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日本血吸虫PA28亚单位蛋白的表达与鉴定、纯化及免疫反应性的评价
被引量:
1
1
作者
彭鸿娟
陈晓光
+1 位作者
李华
王春梅
《中国人兽共患病杂志》
CSCD
北大核心
2004年第3期183-185,189,共4页
目的 将亚克隆在pET32a(+)质粒上的日本血吸虫蛋白酶体激活因子PA2 8亚单位基因进行表达及蛋白纯化 ,并对表达产物用Western -blot及ELISA方法进行免疫反应性的评价。方法 将重组表达质粒 pET32a(+) -PA2 8转化入大肠杆菌BL2 1中 ,IPT...
目的 将亚克隆在pET32a(+)质粒上的日本血吸虫蛋白酶体激活因子PA2 8亚单位基因进行表达及蛋白纯化 ,并对表达产物用Western -blot及ELISA方法进行免疫反应性的评价。方法 将重组表达质粒 pET32a(+) -PA2 8转化入大肠杆菌BL2 1中 ,IPTG诱导表达后超声裂菌 ,离心后取上清进行SDS -PAGE ,观察融合蛋白的表达情况 ;用Ni-NTA柱子纯化目标蛋白 ;将SDS -PAGE后的蛋白从凝胶转移到PVDF膜上 ,分别用 6 -His抗体、日本血吸虫尾蚴感染 6周的兔血清及紫外照射减毒尾蚴免疫的兔血清作一抗进行免疫印迹 ,将纯化后的融合蛋白作为包被抗原 ,检测正常兔血清及感染兔血清 ,对该蛋白的免疫反应性作出评价。结果 重组菌株用IPTG诱导后于 4 8kDa处有一表达条带 ,该蛋白与硫氧还蛋白融合表达 ,带有 6 -His,用抗 6 -His抗体做免疫印迹有特异性的单一反应带 ,用尾蚴感染兔血清及紫外照射减毒尾蚴免疫的兔血清做免疫印迹 ,结果显示该目的蛋白带与以上多抗具有敏感特异的反应条带。ELISA的结果显示该蛋白与血吸虫感染兔血清具有较敏感特异的免疫反应性。结论 PA2 8蛋白与硫氧还蛋白融合表达后为可溶性蛋白且分子量约为 4 8kDa ,该蛋白与血吸虫感染兔血清及紫外照射减毒尾蚴免疫的兔血清具有较敏感特异的免疫反应性。
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关键词
日本血吸虫
PA28亚单位
蛋白
表达
鉴定
纯化
免疫反应性
评价
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职称材料
日本血吸虫腺苷酸激酶基因的表达及其重组蛋白免疫反应性的评价
2
作者
彭鸿娟
陈晓光
+1 位作者
李华
王春梅
《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第1期46-49,共4页
目的 将亚克隆入 pET3 2a( +)质粒的日本血吸虫腺苷酸激酶 (adenylatekinase ,AK )基因进行表达及蛋白纯化 ,并对表达产物的免疫反应性进行评价。 方法 将重组表达质粒 pET3 2a( +) AK转入宿主菌大肠埃希菌BL2 1,异丙基 β D 硫代...
