Immunization of mice with cells from juvenile worms of Schistosoma japonicum provides immunoprotection against schistosomiasis

To validate the protective efficacy against schistosomiasis by immunization with cells from juvenile Schistosoma japonicum in a murine model; to analyze possible factors related to protection, in this study, two independent repeated vaccination trials were performed. After three subcutaneous vaccinations, in trial one, in the absence of adjuvant, primary juvenile worm cells (pJCs) from S. japonicum induced remarkable average reductions in worm burden (54.3%), liver eggs per gram (LEPG) load (59.8%) as well as egg granulomas size (66.5%) compared to PBS control group (P【0.01), which were significantly higher than those elicited by fractions of juvenile worm cells (JCFs) or fractions of juvenile worms (JWFs) (P【0.05). Non-cell components of worms (WNCs) showed no significant protection. In trial two, compared to PBS control group, significant protective effect was also observed for cultured juvenile worm cells (cJCs) from S. japonicum with 58.4% worm reduction; 68.1% LEPG reduction (P【0.01). However, cultured adult worms cells (cACs) showed significantly higher worm burden (P【0.05); egg burden (P【0.01) when compared to cJCs. Immunological analysis of trial two revealed that cJCs engendered a Th1-biased mixed Th1/Th2 type of immune response while cACs elicited a Th2-type response. Our data indicated that immunization with both primary; cultured cells from S. japonicum juvenile worms provided high immunoprotection, for which the physical character of immunogens, stage-specific parasite; the type of immune response induced might be responsible, suggesting that vaccination with whole cells from S. japonicum larvae is a promising approach to produce protective immunity against schistosomiasis.

日本血吸虫成虫培养细胞的超微结构观察

报告日本血吸虫成虫培养细胞的超微结构。在透射电镜下日本血吸虫成虫培养细胞呈多角形、圆颗粒形、三角扇形和鞭毛形等多种形状 ,其中以多角形为主。细胞表面光滑 ,或有乳头状突起、微绒毛和微饮泡等。胞质内有不同数量的线粒体、内质网、核糖体和糖原颗粒等分布 ,高尔基复合体很少或无 ;其中线粒体超微结构的变化可以作为评判培养条件优劣的一个指标。核常呈圆形 ,核膜为一单位膜 ,核孔清晰 ;核内具较丰富的异染色质 ,核膜内缘常有块状异染色质分布 ;核仁圆形。不同来源的细胞具不同的内部特征 ,生殖细胞内核质比例较高 ,胞质内具许多大小不等的囊泡和不同类型的皮质颗粒 ;卵黄细胞的典型特征是胞质中存在由高电子密度颗粒组成的卵黄球、卵黄滴 ;焰细胞的胞质中具纤毛束 ;神经细胞内具丰富的圆形或椭圆形突触小泡。可识别来源的这些培养细胞中卵黄细胞的数量最多 ,神经细胞的数量最少。

日本血吸虫成虫体外传代培养细胞的生物学鉴定

本研究结果显示:血吸虫成虫细胞在体外培养中呈半悬浮聚集生长状态,4代内的培养细胞及冻存复苏细胞存活率达90%,并在各代培养中均可见细胞分裂相;传5代细胞的染色体核型为8对16条。超微结构既观察到形态正常细胞,也可见形态异常细胞。表明1640-40特定培养基对血吸虫成虫中的部分细胞体外传代培养获得成功。

日本血吸虫成虫细胞培养条件的初步研究

本文报道日本血吸虫成虫细胞培养条件的初步研究.结果表明:日本血吸虫的成虫细胞,在合成培养基RPMI-1640和5%的小牛血清、台成培养基TC-199和10%或20%的小牛血清培养液中,在附加常量抗菌素、pH值为7.2—7.4、培养温度为36℃一37℃条件下,其存活时间均可超过150d.另外,成虫细胞在未加抗菌素或附加一定量(常量或两倍于常量)抗菌素的培养液中的存活天数,没有明显差别.

