日本血吸虫感染中循环抗原动态变化及其机制研究

目的：探讨日本血吸虫感染中循环抗原动态变化及其机制。方法：感染日本血吸虫的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠淋巴结Ｂ细胞和小鼠骨髓瘤细胞（ＳＰ２／０株）融合，制备抗血吸虫循环抗原不同表位的单克隆抗体组合后为探针，检测日本血吸虫病患者和正常人血清；晚期血吸虫病患者脾血和外周血；感染日本血吸虫兔和小鼠的门脉血和外周血。结果：获得９种抗日本血吸虫单克隆抗体，将其中抗不同抗原表位的单抗优化组合后使用，检测抗原的敏感性可提高４－８倍。用组合单抗建立的夹心ＥＬＩＳＡ和ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测慢性血吸虫病的敏感性分别为７４％和８４．２％，特异性分别为９６．１％和９５．７％。通过小鼠和家兔门脉血和外周血以及人的脾血和外周血循环抗原的比较研究表明，门脉血中的抗原水平明显高于外周血。结论：用组合单抗较用一种单抗提高检出率。ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测的不仅是循环抗原，同时还检测到免疫复合物，因此影响疗效考核。

抗血吸虫成虫表膜抗原单克隆抗体检测循环抗原及/或免疫复合物的实验研究

本文报告用单克隆抗体检测血吸虫感染兔血清中循环抗原及/或免疫复合物的实验结果.以血吸虫成虫盐水浸液抗原ACSE免疫BALB/c小鼠,取其脾脏与SP2/0骨髓瘤细胞融合获得抗成虫表膜的单克隆抗体8SE_4。此抗体经DE_(52)柱层析提纯后制成HRP-8SE_4结合物.血清样本与HRP-8SE_4作用后加入PEG(mw·6000)沉淀免疫复合物,然后加入底物OPD显色,于492nm读数,OD值即反映血循环中抗原及/或免疫复合物的量。实验结果表明5只重感染兔(接种尾蚴15O0～2000条)于感染后6wk可见OD值明显升高,达到感染前的1.9～4.5倍。5只轻感染兔接种尾蚴10～500条亦于感染6wk后OD值明显上升,至感染后8wk达高峰,此后至11wk剖杀时仍维持在较高水平.5轻感染兔检虫数为4～326条,未见虫荷与检测结果有明显相关。本实验结果提示感染兔血清中有循环表膜抗原及/或其复合物存在。至于检测该抗原能否用于考核治疗效果,有待进一步研究。

多抗—单抗双抗体夹心ELISA检测血吸虫循环抗原的研究

用抗血吸虫成虫抗原的多克隆抗体为捕捉抗体，抗虫卵抗原的单克隆抗体MG2为标记抗体的双抗体夹心ELISA检测血吸虫循环抗原。对慢性血吸虫病的阳性检出率为95．4％（83／87）；检测正常人血清222份，11例假阳性（50％）；对17例肺吸虫病人和40例其他寄生虫病人的交叉反应率分别为11．7％和2．5％；检测血吸虫病中度流行区人群622名和低度流行区人群1099名，阳性率分别为22．5％和4．6％。对血吸虫病疗效考核的结果表明，治后3月循环抗原阴转率为542％、6月为70．0％、1年为977％，表明本检测系统能区分过去感染和现症感染。

单克隆抗体夹心ELISA定量检测日本血吸虫循环抗原

目的反映日本血吸虫病活动性感染程度，探讨建立定量测定循环抗原的方法。方法筛选和制备单克隆抗体，将其进行优化组合，建立双抗体夹心ELISA，计算标准曲线，测试检测能力，检测样本。结果获6个抗日本血吸虫单克隆抗体，经优化组合试验，选择其中3个抗日本血吸虫虫卵TCA可溶性抗原和成虫TCA可溶性抗原进行搭配，用于检测日本血吸虫病患者血清中循环抗原效果较理想。检测慢性血吸虫病118例，阳性61例，阳性率51．7％；急性患者30例，全部阳性；正常人187例，5例阳性，特异性97．3％。单盲法检测一批血清，结果也较满意。法论定量检测日本血吸虫病患者血清中循环抗原，对提示活动性感染的程度和疫苗保护作用的评估具有一定的应用价值。

