1(TGF-β1)基因的部分或全长cD-NA序列,同时验证用针对某一蛋白的抗体筛选表达文库是否可以得到相应蛋白对应的基因序列。方法采用兔抗鼠TGF-β1血清,对Sj尾蚴cDNA表达文库进行免疫学筛选,对阳性克隆进行PCR扩增后,将大于500bp的克隆进行复筛,对复筛阳性的克隆进行测序和生物信息学鉴定。结果对大约106个噬菌斑进行了初筛,共获得7个阳性克隆;经过PCR扩增后,其中有4个克隆大于500bp,复筛获得3个持续阳性克隆;对测序后的阳性克隆进行生物信息学鉴定,得到的3个克隆均与日本血吸虫辅酶Q10氧化还原酶(SjCHGC)基因具有高的同源性(Blastn分值都大于200)。结论SjCHGC蛋白与兔抗鼠TGF-β1抗体的反应为交叉反应,用抗某一蛋白的抗体筛选表达文库得到相应蛋白的基因序列的方法不一定可行。

日本血吸虫尾蚴cDNA文库的免疫学筛选及EST序列的分析

目的为获得日本血吸虫(Schistosoma japonicum,Sj)转化生长因子β1(TGF-β1)基因的部分或全长cDNA序列,同时验证用针对某一蛋白的抗体筛选表达文库是否可以得到相应蛋白对应的基因序列。方法采用兔抗鼠TGF-β1血清,对Sj尾蚴cDNA表达文库进行免疫学筛选,对阳性克隆进行PCR扩增后,将大于500bp的克隆进行复筛,对复筛阳性的克隆进行测序和生物信息学鉴定。结果对大约106个噬菌斑进行了初筛,共获得7个阳性克隆;经过PCR扩增后,其中有4个克隆大于500bp,复筛获得3个持续阳性克隆;对测序后的阳性克隆进行生物信息学鉴定,得到的三个克隆均与日本血吸虫辅酶Q10氧化还原酶(SjCHGC)基因具有高的同源性(Blastn分值都大于200)。结论SjCHGC蛋白与兔抗鼠TGF-β1抗体的反应为交叉反应,用抗某一蛋白的抗体筛选表达文库得到相应蛋白的基因序列的方法不一定可行。

日本血吸虫童虫cDNA文库的免疫学筛选及阳性克隆的初步鉴定

目的 免疫法筛选日本血吸虫 (Schistosomajaponicum ,S j) 15d肝期童虫cDNA表达文库 ,并进行鉴定 ,以获得S j疫苗候选抗原分子。方法 采用紫外线照射致弱尾蚴免疫的兔血清 ,对S j中国大陆株 15d肝期童虫cDNA文库进行免疫学筛选 ,选取部分阳性克隆进行插入片段的核苷酸序列分析 ,将结果通过Internet送入NCBIGenBank进行同源性比较 ,并将发现的新基因送入GenBank登录。结果 对大约 10 4个噬菌斑进行了初筛 ,共获得 4 9个阳性克隆 ,复筛了其中的 12个克隆 ,获得 8个持续阳性反应克隆。对 6个克隆的核苷酸序列测定及同源性分析表明 ,2个为编码S j线粒体的基因 ,另外 4个为S j未知基因 ,新基因序列已被GenBank接受 ,并获得进入编号。 结论 从S j肝期童虫cDNA文库中筛选到一批S j基因 ,其中部分为未知基因 ,为血吸虫新的疫苗候选分子的研究提供了材料。

紫外线致弱尾蚴免疫兔血清筛选日本血吸虫童虫cDNA文库

目的筛选紫外线致弱尾蚴中起免疫保护作用的抗原分子,分析其主要表位,为血吸虫病疫苗研究提供新的候选抗原。方法以紫外线照射致弱尾蚴免疫兔血清筛选日本血吸虫童虫cDNA文库,对阳性克隆插入片段的核苷酸进行序列分析,并利用软件Antheprot对所筛基因编码的抗原分子进行表位预测。结果经三轮筛选,共获20个阳性克隆,序列同源性分析表明其中有5种已知基因(GST、副肌球蛋白、肌球蛋白、钙离子激活蛋白和3-磷酸甘油醛脱氢酶),6种未知基因,软件分析显示不同抗原分子分别具有多个不同的抗原表位。结论获得的阳性克隆插入基因片段可能为潜在的日本血吸虫病疫苗分子,可能是多抗原、多表位在照射致弱尾蚴中起免疫保护作用。

日本血吸虫特异性抗原基因的筛选和EST序列测定

目的 筛选和鉴定日本血吸虫特异性抗原基因。方法 采用日本血吸虫病流行区对再感染具有抵抗力的个体混合血清 ,对 Sjc DNA文库进行免疫学筛选 ,对获得的阳性克隆 c DNA插入片段进行 PCR鉴定和 PCR直接序列分析 ,通过互联网将获得的 EST序列送入 NCBI Gen Bank进行同源性检索 ,并将发现的未知基因 EST序列送入 NCBI db EST,以获得 EST编号和 Gen Bank进入编号。结果 通过对大约 2 .5× 10 4个噬菌体斑的免疫学筛选 ,获得了 5个阳性克隆 ,PCR直接序列分析表明 ,在这 5个阳性克隆中 ,1个为编码 Sj GST的基因克隆 ,另外 4个为 S.j未知抗原基因克隆 ,其 EST序列已被 Gen Bank接受 ,并获得进入编号。结论 应用对再感染具有抵抗力的个体混合血清 ,从 Sjc DNA文库中筛选到 4个日本血吸虫未知抗原基因重组克隆 。