肺吸虫和血吸虫总RNA的提取及电泳分析

目的为构建肺吸虫ｃＤＮＡ文库，获得目的重组抗原，用以肺吸虫病的诊断，而制备卫氏肺吸虫的总ＲＮＡ。方法采用改进的一步法（Ａ和Ｂ）提取了卫氏肺吸虫成虫的总ＲＮＡ，同时提取了日本血吸虫成虫及其虫卵、小鼠肝脏的总ＲＮＡ。结果人睾丸组织的总ＲＮＡ经琼脂糖凝胶电泳，观察到方法Ａ所提取的肺吸虫、血吸虫及其虫卵的总ＲＮＡ在凝胶上只有一条略大于１８Ｓ的条带。用方法Ｂ提取的肺吸虫以及血吸虫的总ＲＮＡ则出现２条条带，其中１条色淡，并略小于２８Ｓ，另１条色深，并略大于１８Ｓ。结论肺吸虫的Ｌ－ｒＲＮＡ中也存在切口现象。

日本血吸虫虫卵及其总RNA的快速分离与纯化

本文采用匀浆──分级过滤──中速低温离心──反复洗涤法，在3个小时内从感染免肝组织中分离、纯化具有生物活性的高纯度日本血吸虫虫卵。该虫卵用改进的异硫氰酸胍──酚──氯仿一步法抽提，可在一个半小时内提取出分子完整的RNA。此两种方法经济简便，快速易行，效率高。

日本血吸虫成虫RNA的快速分离纯化

应用异硫氨酸胍-酚-氯访一步法提取日本血吸虫总RNA，在1h左右即可提取纯度高、完整性较好的RNA。该方法简单易行，既经济又省时，对来源不易的少量组织尤为有效。通过对血吸虫成虫RNA变性琼脂糖凝胶电泳，观察到日本血吸虫大亚基rRNA存在体内缺口现象，随核糖体小亚基RNA一道电泳迁移。

日本血吸虫未成熟虫卵26-28kDa抗原的分离与纯化

本文采用超凝胶AcA柱层析方法和SDS-PAGE结合凝胶洗脱方法等,分离纯化了日本血吸虫未成熟虫卵可溶性抗原(SIEA)26-28kDa组分.SDS-PAGE、免疫印迹分析(EITB)和银染色等证明,采用该方法分离纯化的26-28kDa抗原纯度高,有较强的免疫活性,并证明该抗原组分在SIEA中含量丰富.纯化的SIEA26-28kDa可作为抗日本血吸虫生殖产卵和抗卵胚发育侯选抗原,用于抗病保护性免疫的研究.

日本血吸虫天然抗原分子的柱层析分离纯化与鉴定

目的分离纯化日本血吸虫成虫(AWA)和未成熟虫卵(SIEA)可溶性抗原中的单一蛋白,为血吸虫病免疫诊断、预防提供新的抗原分子。方法柱层析分离纯化成虫和未成熟虫卵可溶性抗原,SDS-PAGE及银染色进行分析鉴定。结果得到了三种不同大小血吸虫分子抗原AWA18000u,SIEA42000u,SIEA130000u。结论实验证明柱层析法是一种快速分离纯化血吸虫单一组分抗原简单而有效的方法。

快速分离和纯化感染6wk兔肝组织中的日本血吸虫虫卵

从感染兔肝组织中分离、纯化具有生物活性的日本血吸虫虫卵，是分子生物学研究的基本需要。本文采用匀浆—分级过滤—中速低温离心沉淀—反复洗涤法，获得高纯度、具有活性的虫卵，回收率达71％，毛蚴孵出率达90％以上。本方法经济简便、快速易行、效率高、适用于大批量操作。