日本血吸虫感染动物血清中循环抗体（CAb）及循环抗原（CAg）水平的动态研究

应用膜片固相抗原免疫酶测定法（Ｄ－ＩＥＡ）和ＥＬＩＳＡ检测日本血吸虫感染家兔血清中ＣＡｂ和ＣＡｇ水平时，高峰分别在感染后１０～１２周和１０周，ＣＡｂ和ＣＡｇ水平均与感染度和感染期密切相关。实验结果表明，感染宿主血清中ＣＡｂ／ＣＡｇ水平的消长规律并不一致，宿主在感染中期（感染后１０～２０周）显示ＣＡｂ检测为优势，在感染早期（感染后１０周内）则以ＣＡｇ检测为优势。本项研究可为选用适宜的ＣＡｂ／ＣＡｇ检测途径，提供依据。应用改进方法Ｄ－ＩＥＡ检测血吸虫感染者血清中特异性抗体时，可取得满意效果。

日本血吸虫感染动物血清中CAb CAg及CIC水平的动态

本文对感染10条与50条单、双性血吸虫的4组家兔,在感染后2—18wk,连续检测了血吸虫CAb、CAg及CIC水平,并与正常对照兔进行了对比.结果表明,CAg在感染早期显示高水平,CAb在感染中期呈现明显高峰,而CIC在感染后期也有较高水平.阐明了血吸虫感染宿主血清中CAb、CAg和CIC水平的消长规律,也提示了感染宿主CAb、CAg及CIC水平与感染度和单、双性感染有关.

吡喹酮治疗前后感染日本血吸虫兔循环29／43KD分子的水平和意义

本文获得两株抗日本血吸虫２９／４３ＫＤ循环抗原的单克隆抗体，并用该抗体建立了一种检测该循环抗原的双抗体夹心法。我们应用该法研究了感染日本血吸虫兔在吡喹酮治疗前后，血清中２９／４３ＫＤ分子的水平变化。结果表明，２９／４３ＫＤ分子于感染后３～４周内开始出现于外周血循环中，于吡喹酮治疗后３～５周内即从血清中逐渐消逝。此提示该分子可能是早期诊断日本血吸虫病和评价化疗效果的一种有价值的血清标志物。

小鼠脾内注射日本血吸虫病患者尿液循环抗原制备单克隆抗体

目的： 探讨用一种快速免疫方法制备抗人尿液日本血吸虫循环抗原的单克隆抗体。方法： 将日本血吸虫病患者尿液用１５％ 三氯醋酸提取循环抗原后采用脾内直接注射法免疫 Ｂ Ａ Ｌ Ｂ／ｃ小鼠制备单克隆抗体。结果： 建立了 ２ 株分泌抗人尿日本血吸虫循环抗原的单克隆细胞株２ Ｅ６ 及２ Ｂ１１，两者免疫球蛋白鉴定均属 Ｉｇ Ｍ 类， Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ测得单抗对尿液循环抗原（ Ｉ Ｈ Ｕ Ｃ Ａｇ），效价分别为２．５６×１０５ 和６．４×１０４ 。琼脂双扩散试验显示２ 株单抗与正常人尿三氯醋酸提取物均不能形成沉淀线，而２ Ｅ６ 与日本血吸虫病患者尿液循环抗原能产生沉淀线。分别用２ Ｂ１１ 和２ Ｅ６ 腹水为捕捉抗体， Ｈ Ｒ Ｐ Ｈ１１ 为酶标抗体检测 １２ 例急性血吸虫病患者尿液，依次为６ 例和３ 例阳性，８ 例正常人尿液均为阴性。结论： 用血吸虫病患者尿液提取的循环抗原经脾脏注射免疫 Ｂ Ａ Ｌ Ｂ／ｃ 小鼠制备单克隆抗体用于检测日本血吸虫病患者尿液中循环抗原是可行的。