目的 将亚克隆入 pET3 2a( +)质粒的日本血吸虫腺苷酸激酶 (adenylatekinase ,AK )基因进行表达及蛋白纯化 ,并对表达产物的免疫反应性进行评价。 方法 将重组表达质粒 pET3 2a( +) AK转入宿主菌大肠埃希菌BL2 1,异丙基 β D 硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导表达后超声裂菌 ,离心 ,取上清进行十二烷基硫酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE) ;将SDS PAGE后的蛋白转移至聚偏二氟乙烯 (PVDF)膜上 ,分别用 6 组氨酸 ( 6 His)抗体、日本血吸虫尾蚴感染6wk的兔血清及紫外照射减毒尾蚴免疫的兔血清为一抗进行蛋白质印迹试验 (Westernblotting) ;用金属Ni螯合物亲和层析树脂 (Ni NTA)层析柱纯化目标蛋白 ;以纯化后的融合蛋白为包被抗原 ,酶联免疫吸附测定 (ELISA)检测正常兔血清和血吸虫感染兔血清。 结果 重组菌用IPTG诱导表达后进行SDS PAGE ,于相对分子质量 (Mr) 40 0 0 0处见一特异表达带 ,与预期表达的融合蛋白大小相符 ;Western印迹分析显示该重组的融合蛋白带有预期的 6 His基团 ,且能与尾蚴感染兔血清及紫外照射减毒尾蚴免疫的兔血清发生特异性反应 ;ELISA结果显示纯化的重组AK蛋白可以特异识别血吸虫感染兔血清。 结论 AK基因在工程菌中以可溶性融合蛋白的形式得到表达 。
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关键词
日本血吸虫
腺苷酸激酶
基因表达
重组蛋白
免疫反应性
蛋白质印迹法
酶联免疫吸附测定
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职称材料
日本血吸虫M_r为8000钙结合蛋白基因的表达及其融合蛋白免疫反应性的评价
被引量:
1
3
作者
许行
彭鸿娟
陈晓光
《第一军医大学学报》
CSCD
北大核心
2003年第7期706-708,713,共4页
目的将亚克隆在pET32a(+)质粒上的日本血吸虫Mr为8 000钙结合蛋白(calcium-binding protein, CBP) 基因进行表达及蛋白纯化,并对表达产物用Western blotting 及ELISA方法进行免疫反应性的评价。方法将重组表达质粒pET32a(+)-CBP 转化入...
目的将亚克隆在pET32a(+)质粒上的日本血吸虫Mr为8 000钙结合蛋白(calcium-binding protein, CBP) 基因进行表达及蛋白纯化,并对表达产物用Western blotting 及ELISA方法进行免疫反应性的评价。方法将重组表达质粒pET32a(+)-CBP 转化入宿主菌BL21中,IPTG诱导表达后超声裂菌,离心后取上清进行SDS-PAGE,观察融合蛋白的表达情况;用金属Ni鏊合物亲和层析树脂(Ni-NTA)柱子纯化目标蛋白;将SDS-PAGE后的蛋白从凝胶转移到聚氟乙烯膜上,分别用6-组氨酸(6-His)抗体、日本血吸虫尾蚴感染6周的兔血清及紫外照射减毒尾蚴免疫的兔血清作一抗进行免疫印迹,将纯化后的融合蛋白作为包被抗原,ELISA法检测正常兔血清及感染兔血清,对该蛋白的免疫反应性作出评价。结果重组菌株用IPTG诱导后于Mr=29 000处有一表达条带,该蛋白与硫氧还蛋白融合表达,带有6-His基团, 用抗6-His抗体做免疫印迹有特异性的反应条带,而用尾蚴感染兔血清及紫外照射减毒尾蚴免疫的兔血清做免疫印迹都没有特异性的目标反应带出现,ELISA 的结果显示该蛋白与血吸虫感染兔血清没有免疫反应性。结论CBP蛋白与硫氧还蛋白融合表达后为可溶性蛋白且相对分子质量约为29 000,该蛋白与尾蚴感染兔血清及紫外照射减毒尾蚴免疫的兔血清均无免疫反应性。
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关键词
日本血吸虫
钙结合蛋白基因
基因表达
免疫反应性
ELISA
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职称材料
题名
日本血吸虫PA28亚单位蛋白的表达与鉴定、纯化及免疫反应性的评价
被引量:
1
1
作者
彭鸿娟
陈晓光
李华
王春梅
机构
第一军医大学寄生虫学教研室
出处
《中国人兽共患病杂志》
CSCD
北大核心
2004年第3期183-185,189,共4页
基金
联合国发展开发署 /世界卫生组织热带病研究和培训特别规划署资助 (IDNo .
