细胞色素P450酶1A2 mRNA表达水平与氯氮平浓度及疗效关联性研究

目的探讨精神分裂症患者外周血单核细胞中CYP1A2mRNA表达水平与氯氮平疗效及血药浓度的关系。方法应用RT-PCR技术测定60例精神分裂症患者外周血单核细胞CYP1A2mRNA表达水平,临床症状和疗效的评价使用阳性和阴性症状量表(PANSS)和简明精神病量表(BPRS);氯氮平血药浓度监测采用反相高效液相色谱法测定。结果在实验第4周末、第8周末的氯氮平的血药浓度与CYP1A2 mRNA表达水平呈负相关(r分别为-0.389,-0.487,P<0.05)。第8周的阳性和阴性症状量表PANSS减分率和简明精神病量表BPRS减分率与CYP1A2 mRNA表达水平不存在相关关系。结论精神分裂症患者CYP1A2的mRNA表达水平与氯氮平的疗效无关联,与氯氮平的血药浓度呈负相关。

断奶仔猪小肠钠葡萄糖转运蛋白1和葡萄糖转运蛋白2 mRNA表达变化及饲粮添加谷氨酰胺对其的影响

本试验旨在研究仔猪断奶后小肠黏膜钠葡萄糖转运蛋白1（SGLT1）和葡萄糖转运蛋白2（GLUT2）mRNA表达的发育性变化规律及谷氨酰胺是否对SGLT1和GLuT2mRNA的表达产生影响。选择21日龄断奶的杜×长×大仔猪69头，断奶当天屠宰3头猪，其余66头随机分成2组，每组3个重复，每个重复11头仔猪。对照组饲喂基础饲粮（不添加谷氨酰胺），试验组饲喂基础饲粮＋1％谷氨酰胺。断奶后第3、5、7、14天每组分别屠宰3头。取十二指肠、空肠和回肠黏膜样品，通过荧光定量RT—PCR方法测定SGLT1和GLUT2 mRNA的表达量。结果表明：1）SGLT1和GLUT2 mRNA的表达量在不同肠段之间无显著差异（P〉0．05）。2）十二指肠、空肠中SGLT1 mRNA表达量在断奶后先降低，断奶后第3天开始升高，第14天达峰值，回肠SGLT1 mRNA表达量在断奶后先升高，断奶后第7天较低，第14天为峰值；GLUT2 mRNA在十二指肠和空肠中的表达量从断奶后第3～7天呈现持续上升的趋势，第7天达峰值，但在第14天降至断奶当天水平，回肠GLUT2 mRNA表达量在断奶后逐渐升高，第5天达峰值，而后逐渐回落至断奶当天水平。3）饲粮添加1％谷氨酰胺对SGLT1和GLUT2 mRNA表达量无显著影响。结果提示：断奶仔猪十二指肠、空肠和回肠SGLT1和GLUT2 mRNA表达量无显著差异，但均随断奶后的时间而变化，谷氨酰胺对SGLT1和GLUT2在转录水平上无显著影响。

中草药复方对断奶仔兔小肠发育及IL-2 mRNA表达量的影响

为了探讨中草药复方对断奶仔兔肠道发育及肠道免疫水平的影响,试验选取30日龄、体重相近且健康状况良好的断奶伊拉兔仔兔60只,公母各半,随机分为2组,每组3个重复,每个重复10只,对照组饲喂基础日粮,试验组饲喂基础日粮+1%中草药复方,预试期5 d,试验期30 d。试验结束后,取小肠制作石蜡切片,观察小肠组织结构;测定空肠消化酶活性及小肠白细胞介素2(interleukin-2,IL-2)mRNA表达量。结果表明:(使用中草药复方后,试验组十二指肠、空肠和回肠的绒毛高度均较对照组显著增加(P<0.05),空肠的隐窝深度显著降低(P<0.05),三段肠段的绒毛高度与隐窝深度比值均极显著升高(P<0.01)。)试验组淀粉酶、胰蛋白酶活性较对照组显著或极显著提高(P<0.05或P<0.01);糜蛋白酶活性也有所提高,但差异不显著(P>0.05)。试验组空肠和回肠IL-2 mRNA表达量较对照组显著升高(P<0.05);十二指肠IL-2 mRNA表达量有升高趋势,但差异不显著(P>0.05)。说明中草药复方能够有效促进仔兔小肠发育,并增强其肠道免疫力。