日本血吸虫童虫培养细胞的超微结构观察

本文报道日本血吸虫童虫培养细胞的超微结构。透射电镜下，日本血吸虫童虫的培养细胞可分为圆颗粒形、鞭毛形、三角扇形、多角形和不规则形等，其中以圆颗粒形为主；它们一般呈高核质比例，核多呈圆形或椭圆形，异染色质常聚集成块状；胞质中含有丰富的游离核糖体、散在的线粒体，还有内质网、糖原颗粒等；不同组织来源的培养细胞按其各自的特征，可划分为生殖细胞、焰细胞、神经细胞、肥大细胞、肌肉细胞。

日本血吸虫童虫培养细胞SOD和MDA动态变化的研究

目的：观察日本血吸虫童虫细胞在体外培养过程中超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）和丙二醛（ＭＤＡ）含量的动态变化，探讨培养细胞的退化过程。方法：应用邻苯三酚自氧化法及硫代巴比妥酸法分别测定童虫细胞在培养０－５４ｄ过程中ＳＯＤ和ＭＤＡ含量的变化。结果：在培养第１２ｄＳＯＤ出现一个高峰，以后一直处于低平状态。ＭＤＡ在培养第１８ｄ和第４８ｄ分别各有一个高峰，其后均逐渐降低。结论：日本血吸虫童虫培养细胞呈逐步退化过程。

日本血吸虫培养细胞SDH、AKP和ACP的组织化学观察

目的 探讨日本血吸虫成虫培养细胞琥珀酸脱氢酶 (SDH)、碱性磷酸酶 (AKP)和酸性磷酸酶 (ACP)的组织化学变化。方法 应用组织化学染色方法显示日本血吸虫成虫培养细胞SDH、AKP和ACP。结果 日本血吸虫成虫培养细胞均具SDH、AKP、ACP活性 ,体积较大的细胞在胞膜附近和鞭毛细胞的鞭毛部位SDH活性最强 ;圆颗粒细胞、三角扇形细胞及合胞体的AKP活性细胞质较细胞核弱 ,团簇状排列的细胞主要分布在细胞质 ,而鞭毛形细胞则集中于细胞核和鞭毛部位 ;ACP的活性均较强 ,尤其是体积较大的培养细胞 ,活性部位集中分布在核周或弥散分布在细胞质中。结论 日本血吸虫培养细胞SDH、AKP和ACP的组化染色可做为简便易行、快速敏感的细胞培养条件优劣的评价指标。

甲基硝基亚硝基胍对日本血吸虫成虫培养细胞磷酸酶影响的研究

目的 研究甲基硝基亚硝基胍 (MNNG)对日本血吸虫成虫培养细胞碱性磷酸酶 (AKP)和酸性磷酸酶 (ACP)活性的影响。方法 将虫龄 2 6 d的日本血吸虫成虫细胞接种于小盖玻片上 ,在RPMI- 16 40含 2 0 %小牛血清附加常量抗生素的常规培养基中培养第 7天时 ,随机分为实验组和对照组 ,实验组用含浓度为 3μg/ ml MNNG的常规培养基处理 48h,对照组用不含 MNNG的常规培养基处理同样时间 ,随后换用常规培养基培养 3周 ,当再换用含 5 %小牛血清的培养基培养 1周时 ,分别用 Gomori钙钴法和 Gom ori硫化铅法对两组培养细胞进行 AKP和 ACP细胞化学染色 ,用Olym pus BH- 12显微镜观察并拍照 ,用 HPIAS- 2 0 0 0图像分析仪测量其含量 ,并作统计分析。结果 实验组培养细胞的 AKP、ACP活性明显高于对照组培养细胞的活性 (P<0 .0 1)。结论 MNNG能增强日本血吸虫成虫培养细胞 AKP、ACP的活力 ,对培养细胞有促生长或 /和诱导其转化的作用。

日本血吸虫成虫培养液中氨基酸及葡萄糖含量的动态变化

目的 观察培养过程中日本血吸虫成虫细胞培养液中氨基酸 (AA)、葡萄糖 (Gluc)及甘油三酯 (TG)含量的动态变化。方法 用氨基酸自动分析仪、自动生化分析仪分别测定培养液在培养 0～ 6d过程中AA、Gluc及TG含量变化。结果 精氨酸 (Arg)、苏氨酸 (Thr)、蛋氨酸 (Met)、赖氨酸 (Lys)及Gluc含量有不同程度下降 ;天门冬氨酸 (Asp)、丙氨酸 (Ala)及游离氨 (Amm)有明显上升 ;TG变化不明显。结论 在日本血吸虫成虫细胞培养液中适当增加Arg、Thr、Met、Lys和Gluc ,同时减少Asp和Ala的含量 。