A0 0 690A0 0 191)
文摘
目的 将亚克隆在pET32a(+)质粒上的日本血吸虫蛋白酶体激活因子PA2 8亚单位基因进行表达及蛋白纯化 ,并对表达产物用Western -blot及ELISA方法进行免疫反应性的评价。方法 将重组表达质粒 pET32a(+) -PA2 8转化入大肠杆菌BL2 1中 ,IPTG诱导表达后超声裂菌 ,离心后取上清进行SDS -PAGE ,观察融合蛋白的表达情况 ;用Ni-NTA柱子纯化目标蛋白 ;将SDS -PAGE后的蛋白从凝胶转移到PVDF膜上 ,分别用 6 -His抗体、日本血吸虫尾蚴感染 6周的兔血清及紫外照射减毒尾蚴免疫的兔血清作一抗进行免疫印迹 ,将纯化后的融合蛋白作为包被抗原 ,检测正常兔血清及感染兔血清 ,对该蛋白的免疫反应性作出评价。结果 重组菌株用IPTG诱导后于 4 8kDa处有一表达条带 ,该蛋白与硫氧还蛋白融合表达 ,带有 6 -His,用抗 6 -His抗体做免疫印迹有特异性的单一反应带 ,用尾蚴感染兔血清及紫外照射减毒尾蚴免疫的兔血清做免疫印迹 ,结果显示该目的蛋白带与以上多抗具有敏感特异的反应条带。ELISA的结果显示该蛋白与血吸虫感染兔血清具有较敏感特异的免疫反应性。结论 PA2 8蛋白与硫氧还蛋白融合表达后为可溶性蛋白且分子量约为 4 8kDa ,该蛋白与血吸虫感染兔血清及紫外照射减毒尾蚴免疫的兔血清具有较敏感特异的免疫反应性。
关键词
日本血吸虫
PA28亚单位
蛋白
表达
鉴定
纯化
免疫反应性
评价
Keywords
schistosoma japoniucm
PA28 subunit
expression
purification
western-blot
ELISA
分类号
R382.24 [医药卫生—医学寄生虫学]
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职称材料
题名
日本血吸虫腺苷酸激酶基因的表达及其重组蛋白免疫反应性的评价
2
作者
彭鸿娟
陈晓光
李华
王春梅
机构
第一军医大学病原生物学教研室
出处
《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第1期46-49,共4页
基金
联合国开发署 /世界银行 /世界卫生组织热带病研究
培训特别规划资助项目 (IDNo .A0 0 690A0 0 1 91 ) ~~
文摘
目的 将亚克隆入 pET3 2a( +)质粒的日本血吸虫腺苷酸激酶 (adenylatekinase ,AK )基因进行表达及蛋白纯化 ,并对表达产物的免疫反应性进行评价。 方法 将重组表达质粒 pET3 2a( +) AK转入宿主菌大肠埃希菌BL2 1,异丙基 β D 硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导表达后超声裂菌 ,离心 ,取上清进行十二烷基硫酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE) ;将SDS PAGE后的蛋白转移至聚偏二氟乙烯 (PVDF)膜上 ,分别用 6 组氨酸 ( 6 His)抗体、日本血吸虫尾蚴感染6wk的兔血清及紫外照射减毒尾蚴免疫的兔血清为一抗进行蛋白质印迹试验 (Westernblotting) ;用金属Ni螯合物亲和层析树脂 (Ni NTA)层析柱纯化目标蛋白 ;以纯化后的融合蛋白为包被抗原 ,酶联免疫吸附测定 (ELISA)检测正常兔血清和血吸虫感染兔血清。 结果 重组菌用IPTG诱导表达后进行SDS PAGE ,于相对分子质量 (Mr) 40 0 0 0处见一特异表达带 ,与预期表达的融合蛋白大小相符 ;Western印迹分析显示该重组的融合蛋白带有预期的 6 His基团 ,且能与尾蚴感染兔血清及紫外照射减毒尾蚴免疫的兔血清发生特异性反应 ;ELISA结果显示纯化的重组AK蛋白可以特异识别血吸虫感染兔血清。 结论 AK基因在工程菌中以可溶性融合蛋白的形式得到表达 。
关键词
日本血吸虫
腺苷酸激酶
基因表达
重组蛋白