TNF-α促进HepG2肝细胞脂质积聚及其机制的初步研究

目的探讨肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)是否能够促进肝细胞脂质积聚,并对其机制进行初步探讨。方法将HepG2肝细胞分为空白对照组、单纯TNF-α组(TNF-α2ng/mL或20ng/mL)、软脂酸组(软脂酸0.08mmol/L或0.2mmol/L)及联合组(TNF-α2ng/mL联合软脂酸0.08mmol/L、TNF-α2ng/mL联合软脂酸0.2mmol/L、TNF-α20ng/mL联合软脂酸0.08mmol/L、TNF-α20ng/mL联合软脂酸0.2mmol/L),处理24h,应用化学酶促-比色法定量检测细胞内TG含量。进一步选取TNF-α20ng/mL和软脂酸0.08mmol/L,通过油红O染色观察HepG2细胞内脂质积聚情况;实时荧光定量PCR和Western blot检测HepG2细胞SREBP-1、FAS、ACCα的表达水平。结果①单纯TNF-α组TG含量[TNF-α2ng/mL组(0.344±0.093)μg/μg、TNF-α20ng/mL组(0.329±0.068)μg/μg]分别较空白对照组[(0.192±0.048)μg/μg]显著升高(P<0.05);联合组[TNF-α2ng/mL联合软脂酸0.08mmol/L组(0.451±0.096)μg/μg、TNF-α2ng/mL联合软脂酸0.2mmol/L组(0.821±0.257)μg/μg、TNF-α20ng/mL联合软脂酸0.08mmol/L组(1.032±0.286)μg/μg、TNF-α20ng/mL联合软脂酸0.2mmol/L组(2.134±1.049)μg/μg]分别较软脂酸组[软脂酸0.08mmol/L组(0.247±0.069)μg/μg、软脂酸0.2mmol/L组(0.341±0.031)μg/μg]显著升高(P<0.05);②油红O染色进一步显示,TNF-α促进肝细胞内脂质积聚。③实时荧光定量PCR和Western blot检测结果显示单纯TNF-α组与空白对照组相比,HepG2细胞SREBP-1、FAS、ACCα的表达均增加(P<0.05);联合组与软脂酸组相比,肝细胞内SREBP-1、FAS、ACCα的表达水平明显上调(P<0.05)。结论TNF-α促进HepG2肝细胞内脂质积聚,增加SREBP-1、FAS、ACCα的表达。

乌头、白及配伍存在基于CYP3A1/2的相互作用

目的:阐明基于药物代谢酶的乌头、白及配伍产生相互作用的机制。研究二者合用对主要药物代谢酶CYP1A2、CYP2E1、CYP3A1/2在酶活性、mRNA水平和蛋白质水平的影响。方法:采用高效液相色谱法测定CYP1A2、CYP2E1活性;采用紫外-可见分光光度法测定CYP3A1/2活性;分别采用RT-PCR和WesternBlot方法评价药物对CYP1A2、CYP2E1、CYP3A1、CYP3A2 mRNA及蛋白水平的影响。结果:乌头、白及合用后CYP3A1/2的酶活性明显下降;Western Blot检测显示CYP1A2、CYP3A1、CYP3A2的蛋白质表达水平下降;RT-PCR检测显示CYP1A2、CYP3A1、CYP3A2的mRNA水平均上升。结论:乌头、白及合用后抑制CYP3A1/2的酶活性,乌头、白及配伍存在基于CYP3A1/2的药物相互作用。

分化抑制因子在肝癌化疗疗效检验中的应用

目的:通过探究肝癌单纯手术和手术后辅助化疗对于患者血清肿瘤标志物、细胞分化抑制因子2(differentiation inhibitory factor2,ID2)、ID3、生存时间的影响,分析ID2、ID3表达与肝癌患者血清中重要肿瘤标志物甲胎蛋白(a-fetoprotein,AFP)的相关性以及ID2、ID3对肝癌侵袭转移力的影响,从而阐明分化抑制因子表达水平检测在评价肝癌术后辅助化疗效果的可行性.方法:采用1∶1病例对照研究方法,采用E LISA方法检测患者血清中肿瘤标志物、ID2、ID3含量;采用Western blot方法检测I D2、I D3的蛋白表达水平;采用Transwell法检测ID2、ID3对肿瘤侵袭转移力的影响;采用SPSS软件分析ID2、ID3表达量与血清中肿瘤标志物AFP含量的相关性.结果:术后给予辅助化疗的患者血清中肿瘤标志物癌胚抗原(carcino-embryonic antigen,CEA)、糖链抗原50(carbohydrate antigen50,C A50)、AFP、CA242含量明显低于单纯手术组患者(P<0.05),生存时间明显长于单纯手术患者(P<0.05),血清中ID2、ID3的表达水平均低于单纯手术患者(P<0.05),肿瘤组织中ID2、ID3的蛋白表达水平高于癌旁组织(P<0.05),血清肿瘤标志物AFP的与ID2、ID3基因表达量呈正相关(rID2=0.881,rID3=0.928,P<0.05).在细胞水平沉默ID2、I D3可以削弱肿瘤的侵袭转移能力,过表达ID2、ID3可以增强肿瘤的侵袭转移能力(P<0.05).结论:ID2、ID3与肝癌肿瘤标志物有类似作用,其表达上调提示肿瘤的侵袭转移能力增强,患者生存时间缩短,这可为临床上评价肝癌术后辅助化疗效果提供新的参考依据.