日本血吸虫三类循环抗原和循环抗体对感染家兔疗效考核价值的研究

采用三株分别定位于日本血吸虫表皮膜、肠道上皮和虫卵的单克隆抗体A6，SJ31／32和SE9作为捕获抗体建立检测三类循环抗原的斑点酶联免疫吸附实验（DOT－ELISA）方法，并利用该方法和普通ELISA分别观察了日本血吸虫感染家兔血清中三类循环抗原和IgG抗体的动态变化情况。结果表明：感染日本血吸虫家免在经砒喹酮治疗之后的第8周，睦相关抗原，可溶性虫卵抗原和肠相关抗原的转阴率分别为80％，70％和20％，而减后第18周全部转阴；IgG抗体一直维持较高水平。因此，MAA和SEA具有改好的疗效考核价值，GAA的疗效考核效果较差，IgG抗体不具有疗效考核作用。

血吸虫循环免疫复合物解离后抗原及抗体的免疫反应性研究

将血吸虫循环免疫复合物（ＣＩＣ）用新方法解离后，特异性测定其上的抗原（Ａｇ）及抗体（Ａｂ），并以可溶性血吸虫卵抗原（ＳＥＡ）、多克隆、单克隆抗体（Ｐｃａｂ、ＭｂＡｂ）用间接法对比测定感染者血清中循环抗原（ＣＡｇ）及循环抗体（ＣＡｂ）通过１０２例日本血吸虫病人及４５名健康人ＣＩＣ解离后和血清的特异性对比测定结果表明，ＣＩＣ解离后的Ａｇ及Ａｂ水平（ＯＤ均值）测定，显示满意的特异性和敏感性，与用抗ＳＥＡ－和抗ＣＣＡ－ＭｃＡｂ测定ＣＡｇ水平（ＯＤ均值）相比较，具有优于或相似的检测效果，采用抗ＳＥＡ－ＰｃＡｂ和ＳＥＡ测定血谱中的ＣＡｇ及ＣＡｂ水平（ＯＤ均值）时，均取得很好效果，且其ＣＡｇ水平均显著地高于用２种ＭｃＡｂ检测ＣＡｇ的水平。上述制剂测定ＣＩＣ解离后及血清中的Ａｇ、Ａｂ及ＣＡｇ、ＣＡｂ，可起着互补诊断的效果。本项研究结果可为今后选用适宜的血吸虫病血清学诊断的检测途径，提供重要的参考依据。

应用单克隆抗体ELISA检测包虫病人循环免疫复合物的研究

应用抗包虫单克隆抗体F1建立了检测包虫病人循环免疫复合物和解离抗原的ELISA法。102例包虫病人中CIC阳性率为50％(51/102),其中手术前检出率为62.62％(33/53),手术后检出率为36.73％(18/49)。二者差异显著(P<0.005)。用PEG沉淀的免疫复合物经尿素解离后检测包虫抗原的阳性率为58.82％(60/102)。CIC与解离抗原二者累积阳性率达到86.27％(88/102)。表明在包虫病人中CIC的存在是普遍的。F1单克隆抗体ELISA法在检测包虫病人CIC和解离抗原上有极高的敏感性,因而证明F1单克隆抗体所识别的抗原表位是形成CIC的主要抗原成分。在IgG型CIC阳性的血清中解离抗原的检出率仅为48.1％(23/51)。可能是由于IgG抗体的高度亲和力,由其形成的CIC解离效率低。在IgG-CIC阴性血清中,检出解离抗原的阳性率高达72.5％(37/51),证明了在相当部分包虫病人血清中可能存在着IgE和IgM型CIC。解离抗原阳性率高表明这类CIC容易解离。在17例特异性IgG抗体阴性的包虫病人中CIC阳性者10例(58.82％),解离抗原阳性者9例(52.94％),二者累积阳性率为76.47％(13/17)。说明CIC与解离抗原的检测在IgG抗体阴性的包虫病人诊断上有实际意义。