免疫反应性
蛋白质印迹法
酶联免疫吸附测定
Keywords
schistosoma japoniucm
adenylate kinase
gene expression
purification protein
Western blotting
enzyme_linked immunosorbent assay(ELISA)
分类号
R383.24 [医药卫生—医学寄生虫学]
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职称材料
题名
日本血吸虫M_r为8000钙结合蛋白基因的表达及其融合蛋白免疫反应性的评价
被引量:
1
3
作者
许行
彭鸿娟
陈晓光
机构
第一军医大学寄生虫学教研室
出处
《第一军医大学学报》
CSCD
北大核心
2003年第7期706-708,713,共4页
基金
联合国发展开发署/世界银行/世界卫生组织热带病研究和培训特别规划署资助(A00690
A00191)~~
文摘
目的将亚克隆在pET32a(+)质粒上的日本血吸虫Mr为8 000钙结合蛋白(calcium-binding protein, CBP) 基因进行表达及蛋白纯化,并对表达产物用Western blotting 及ELISA方法进行免疫反应性的评价。方法将重组表达质粒pET32a(+)-CBP 转化入宿主菌BL21中,IPTG诱导表达后超声裂菌,离心后取上清进行SDS-PAGE,观察融合蛋白的表达情况;用金属Ni鏊合物亲和层析树脂(Ni-NTA)柱子纯化目标蛋白;将SDS-PAGE后的蛋白从凝胶转移到聚氟乙烯膜上,分别用6-组氨酸(6-His)抗体、日本血吸虫尾蚴感染6周的兔血清及紫外照射减毒尾蚴免疫的兔血清作一抗进行免疫印迹,将纯化后的融合蛋白作为包被抗原,ELISA法检测正常兔血清及感染兔血清,对该蛋白的免疫反应性作出评价。结果重组菌株用IPTG诱导后于Mr=29 000处有一表达条带,该蛋白与硫氧还蛋白融合表达,带有6-His基团, 用抗6-His抗体做免疫印迹有特异性的反应条带,而用尾蚴感染兔血清及紫外照射减毒尾蚴免疫的兔血清做免疫印迹都没有特异性的目标反应带出现,ELISA 的结果显示该蛋白与血吸虫感染兔血清没有免疫反应性。结论CBP蛋白与硫氧还蛋白融合表达后为可溶性蛋白且相对分子质量约为29 000,该蛋白与尾蚴感染兔血清及紫外照射减毒尾蚴免疫的兔血清均无免疫反应性。
关键词
日本血吸虫
钙结合蛋白基因
基因表达
免疫反应性
ELISA
Keywords
schistosoma japoniucm
/immunology
calcium-binding protein
gene expression
purification
ELISA
分类号
R392 [医药卫生—免疫学]
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题名
作者
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被引量
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1
日本血吸虫PA28亚单位蛋白的表达与鉴定、纯化及免疫反应性的评价
彭鸿娟
陈晓光
李华
王春梅
《中国人兽共患病杂志》
CSCD
北大核心
2004
1
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职称材料
2
日本血吸虫腺苷酸激酶基因的表达及其重组蛋白免疫反应性的评价
彭鸿娟
陈晓光
李华
王春梅
《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2004
0
下载PDF
职称材料
3
日本血吸虫M_r为8000钙结合蛋白基因的表达及其融合蛋白免疫反应性的评价
许行
彭鸿娟
陈晓光
《第一军医大学学报》
CSCD
北大核心
2003
1
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