肥胖及2型糖尿病患者脂肪组织视黄醇结合蛋白4 mRNA的表达及调控

目的 研究肥胖及2型糖尿病患者皮下和腹内脂肪组织视黄醇结合蛋白4（RBP4）mRNA的表达差异,并探讨影响其表达调控的因素.方法 选取2007年1-6月因非代谢性疾病而接受腹部择期手术的正常体重正常糖调节、单纯肥胖、2型糖尿病患者各9例,取皮下和腹内脂肪组织,用RT-PCR法检测RBP4 mRNA的表达,并在体外对正常体重正常糖调节者腹内脂肪组织分别与一定浓度的胰岛素、地塞米松、棕榈酸、肿瘤坏死因子-α、吡咯列酮共培养,用RT-PCR法检测药物对腹内脂肪组织RBP4 mRNA表达的变化.结果 肥胖和2型糖尿病患者腹内脂肪RBP4 mRNA的表达均显著高于正常体重正常糖调节者（分别为2.10±1.84和1.54±0.46比0.75±0.28,P＜0.01和P＜0.05）,并明显高于相应的皮下脂肪组织;3组人群间皮下脂肪组织RBP4 mRNA的表达差异无统计学意义（1.05±0.15比0.99±0.14比1.13±0.07,P＞0.05）;药物胰岛素、地塞米松、吡咯列酮、棕榈酸能显著上调RBP4 mRNA的表达,与对照组相比,分别上升了2.13、0.84、2.04、4.88倍;肿瘤坏死因子-α显著下调RBP4 mRNA的表达,较对照组下降了38%.结论 肥胖和2型糖尿病患者腹内脂肪组织RBP4 mRNA的表达显著上升,正常体重正常糖调节者腹内脂肪组织RBP4 mRNA的表达受胰岛素、地塞米松等多种参与糖脂代谢及胰岛素抵抗因素的调控.

2-十三烷酮诱导棉铃虫(Helicoverpa armigera)细胞色素P450 CYP6B6时空表达规律的研究

植物次生物质2-十三烷酮能够诱导棉铃虫细胞色素P450 CYP6B6基因的过量表达,以6龄棉铃虫(Helicoverpa armigera)幼虫为对象,研究2-十三烷酮对棉铃虫细胞色素P450 CYP6B6的诱导作用,并对其表达规律进行了初探。分别采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和免疫组化的方法,分析棉铃虫在终浓度为10 mg·g-1的2-十三烷酮胁迫下,不同时间及不同组织部位CYP6B6基因在mRNA水平和蛋白水平上的表达变化规律。qRTPCR结果显示:用添加了2-十三烷酮的人工饲料饲喂棉铃虫不同时间后,在头壳中CYP6B6 mRNA的表达量一直低于对照组,到48 h时与对照组具有显著差异(t4=15.32,P=0.000 1);在脂肪体中随着时间的推移,表达量呈升高趋势,在36 h已过量表达(t4=7.627,P=0.001 6);在24 h时体壁和中肠组织的表达量分别较对照组提高了2.06倍和7.16倍,之后表达量均呈现先降低后升高的趋势,且在48 h时达到最大。免疫组化结果显示:在棉铃虫幼虫组织中发现CYP6B6蛋白在体壁、脂肪体、中肠中均有表达,相比之下在体壁中表达量较高。该研究为深入了解棉铃虫P450 CYP6B6的表达调控机制及其参与杀虫剂抗性的研究奠定了基础。