抗日本血吸虫SEA特异性IgY应用于循环抗原检测的研究

本研究应用抗日本血吸虫可溶性虫卵抗原（SEA）的鸡卵黄免疫球蛋白（IgY）建立敏感、特异的检测循环抗原的双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）。用SEA皮下多点注射法免疫海蓝鸡，水稀释法制备IgY抗体，以辣根过氧化物酶标记纯化的IgY抗体（IgY·E）和兔抗IgG抗体（IgG—E）分别作为检测抗体，IgY抗体和兔抗IgG抗体分别作为捕捉抗体，组合建立4种双抗体夹心酶联免疫吸附试验法（ELISA）检测循环抗原，分析各种方法检测SEA的灵敏度，并平行检测急性日本血吸虫病人血清6份、慢性日本血吸虫病人血清29份、华支睾阳性者血清9份、卫氏并殖吸虫阳性者血清15份、弓形虫阳性病人血清7份、正常体检者血清118份。结果显示，以IgY为捕捉抗体或检测抗体，可检测到浓度为7．5ng／mL的SEA，灵敏度是基于IgG的夹心ELISA的4倍。4种夹心ELISA法检测急血病人血清阳性率均为100％，检测正常人血清的特异性为99．1％；与弓形虫、华支睾吸虫阳性者血清无交叉反应；-而检测慢血病人血清和并殖吸虫阳性者血清时，以IgY为捕捉抗体的2种ELISA（IgY＋IgY—E、IgY＋IgG—E）阳性率均分别为79．3％、6．7％；而IgG为捕捉抗体时，以IgY为检测抗体（IgG＋IgY—E）时的阳性率分别为75．8％、6．7％，以IgG为检测抗体（IgG＋IgG-E）时的阳性率分别为72．4％、13．3％，以IgY作为捕捉抗体的检测效果优于IgG。基于IgY抗体的双抗体夹心ELISA检测循环抗原具有良好的敏感性和特异性，可用于日本血吸虫病的免疫诊断。

日本血吸虫4类循环抗原和抗体的检测对感染兔疗效考核价值研究

目的观察感染家兔在治疗前后血清中循环抗原和循环抗体的动态变化情况。方法采用日本血吸虫4株单克隆抗体3D8，5C7，SM21－3及SM38m（靶抗原分别为肠相关多糖蛋白抗原、肠相关蛋白抗原、虫卵抗原和成虫表膜抗原）作为捕获抗体，用斑点酶联免疫吸附试验（Dot－ELISA）检测4类循环抗原，与常规ELISA检测IgG抗体比较。结果感染日本血吸虫家兔在经硝唑咪治疗后1～2个月，循环抗原基本转阴，而IgG抗体一直维持较高水平。结论循环抗原具有较好的疗效考核价值，IgG抗体不具有疗效考核作用。

日本血吸虫31/32kDa循环免疫复合物的检测及其在疾病诊断中的作用

检测血吸虫循环免疫复合物（CIC）有助于提高疾病的检出率。利用抗血吸虫单克隆抗体H226和碱性磷酸酶标记的羊抗人IgG（Fc）作捕捉ELISA，检测日本血吸虫病患者血清中CIC，其阳性检出率为92．2％，其中，EPG＜100的病人阳性检出率为90．0％，EPG＞100的病人阳性检出率为95．5％，两者无显著性差异。由于羊抗人IgGFc段能与CIC中人IgG的Fc段特异性结合，因此不仅省去了常规分离CIC的步骤，而且有助于提高试验的敏感性和特异性。

日本血吸虫循环免疫复合物中抗原的鉴定

用低浓度ＰＥＧ（ＭＷ６０００）提取的日本血吸虫感染兔血清中循环免疫复合物（ＣＩＣ）直接免疫家兔，制备抗ＣＩＣ兔血清。采用酶联免疫印迹技术（ＥＩＴＢ）分析鉴定日本血吸虫ＣＩＣ中抗原成份。结果表明，ＣＩＣ中成虫及其排泄分泌物源性抗原成份有１７种，虫卵源性抗原成份有５种。用ＩＦＡＴ方法分析ＣＩＣ中抗原成份定位于成虫表膜及肠腔上皮。

日本血吸虫单克隆抗体的筛选及初步应用的探讨

目的 :寻找更有效的检测血吸虫CAg探针。方法 :经 5次细胞融合 ,获得 17株高效价抗血吸虫肠相关和虫卵抗原McAb。分别标记辣根过氧化物酶后 ,采用直接Dot ELISA对健康人、急感和慢感进行了双盲平行检测。结果 :诊断效能分别在 88.0和 96 .1之间 ,其中最好的一株Jouden指数为 0 .87。结论

