日本血吸虫未成熟虫卵26-28kDa抗原的分离与纯化

本文采用超凝胶AcA柱层析方法和SDS-PAGE结合凝胶洗脱方法等,分离纯化了日本血吸虫未成熟虫卵可溶性抗原(SIEA)26-28kDa组分.SDS-PAGE、免疫印迹分析(EITB)和银染色等证明,采用该方法分离纯化的26-28kDa抗原纯度高,有较强的免疫活性,并证明该抗原组分在SIEA中含量丰富.纯化的SIEA26-28kDa可作为抗日本血吸虫生殖产卵和抗卵胚发育侯选抗原,用于抗病保护性免疫的研究.

日本血吸虫天然抗原分子的柱层析分离纯化与鉴定

目的分离纯化日本血吸虫成虫(AWA)和未成熟虫卵(SIEA)可溶性抗原中的单一蛋白,为血吸虫病免疫诊断、预防提供新的抗原分子。方法柱层析分离纯化成虫和未成熟虫卵可溶性抗原,SDS-PAGE及银染色进行分析鉴定。结果得到了三种不同大小血吸虫分子抗原AWA18000u,SIEA42000u,SIEA130000u。结论实验证明柱层析法是一种快速分离纯化血吸虫单一组分抗原简单而有效的方法。

快速分离和纯化感染6wk兔肝组织中的日本血吸虫虫卵

从感染兔肝组织中分离、纯化具有生物活性的日本血吸虫虫卵，是分子生物学研究的基本需要。本文采用匀浆—分级过滤—中速低温离心沉淀—反复洗涤法，获得高纯度、具有活性的虫卵，回收率达71％，毛蚴孵出率达90％以上。本方法经济简便、快速易行、效率高、适用于大批量操作。

日本血吸虫可溶性虫卵抗原38kDa分子的纯化及诊断价值的初步评估

[目的 ]探讨日本血吸虫虫卵可溶性抗原 (SEA) 38k Da分子诊断血吸虫病的应用价值。 [方法 ]用 SDS-PAGE配合电渗洗脱技术分离纯化了诊断靶抗原 SEA38k Da,并经 SDS- PAGE和 Western blot鉴定 ;将 SEA38k Da分子和 SEA用于 EL ISA法检测日本血吸虫病患者血清 ,急性期 31例、慢性期 31例 ,正常人 6 0例 ,华支睾吸虫病患者血清 30例 ,并殖吸虫病患者血清 30例。 [结果 ]SEA38k Da分子抗原和 SEA所测得的阳性率分别为90 .3%、90 .3%、1.7%、0、0和 90 .3%、83.9%、3.3%、0、0。将 SEA 38k Da分子和 SEA在 EL ISA中的 P/N比值进行比较 ,经 t检验 ,发现在检测急性血吸虫病患者 ,慢性血吸虫病患者和正常人血清时 ,两者间的 P/N比值在 3组间差异均有显著性意义 (P值均 <0 .0 0 1) ;SEA 38k Da分子在检测患者血清时的 P/N比值显著高于 SEA,而检测正常人血清时的 P/N比值显著低于 SEA。 [结论 ]纯化 SEA38k Da具有较好的敏感性和特异性 。

高纯度日本血吸虫卵的分离及活性鉴定

目的探讨制备高纯度、高生物活性的的日本血吸虫卵分离方法。方法将匀浆后的血吸虫感染的兔肝组织悬液分级过滤,再将滤液离心,去除组织碎片,分离的虫卵再次经过325目分样筛过滤,收集筛上虫卵,最后将收集的虫卵用密度1.070的Percoll分离液梯度离心,吸取下层Percoll液中的纯化虫卵;显微镜观察分离虫卵的纯度,吖啶橙染色观察虫卵的死活,环卵沉淀试验鉴定虫卵的分泌活性。结果每个肝脏获得约1g左右的虫卵,分离的虫卵纯度高,吖啶橙染色和环卵沉淀试验结果显示,分离的活虫卵比例高、生物活性好。结论该虫卵分离方法操作简单、用时短、效果好,分离的虫卵完全满足各种研究的需要。

