大容量天然人源Fab抗体库的构建及日本血吸虫抗独特型抗体的筛选、鉴定

目的:构建大容量天然人源Fab抗体库,筛选全人源日本血吸虫抗独特型抗体并进行初步鉴定。方法:采集15位健康成人的骨髓淋巴细胞,构建天然人源Fab抗体库。并以日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)及成虫抗原(SWAP)免疫鼠血清IgG包板进行筛选,经ELISA鉴定后,对阳性克隆进行可溶性表达。结果:构建了2×109大容量天然人源Fab抗体库,经核苷酸序列分析,证实插入片段为Fab基因片断。经过6轮筛选后,从富集的次级抗体库中随机挑取80个克隆,用ELISA法鉴定得到4个可与免疫鼠血清(Ab1)特异性结合,而不与SEA及SWAP结合的单克隆抗体(C12、C19、D1、D2),其中C12经SDS-PAGE电泳显示插入片断正确。结论:成功构建了大容量天然人源Fab抗体库,并从中获得人源日本血吸虫抗独特型抗体C12,为研制用于人体血吸虫病免疫预防的抗独特型抗体疫苗奠定了基础。

日本血吸虫谷胱甘肽S－转移酶小鼠免疫试验

用谷胱甘肽琼脂糖亲和层析柱纯化中国大陆株日本血吸虫成虫谷胱甘肽Ｓ－转移酶（ＧＳＴ）。把纯化的ＧＳＴ结合福氏性剂免疫了二批达ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，获得了２９．５８～３２．７１％的减虫率和５２．９４～６８．１３％的粪便减卵率。ＥＬＩＳＡ试验表明免疫小鼠产生了体液免疫应答，免疫印迹试验（ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔｔｉｎｇ）显示日本血吸虫水溶性成虫抗原和ＧＳＴ抗原的２６、２８ｋＤ蛋白被免疫小鼠血清所识别。

日本血吸虫在小鼠体内不同发育时点的生长速度与蛋白组分差异

目的比较观察日本血吸虫发育中虫体在不同时点的生长速度和蛋白组分差异。方法选择昆明鼠人工感染日本血吸虫尾蚴,分别收集感染前和感染后第8、12、16、20、24和28d虫体;用MoticBA400病理图像处理系统及3.2分析软件采集虫体图象作形态观察和大小测量(包括水平面积、周长、长与宽);用SDS-PAGE平行分离各时点虫体蛋白,用图像分析软件QuantityOne4.4比较分析其区带差异。结果日本血吸虫感染昆明鼠后,发育中虫体在不同时点的生长速度不均衡,第8～12天的生长速度为最快,其他依次为12～16d、16～20d、20～24d、0～8d和24～28d的虫体;同一时点虫体间发育的个体差异也大,以12d后虫体较为明显。电泳分析7个不同时点的虫体蛋白区带显示:区带数在0、8、12、16、20、24和28d虫体中分别为27、30、33、32、31、36和29条,其中多数为相同分子量蛋白区带,但有些在蛋白表达量上有明显差异;各时点虫体特异性区带在0、8、12～24d和28d虫体中分别为7、4、8、3条,虫体特异性区带多为低表达量的条带。结论日本血吸虫童虫在小鼠体内的不同发育时点间存在着生长速度和蛋白组分的差异,其中以8～12d时段的虫体发育最快,两者间蛋白组分差异也较明显。

3种方法对日本血吸虫感染家兔的疗效评价

目的用聚合酶链反应(PCR)、酶联免疫吸附试验(ELISA)和环卵沉淀试验(COPT)3种方法评价吡喹酮治疗日本血吸虫感染家兔的疗效。方法家兔感染日本血吸虫尾蚴后7周和8周,分别给予吡喹酮治疗,治疗前后每周采血1次,分别用3种方法检测感染家兔治疗前后的血清DNA、IgG和环卵沉淀率(COPR)水平。结果ELISA检测法在动物模型治疗6个月后,其血清抗体仍维持在一定水平;COPT检测法于治疗后5个半月在家兔血清中找不到阳性虫卵;PCR法在治疗后3个月的家兔血清中未扩增出DNA。结论PCR法的疗效考核价值优于常规ELISA法和COPT法。

西咪替丁对青蒿琥酯抗日本血吸虫活性的影响

目的观察西咪替丁对青蒿琥酯抗日本血吸虫活性的影响.方法40只ICR小鼠随机分为A、B、C、D 4组,每组10只.D组为不用药对照组,A、B、C 3组于攻击感染后第7天开始肌注给药:A组单用青蒿琥酯,B组西咪替丁和青蒿琥酯联合用药,C组单用西咪替丁.于感染后46 d剖杀小鼠,并分别比较A组和B组、C组和D组的减虫率、减雌率、肝组织减卵率、雌虫子宫内减卵率.结果单用青蒿琥酯组和联合用药组的减虫率分别为82.33%、95.91%(P<0.05),减雌率分别为83.64%、97.44%(P<0.05),肝组织减卵率分别为99.87%、99.97%(P<0.05),雌虫子宫内减卵率分别为91.17%、98.89%(P<0.05).与对照组相比较,单用西咪替丁组的减虫率、减雌率、肝组织减卵率、雌虫子宫内减卵率分别为12.63%、14.11%、7.35%、7.22%(P>0.05).结论西咪替丁具有增强青蒿琥酯抗日本血吸虫活性的作用.