一步净化结合超高液相色谱串联质谱同时测定雅鱼中13类54种兽药残留

目的:本研究建立了一种一步净化法结合液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)同时检测雅鱼(Schizothorax prenanti)中13类54种兽药残留的快速检测方法。方法:向2.0 g样品中加入8 mL 0.2%甲酸-乙腈:水溶液(90:10,V/V)提取,冰水浴超声提取,LPAS一步净化。采用C18柱,甲醇-0.1%甲酸/5 mmol/L乙酸铵溶液梯度洗脱,动态多反应监测(dMRM),正/负离子模式,内标法定量,LC-MS/MS测定。以添加54种兽药的方式,对提取方式、提取体积、盐的加入、液相和质谱条件进行了优化,对方法性能(基质效应、方法检出限、方法定量限、准确度、精密度)等进行了验证。结果:54种兽药在0.1~50μg/L范围内线性关系良好,决定系数(R^(2))≥0.992,方法检出限(LOD)为0.03~2.5μg/kg之间,方法定量限(LOQ)为0.1~8.3μg/kg之间,在低(添加量5~10μg/kg)、中(添加量10~20μg/kg)、高(添加量50μg/kg)三个水平下54种药物的平均回收率为70.45%~118.1%,RSD为0.01%~9.9%。对50份养殖雅鱼样本应用该方法进行检测,7份样品有药物检出,恩诺沙星和达氟沙星各检出2次,磺胺甲噁唑检出4次,均低于定量限的定性检出。结论:该方法操作简单,一步净化,且方法检出限低、灵敏度高,准确度和精密度均较好,方法性能验证其符合多种兽药残留要求,可为大批量检测雅鱼中多种类兽药残留提供有力支持。

热应激对齐口裂腹鱼非特异性免疫功能及细胞凋亡的影响

为研究热应激及恢复对齐口裂腹鱼(Schizothorax prenanti)机体损伤、非特异性免疫功能和细胞凋亡的影响,测定了热应激前(19℃,对照组)、热应激(27℃,0、2h、4h、8h、12h,实验组)及恢复适温6h后(19℃,恢复组)的非特异性免疫相关生理生化指标及细胞凋亡率。结果表明,超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)在应激0、4h、8h、12h后活性上升,应激0和12h与应激前差异极显著(P<0.01);髓过氧化物酶(Myeloper oxidase,MPO)在热应激4h达到最大值;谷草转氨酶(Glutamic-oxalacetic transaminase,GOT)的活性实验组与对照组差异不显著,恢复6h后GOT活性极显著高于对照组(P<0.01);谷丙转氨酶(Glutamic-pyruvic transaminase,GPT)在应激0、4h、12h和恢复到适温6h后的活性极显著高于对照组(P<0.01);丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量在热应激2h、4h和12h时极显著高于对照组(P<0.01),8h时显著高于应激前(P<0.05),应激12h MDA含量达到最大值,恢复6h后MDA含量恢复至应激前水平(P<0.05);补体3(Complement 3,C3)含量升高,在热应激12h时显著高于对照组(P<0.05),恢复6h C3含量下降,与对照组差异不显著(P>0.05)。持续27℃热应激不同时间后,各实验组的细胞凋亡率都显著高于对照组(P<0.05),且在处理4h时细胞凋亡率达到最高值(52.42%),恢复19℃6h后细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。研究表明,持续27℃热应激改变了机体非特异性免疫力,导致鱼体出现炎症,损伤细胞,恢复到适温后,鱼体各项机能逐渐恢复。研究结果可为深入研究齐口裂腹鱼高温适应调控机理提供基础数据,也为齐口裂腹鱼养殖、运输等过程中的温度控制提供科学依据。

齐口裂腹鱼集群行为对流态的响应

为研究齐口裂腹鱼集群行为对流速和紊动能的响应关系,该研究通过可变流场的试验水槽,结合鱼群轨迹分析及集群几何特征,定量研究了适宜齐口裂腹鱼集群的水流流速和紊动能区间。在试验中每组选择10尾平均鱼龄为3龄的齐口裂腹鱼,共两组,每组进行6次重复试验,每次试验让鱼群在3 m×14 m具有横向流速梯度的矩形水槽中游动10 min,之后提取和分析鱼群游泳轨迹,获取鱼群在不同水流流速、紊动能下的最近邻距离(Nearest Neighbor Distance,NND),集群面积,游泳分离指数(Separation Swimming Index,SSI)。结果表明,齐口裂腹鱼在特定水力条件下具有明显集群行为,上溯过程中以队列模式的队形为主,当水流流速为0.27~0.70 m/s,紊动能为0.004~0.018 m^(2)/s^(2)时,齐口裂腹鱼群的NND为0~0.80 m,集群面积为0~5.00 m^(2),SSI为0~1.20,此时集群得最为紧凑,在凝聚力、排斥力上都变现的更好。因此,为使齐口裂腹鱼能够集群上溯,推荐鱼道等工程措施营造流速为0.27~0.70 m/s,紊动能为0.004~0.018 m^(2)/s^(2)的水力学条件,从而对过鱼设施水流流态和水利调度进行优化。

总溶解气体过饱和含沙水体对齐口裂腹鱼影响的实验研究

高坝泄洪形成总溶解气体(Total Dissolved Gas,TDG)过饱和的含沙水流,由于泥沙的作用,加剧了对高坝下游鱼类的影响。为探讨TDG过饱和含沙水体对鱼类影响的规律,以齐口裂腹鱼幼鱼为实验对象,选取中值粒径为7.4μm的泥沙,对TDG饱和度为100%、120%、125%、130%、135%、140%的水体,分别设置0、20、60、80 mg/L的含沙量实验工况,开展含沙水体TDG过饱和的持续暴露实验。实验结果表明,含沙量不同但TDG饱和度保持为100%不变的实验组中,未出现实验鱼死亡现象。TDG饱和度为130%时,含沙量为0、20、60、80 mg/L的实验组中,实验鱼的半致死时间分别为15.3 h、10.75 h、8.3 h、7.85 h。在TDG饱和度相同时,含沙量越高半致死时间越短,但高含沙量实验组(60 mg/L,80m g/L)的半致死时间相差不大;含沙量相同时,TDG饱和度越高,半致死时间越短。