甲基硝基亚硝基胍诱导日本血吸虫成虫培养细胞增殖的研究

将培养第 5天的日本血吸虫成虫培养细胞在含甲基硝基亚硝基胍 (MNNG)终浓度分别为 0 (对照 )、1、2、3、4、6、9μg/ml的附加 2 0 %小牛血清及常量抗生素的RPMI 16 40培养基中分别处理 2 4h、36h、48h ;随后 ,换用含 2 0 %小牛血清及常量抗生素的RPMI 16 40培养基培养 ;3d后 ,改用含 5 %小牛血清及常量抗生素的RPMI 16 40培养基继续培养 ,每天在OlympusIM倒置显微镜下观察。用浓度为 6 μg/ml、9μg/ml的MNNG处理的日本血吸虫成虫培养细胞在处理后 3天左右大片脱落 ,残留的少量细胞在换用 5 %小牛血清及常量抗生素的RPMI 16 40培养后逐渐死亡 ;用 1、2、3、4μg/ml浓度MNNG处理后的日本血吸虫成虫培养细胞 ,生长良好 ,与对照组相比 ,培养细胞的体积变大 ,分裂细胞增多 ,尤以 3μ/ml的MNNG处理48h的试验组最为明显 ,并观察到转化灶 ,但传代培养没有成功。结果表明在一定程度上 ,MNNG能够诱导日本血吸虫成虫培养细胞出现转化灶 ,并发生分裂。

日本血吸虫成虫培养细胞SDH和LDH细胞化学研究

目的 研究日本血吸虫成虫培养细胞琥珀酸脱氢酶 (SDH)和乳酸脱氢酶 (LDH)含量、分布及变化规律 ,了解日本血吸虫成虫培养细胞的能量代谢类型。方法 将虫龄 2 6d的日本血吸虫成虫细胞接种于小盖玻片上 ,培养于RPMI- 16 4 0含2 0 %小牛血清附加常量抗生素的培养基中 ,定时运用Pearson法进行SDH和LDH染色 ,用Olympus-BH2 显微镜观察并拍照 ,用HPIAS - 2 0 0 0图像分析仪测量其含量 ,并作统计分析。结果 日本血吸虫成虫培养细胞均具有SDH和LDH活性 ,两者均分布在细胞质内。培养 1d细胞的SDH和LDH活性最强 ,随着培养时间延长 ,其活性逐渐减弱 ,其中SDH活性下降较快 ,培养 5d大部分细胞SDH活性已极弱 ;而LDH活性下降则较缓 ,培养 5 6d细胞仍具LDH活性。结论 体外培养的日本血吸虫成虫细胞的能量代谢类型与成虫相似 ,既存在三羧酸循环需氧型呼吸链 ,也具有无氧糖酵解 ,但以无氧糖酵解为主。

PHA诱导日本血吸虫成虫培养细胞增殖的研究

研究PHA对日本血吸虫成虫培养细胞的促增殖作用。方法用浓度为333．3ug／ml的PHA处理日本血吸虫成虫培养细胞24h，在光镜和电镜下观察培养细胞的增殖情况。结果在光镜下发现在老化的培养细胞中间出现一些类似于淋巴母细胞样的新细胞；在光镜和扫描电镜下观察到有呈哑铃状的成对细胞；在透射电镜下观察到有细胞核膜消失，染色质变成粗颗粒状．中心粒一分为二，两中心粒之间还有纺锤丝牵引；还观察到处于分裂早期的细胞，核中染色质浓缩成四块状，核膜有部分消失、结论PHA对日本血吸虫成虫培养细胞有一定的促增殖作用。

日本血吸虫卵黄培养细胞超微结构动态的研究

从超微结构水平研究日本血吸虫卵黄细胞培养的动态。在体外培养过程中，卵黄细胞对外界环境的改变比日本血吸虫的其它体细胞更加敏感。随着培养时间的延长，卵黄细胞发生不同程度的变性，成熟卵黄细胞比未成熟卵黄细胞先发生变性。变性主要表现在核和胞质的电子密度降低；卵黄球相互融合，或卵黄球与膜之间的空隙逐步增大，最终卵黄球从中释放出来，变成裸露体；脂滴数目增多，体积增大；粗面内质网扩大和囊泡变，其上的核糖体脱颗粒等。由此认为，未成熟卵黄细胞在体外培养过程中超微结构的变化可以作为评价培养条件优劣的一个指标。