简便快速分离日本血吸虫未成熟虫卵方法的研究

目的探讨一种快速的日本血吸虫卵分离纯化方法,解决虫卵常规分离法存在耗费时间长、纯度不高及结构破坏等问题。方法在前人的工作基础上,对虫卵分离方法进行改进,采用反复过筛、加胰酶消化并结合离心去上清的方法。结果在短时间内获得了纯净的虫卵,所得虫卵结构完整,虫卵得率显著提高。结论该方法适宜于血吸虫卵的快速分离、纯化,为虫卵抗原制备及其抗原分析、鉴定提供了条件。

用AcA54超凝胶柱层析纯化日本血吸虫抗原

应用AcA54超凝胶柱层析分离纯化日本血吸虫成虫和虫卵可溶性抗原,分离后的成虫和虫卵可溶性抗原峰型基本相同,但成虫在2个主峰之间比虫卵多1个明显的小峰。成虫第1个峰型的高低与高速离心时的上悬聚集物有关。经ELISA检测柱层析后2种抗原的血清学活性,其分布基本一致。银染色结果表明,此类分离纯化尤适于小于30KD组分的分离,在过柱后可以一次性达到生化纯度。

日本血吸虫虫卵及其总RNA的快速分离与纯化

本文采用匀浆──分级过滤──中速低温离心──反复洗涤法，在3个小时内从感染免肝组织中分离、纯化具有生物活性的高纯度日本血吸虫虫卵。该虫卵用改进的异硫氰酸胍──酚──氯仿一步法抽提，可在一个半小时内提取出分子完整的RNA。此两种方法经济简便，快速易行，效率高。

日本血吸虫未成熟虫卵的制备

从感染兔肝组织中分离、纯化具有生物活性的日本血吸虫虫卵,是分子生物学研究的基本需要。为改进日本血吸虫(Schistosoma japonicum)未成熟虫卵的制备方法,将感染血吸虫尾蚴30d的家兔剖杀后,于无菌条件下摘取肝脏,经匀浆、分级过滤、中速低温离心沉淀、反复洗涤,再将粗虫卵置于0.25%胰蛋白酶消化液中消化4h,当混杂组织被消化成单个细胞后,用PBS(pH 7.2)稀释,以360目分样筛过筛,截留未成熟虫卵,获得大量高纯度、具有活性的虫卵,毛蚴孵出率可达80%以上。此法经济简便、快速易行、效率高,适于大批量操作。

日本血吸虫感染鼠肝脏肉芽肿细胞分离条件的优化及分离效果的流式检测

目的优化日本血吸虫感染小鼠肝脏肉芽肿细胞的分离方法,以获得足量和纯净的肉芽肿活细胞,流式检测确定细胞的分离效果。方法血吸虫尾蚴经皮感染C57BL/6小鼠,于感染后6周、12周剖杀小鼠,取肝脏,采用Ⅳ型胶原酶两步消化法分离肉芽肿细胞,并对胶原酶浓度及消化时间进行探索;进行流式检测,分析粒细胞、淋巴细胞和CD_4^+T的分离效果。结果感染6周小鼠肝脏的Ⅳ型胶原酶最佳浓度为0.25mg/mL,最佳消化时间为30min(第一步)和30min(第二步),流式细胞仪检测该条件可获得较高比例CD_4^+T细胞;而感染12周小鼠的肝脏,Ⅳ型胶原酶最佳浓度为0.3mg/mL,消化时间分别为40、30min,流式检测此条件可获得更高比例的CD_4^+T细胞。结论急慢性肝脏肉芽肿细胞的分离所需Ⅳ型胶原酶的浓度不同;采用本研究优化的胶原酶两步消化法可获得大量、纯净的肉芽肿活细胞,并且细胞表面标志保存完好,为研究日本血吸虫肝脏肉芽肿的细胞机制提供重要材料。