6种日本血吸虫免疫诊断试剂在传播阻断地区检测效果比较

目的评价日本血吸虫免疫诊断试剂在传播阻断地区的检测效果。方法在四川省仁寿县选择64例血吸虫循环抗原阳性者和327名流行村常住居民为检测对象,采用1种血吸虫循环抗原试剂和5种血吸虫抗体试剂,共6种免疫诊断试剂分别进行检测,并对检测结果进行分析。结果 5种(试剂2~试剂6)血吸虫抗体试剂对64例循环抗原阳性者血清检出率分别为42.19%、43.75%、54.69%、35.94%、32.81%,在327名流行村常住居民中循环抗原试剂检出率为2.14%;5种(试剂2~试剂6)抗体试剂检出率分别为55.96%、40.98%、57.19%、26.61%、15.60%。在常住居民6种免疫诊断试剂中除试剂2与试剂4的检出率差异无统计学意义(P>0.05),其他试剂间的检出率两两比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论部分血吸虫免疫诊断试剂在传播阻断地区检出率存在明显差异,需要提高血吸虫现症感染免疫诊断方法的敏感性、特异性和标准化,积极探索适宜传播阻断地区的诊断方法及其组合模式。

家兔日本血吸虫循环抗原及其特异性免疫复合物的动态观察

应用单抗酶联免疫吸附试验（ＥＬｌｓＡ），对日本血吸虫感染兔肠相关蛋白糖阳极循环抗原（ＧＡｓｃＡＰ）及其特异性循环免疫复合物（ＧＡｓｃＡｐ－ＩＣ），进行了动态检测。中度（２００尾蚴／兔）和轻度（５０尾蚴／兔）感染家兔可在感染后第２周和第４周检出ＧＡＳＣＡＰ；第４和第６周检出ＧＡＳＣＡＰ－ＩＣ。ＧＡＳＣＡＰ和ＧＡＳＣＰ－ＩＣ的升降趋势，呈显著的伴随关系。感染兔在接受一次性吡喹酮治疗后，ＧＡＳＣＡＰ和ＧＡＳＣＡＰ－ＩＣ很快阴转，表明日本血吸虫病ＧＡＳＣＡＰ和ＧＡＳＣＡＰ－ＩＣ的检测具有早期诊断和疗效考核意义。

组合单克隆抗体多表位检测日本血吸虫循环抗原的研究

目的探讨抗肠相关抗原单克隆抗体(单抗)JPG5和抗虫卵可溶性抗原单抗JPS6、JPG5+JPG1组合和JPS6+JPG1组合对血吸虫循环抗原(CAg)的诊断效能。方法采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)对慢性血吸虫病、急性血吸虫病、晚期血吸虫病、卫氏并殖吸虫病、华支睾吸虫病、乙型肝炎患者血清,以及治疗前、治疗后半年、治疗后1年的慢性血吸虫病疗效考核血清进行CAg单位点和多位点检测。结果JPG5检测慢性血吸虫病患者的敏感性和特异性分别为74.3%和96.8%,JPS6分别为78.7%和95.3%;两株单抗与卫氏并殖吸虫病、华支睾吸虫病及乙型肝炎患者血清的交叉反应率分别为15.2%、15.6%、3.2%和21.5%、15.6%、16.0%。JPG5检测治疗后1年的慢性血吸虫病患者血清CAg阴转率高于JPS6。JPG5+JPG1组合检测慢性血吸虫病患者的敏感性和特异性分别为80.1%和93.7%,JPS6+JPG1组合分别为73.5%和96.1%;两种组合与卫氏并殖吸虫病、华支睾吸虫病及乙型肝炎患者血清交叉反应率分别为21.5%、15.6%、18.0%和22.8%、15.6%、16.0%。两种组合多位点检测治疗后1年的慢性血吸虫病患者血清CAg阴转率分别为66.7%和45.5%。结论JPG5、JPS6可用作CAg检测的备选探针。JPG5+JPG1组合与JPS6+JPG1组合对CAg的诊断效能相近;较之单位点检测,多位点检测敏感性无明显提高。