日本血吸虫成虫培养细胞糖细胞化学的研究

目的 :研究日本血吸虫成虫培养细胞内的糖类物质。方法 :将 32d虫龄的日本血吸虫成虫制成细胞悬液 ,接种在小盖玻片上 ,置含 2 0 %小牛血清附加常量抗生素的RPMI 16 4 0培养基中培养 ;至培养第 6d ,用高碘酸雪夫 (PAS)法显示培养细胞中的糖类物质 ;阿新蓝 PAS法显示培养细胞中的酸性粘多糖 ;用淀粉酶处理后的PAS染色以鉴定细胞内的糖原。在Olympus BH2 显微镜下观察 ,统计细胞类型 ,拍照 ;HPIAS 2 0 0 0图像分析仪测定含量 ,统计分析不同细胞类型间的差异。结果 :日本血吸虫成虫培养细胞的类型不同 ,所含的糖类成分有所不同 ,有较多培养细胞内既有糖原 ,也有酸性粘多糖 ,以及中性粘多糖、粘蛋白、糖蛋白、糖脂等其它糖类物质 ;大多数细胞几乎不含糖原和酸性粘多糖 ;另有少数细胞仅含糖原和酸性粘多糖 ,以糖原为主 ,极少数细胞以酸性粘多糖为主。结论 :日本血吸虫成虫培养细胞内既含糖原 ,也含酸性粘多糖 ,以及中性粘多糖、粘蛋白、糖蛋白。

甲基硝基亚硝基胍对日本血吸虫成虫培养细胞骨架作用的研究

目的 通过观察 N-甲基 - N-硝基 - N-亚硝基胍 (MNNG)诱导日本血吸虫培养细胞后骨架的改变 ,研究 MNNG对培养细胞转化、增殖的作用。方法 将日本血吸虫成虫培养细胞接种于小盖玻片上 ,培养 1周时用浓度为 3mg/ L 的 MNNG处理 48h,然后用 RPMI- 16 40含 2 0 %小牛血清附加常量抗菌素的培养基培养 2周 ,再换用 RPMI- 16 40含 5 %小牛血清的培养基继续培养 ,用考马斯亮兰染色法和鬼笔环肽荧光染色法显示培养细胞骨架。结果 MNNG诱导后 ,在培养第 4、5周时部分培养细胞骨架排列紊乱 ,微丝集聚于细胞边缘。结论 MNNG有一定诱导日本血吸虫成虫培养细胞转化。

日本血吸虫童虫培养细胞超微结构动态变化的研究

随着培养时间的延长，日本血吸虫童虫培养细胞的超微结构发生一系列渐进性变化，主要表现在：核中异染色质含量逐渐增加，由０ｄ时的显著少于常染质转变为５４ｄ时的高于常染色质；线粒体逐渐变性，嵴由清晰变为模糊以至消失，基质电子密度降低，最终成为空泡；内质网由环状变为短管状、囊泡状，最后消失。日本血吸虫童虫培养细胞中线粒体和内质网超微结构的这些变化，可以用来判断培养条件的优劣；而从染色质的一系列变化推断，０～１８ｄ是诱导培养细胞发生增殖的最佳时期。

β-巯基乙醇与肝基质对日本血吸虫培养细胞的影响

目的研究β鄄巯基乙醇与肝基质对日本血吸虫培养细胞的影响。方法将18d虫龄的日本血吸虫童虫细胞联合法接种于小盖玻片上。实验被随机分为4个组,分别为对照组、β鄄巯基乙醇组、肝基质组、β鄄巯基乙醇+肝基质联合处理组。培养第7天,对各组细胞进行核仁组织区相关嗜银蛋白(AgNORs)与乳酸脱氢酶(LDH)细胞化学染色,并结合图像分析比较4个组培养细胞的AgNORs水平及LDH活性。结果与对照组比较,肝基质组、β鄄巯基乙醇组、β鄄巯基乙醇+肝基质联合处理组培养细胞的AgNORs颗粒数目、颗粒面积与核面积百分比、平均光密度以及LDH的平均光密度等4个参数均有不同程度升高(P<0.01)。其中,以β鄄巯基乙醇组培养细胞的4个参数升高最显著,β鄄巯基乙醇+肝基质联合处理组次之,肝基质组升高幅度最小。统计学分析显示,除β鄄巯基乙醇+肝基质联合处理组与β鄄巯基乙醇组之间的AgNORs及LDH平均光密度两两比较差异无显著意义(P>0.05),其余组间3个参数两两比较差异均有显著意义(P<0.01或P<0.05)。结论β鄄巯基乙醇与肝基质均能促进日本血吸虫培养细胞的增殖、代谢,但β鄄巯基乙醇的作用比肝基质显著;二者联合使用对培养细胞的增殖无协同作用。