日本血吸虫可溶性虫卵抗原38kDa分子的纯化及诊断价值的初步评估

[目的 ]探讨日本血吸虫虫卵可溶性抗原 (SEA) 38k Da分子诊断血吸虫病的应用价值。 [方法 ]用 SDS-PAGE配合电渗洗脱技术分离纯化了诊断靶抗原 SEA38k Da,并经 SDS- PAGE和 Western blot鉴定 ;将 SEA38k Da分子和 SEA用于 EL ISA法检测日本血吸虫病患者血清 ,急性期 31例、慢性期 31例 ,正常人 6 0例 ,华支睾吸虫病患者血清 30例 ,并殖吸虫病患者血清 30例。 [结果 ]SEA38k Da分子抗原和 SEA所测得的阳性率分别为90 .3%、90 .3%、1.7%、0、0和 90 .3%、83.9%、3.3%、0、0。将 SEA 38k Da分子和 SEA在 EL ISA中的 P/N比值进行比较 ,经 t检验 ,发现在检测急性血吸虫病患者 ,慢性血吸虫病患者和正常人血清时 ,两者间的 P/N比值在 3组间差异均有显著性意义 (P值均 <0 .0 0 1) ;SEA 38k Da分子在检测患者血清时的 P/N比值显著高于 SEA,而检测正常人血清时的 P/N比值显著低于 SEA。 [结论 ]纯化 SEA38k Da具有较好的敏感性和特异性 。

日本血吸虫成虫核糖核酸提取方法的研究

本文应用酸性异硫氰酸胍-酚-氯仿一步法从日本血吸虫成虫提取核糖核酸(RNA),并与胍盐/热酚法、胍盐/氯化铯超速离心法的提取结果进行比较。3种方法所分离的RNA,在纯度及完整性上均较满意,但其得率以异硫氰酸胍-酚-氯仿一步法为高,此法简单易行,既经济又省时,对来源不易的少量组织,尤为相宜。

高纯度日本血吸虫卵的分离及活性鉴定

目的探讨制备高纯度、高生物活性的的日本血吸虫卵分离方法。方法将匀浆后的血吸虫感染的兔肝组织悬液分级过滤,再将滤液离心,去除组织碎片,分离的虫卵再次经过325目分样筛过滤,收集筛上虫卵,最后将收集的虫卵用密度1.070的Percoll分离液梯度离心,吸取下层Percoll液中的纯化虫卵;显微镜观察分离虫卵的纯度,吖啶橙染色观察虫卵的死活,环卵沉淀试验鉴定虫卵的分泌活性。结果每个肝脏获得约1g左右的虫卵,分离的虫卵纯度高,吖啶橙染色和环卵沉淀试验结果显示,分离的活虫卵比例高、生物活性好。结论该虫卵分离方法操作简单、用时短、效果好,分离的虫卵完全满足各种研究的需要。

日本血吸虫虫卵核糖核酸的提取及鉴定

本文采用异硫氰酸胍－酚－氯仿一步法成功地提取了日本血吸虫虫卵总RNA，琼脂糖电泳结果呈现18S一条主带，与日本血吸虫成虫RNA的电泳结果一致。日本血吸虫虫卵RNA的抽提成功为虫卵cDNA库的构建以及虫卵有效抗原的筛选奠定了基础。

日本血吸虫未成熟虫卵的制备

从感染兔肝组织中分离、纯化具有生物活性的日本血吸虫虫卵,是分子生物学研究的基本需要。为改进日本血吸虫(Schistosoma japonicum)未成熟虫卵的制备方法,将感染血吸虫尾蚴30d的家兔剖杀后,于无菌条件下摘取肝脏,经匀浆、分级过滤、中速低温离心沉淀、反复洗涤,再将粗虫卵置于0.25%胰蛋白酶消化液中消化4h,当混杂组织被消化成单个细胞后,用PBS(pH 7.2)稀释,以360目分样筛过筛,截留未成熟虫卵,获得大量高纯度、具有活性的虫卵,毛蚴孵出率可达80%以上。此法经济简便、快速易行、效率高,适于大批量操作。