加减补肺汤对肺纤维化大鼠的抗氧化作用

目的:探讨加减补肺汤对肺纤维化(PF)大鼠抗氧化作用。方法:SD雄性大鼠40只,随机分为假手术组、模型组、加减补肺汤组,采用一次性气管滴注博来霉素复制PF模型(1 mg/只),假手术组滴注等量的生理盐水。术后2 d加减补肺汤组ig中药水煎液10 mL.kg-1(含生药16 g.kg-1),模型组和假手术组ig等量生理盐水,14,28 d处死动物,取血和肺脏,测定血清超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)和肺组织中羟脯氨酸(Hyp)的含量,实时荧光PCR测定肺组织中细胞外超氧化物歧化酶(ECSOD)mRNA的表达。结果:加减补肺汤明显改善肺纤维化大鼠的生存状态,降低肺组织中Hyp的含量,降低血清MDA含量,增加ECSOD mRNA的表达。结论:加减补肺汤能提高肺纤维化大鼠生存状态,改善纤维化指标,其机制可能与降低血清中MDA含量,上调ECSOD mRNA表达有关。

电针足三里对严重烫伤致大鼠急性肺损伤的影响

目的 探讨电针足三里对严重烫伤致大鼠急性肺损伤的影响.方法 雄性SD大鼠40只,体重200～250 g,随机分为5组（n=8）：对照组、烫伤组、足三里组、非经非穴组和α-银环蛇毒素组（α-BGT组）.对照组尾静脉注射生理盐水1 ml.烫伤组、足三里组、非经非穴组和α-BGT组先制备30%总体表面积Ⅲ度烫伤模型,然后烫伤组尾静脉注射生理盐水1 ml;足三里组于双侧足三里穴垂直进针7 mm,给予脉冲电流（电压3V,电流2ms,频率3 Hz）持续刺激12 mim,间隔8 h刺激1次,持续2 d;非经非穴组于双侧足三里穴旁5mm处给予脉冲刺激,方法同足三里组;α-BGT组尾静脉注射α-BGT 1.0 μg/kg,再于双侧足三里穴给予脉冲刺激,方法同足三里组.各组处理结束后,处死大鼠,取肺组织,光镜下观察病理学结果,电镜下观察超微结构,采用ELISA法测定肺组织高迁移率族蛋白B1（HMGBl）含量,采用免疫组化法测定HMGBl蛋白表达,采用RT-PCR法测定HMGBl mRNA表达.结果 烫伤组肺组织光镜下可见肺泡壁崩解,泡内大量渗出液,间质水肿、肥厚和增生,伴大量炎性细胞浸润;电镜下可见细胞核形态不规则,核膜僵硬,部分凸凹不平和核溶解,胞质内板层小体明显减少,肺组织病理损伤程度较对照组减轻.与对照组比较,烫伤组、非经非穴组和α-BGT组肺组织HMGBl含量升高,HMGBl蛋白及其mRNA的表达上调（P〈0.05）,足三里组各指标差异无统计学意义（P〉0.05）;与烫伤组比较,足三里组肺组织HMGBl含量降低,HMGBl蛋白及其mRNA的表达下调,非经非穴组和α-BGT组肺组织HMGBl mRNA表达下调（P〈0.05）;与足三里组比较,非经非穴组和α-BGT组肺组织HMGBl含量升高,HMGBl蛋白及其mRNA的表达上调（P〈0.05）.结论 电针足三里可减轻严重烫伤致大鼠急性肺损伤,其机制与激活含α7亚基N型胆碱能受体介导的胆碱能抗炎通路,抑制肺组织HMGBl的表达有关.

血管紧张素转化酶2和中性氨基酸转运载体BoAT1在不同日龄猪肠道中的表达差异

研究了肠道血管紧张素转化酶2(ACE2)和中性氨基酸转运载体B0AT1在不同生长阶段猪小肠各段中的分布表达,探讨其相互关系。研究选取3日龄仔猪、90日龄生长猪和120日龄成年猪十二指肠、空肠和回肠组织,采用体外扩增和荧光定量技术对各肠段组织中ACE2和B0AT1基因进行了定性和定量分析。结果显示ACE2基因在不同日龄猪小肠各段均有表达,相对表达量随日龄增长显著升高,120日龄猪表达量极显著上调。而肠道中B0AT1相对表达量逐渐下降,120日龄时显著下调。结果提示:ACE2在成年猪肠道组织中有较高表达,B0AT1在仔猪肠道组织中表达较高。