细胞外基质促日本血吸虫培养细胞贴壁作用的研究

目的 研究肝、肺生物基质及鼠尾胶三种细胞外基质 (ECM )对日本血吸虫培养细胞的促贴壁作用。方法 灌注法获取 2 1d虫龄的日本血吸虫虫体 ,冷消化法制备细胞悬液 ,将密度为 2× 10 6/ml的细胞悬液分别接种于均匀铺敷三种基质及未铺敷基质 (对照 )的各组培养瓶中进行培养 ,定时计数贴壁细胞数 ,计算贴壁率。结果 随着培养时间从 8h— 4 8h ,各组日本血吸虫细胞的贴壁率逐渐增高 ,4 8h后下降。同一培养时间 ,基质不同 ,细胞的贴壁率不同。培养 4 8h时细胞的贴壁率 ,鼠尾胶组、肝与肺基质组分别为 6 3 2 7%、4 8 95 %、4 5 36 % ;统计学处理发现 ,它们之间差异显著 ;鼠尾胶组与肝、肺基质组比较 ,p <0 0 1;肝与肺基质组之间比较 ,p <0 0 5 ;对照组与各基质组比较 ,均具显著差异 (p <0 0 1)。 结论 ECM对日本血吸虫培养细胞具有明显的促贴壁作用。其中 ,鼠尾胶对日本血吸虫细胞的促贴壁作用最强 ,其次是肝生物基质 ;肺生物基质的促贴壁作用相对较弱 ,但也强于对照组 (p <0 0 1)。

肝基质 鼠尾胶对日本血吸虫培养细胞AKP和ACP影响的研究

目的 研究肝基质、鼠尾胶对日本血吸虫成虫培养细胞碱性磷酸酶(AKP)和酸性磷酸酶(ACP)活性的影响,筛选适合日本血吸虫细胞培养的基质。方法 将虫龄28d的日本血吸虫成虫细胞,接种于预先铺敷有肝基质和鼠尾胶的小盖玻片上常规培养,未铺敷基质者作对照。运用酶细胞化学方法,分别于培养5、14、21、35d对日本血吸虫成虫培养细胞进行AKP和ACP染色,显微镜下观察并拍照,图像分析仪测定其含量,并作统计分析。结果 铺敷的基质不同,培养细胞的AKP和ACP活性不同。AKP、ACP着色深浅均按对照组、鼠尾胶组、肝基质组依次加深。定量分析显示,培养14d内,肝基质组与鼠尾胶组细胞AKP活性明显高于对照组(肝基质组P<0.01;鼠尾胶组P<0.05);两基质组培养细胞之间差异也有显著性(P<0.05)。培养21d后,肝基质组细胞AKP活性分别高于鼠尾胶组和对照组(P<0.01);后两者培养细胞之间的AKP活性无明显差异(P>0.05)。培养5d细胞的ACP活性,肝基质组与鼠尾胶组明显高于对照组(P<0.05),两基质组相互比较差异无显著性(P>0.05);培养14d后,各组之间两两比较均有差异(P<0.05),肝基质组培养细胞ACP活性最强,鼠尾胶组次之,对照组最弱。结论 肝基质较为适合日本血吸虫培养细胞的存活与生长。

日本血吸虫培养细胞整装内质网膜系统形态及基质对其结构的影响

目的 研究日本血吸虫培养细胞整装内质网膜系统的三维结构及细胞外基质 (ECM)对其的作用。方法 用高锰酸钾作固定剂 ,制备日本血吸虫培养细胞整装内质网膜系统标本 ,扫描电镜下观察。结果 日本血吸虫培养细胞的内质网膜系统由膜性小管、小泡相互连接构成小型扁囊样网络结构。基质中细胞的内质网膜系统较对照组发达、丰富 ;基质的种类不同 ,培养细胞内质网膜系统的形态各异。鼠尾胶中细胞多由膜性小管和小泡构成 ,其网眼数目较少 ,可见伪足样结构 ;伪足较短 ,也由膜性小管或小泡构成管囊状网络。肺基质中细胞几乎均为小管 ,小泡极少 ;网眼和伪足数目增多 ,伪足呈针状。肝基质中细胞的内质网膜系统与肺基质中的相似 ,但网眼和伪足数目更多 ,伪足细长 ,呈纤维状。结论 ECM可明显影响日本血吸虫培养细胞的内质网膜系统形态 ;ECM的种类不同 。