API_(0134)对凝血酶诱导内皮细胞表达c-sis mRNA/PDGF-B链蛋白的影响

用免疫组化和原位杂交方法观察了ＡＰＩ０１３４（ＡＰＩ）对凝血酶诱导猪主动脉内皮细胞表达原癌基因ｃｓｉｓｍＲＮＡ和血小板源生长因子（ＰＤＧＦ）Ｂ链蛋白的影响。结果表明，凝血酶能诱导内皮细胞ｃｓｉｓｍＲＮＡ转录和促进ＰＤＧＦＢ链蛋白表达，ＡＰＩ则能显著抑制凝血酶的上述诱导作用，剂量增大抑制作用增强。

API_（0134）对四种诱聚剂致血小板聚集的影响

采用比浊法观察到ＡＰＩ０１３４显著抑制二磷酸腺苷（ＡＤＰ）、肾上腺素（Ａｄｒ）、花生四烯酸（ＡＡ）和胶原（Ｃｏｌｌ）诱导的人和大鼠血小板聚集。ＡＰＩ０１３４体外给药（２８．８～９１０ｍｇ·Ｌ－１）呈剂量依赖性的明显抑制ＡＤＰ、Ａｄｒ和ＡＡ诱导的人血小板聚集，其中对ＡＤＰ诱导的血小板聚集抑制作用最强，１ｍｉｎ和５ｍｉｎ时的半抑制浓度（ＩＣ５０）分别为１３４ｍｇ·Ｌ－１和７６．６ｍｇ·Ｌ－１，对Ａｄｒ诱导的血小板聚集之ＩＣ５０分别为１９４和１３７．６ｍｇ·Ｌ－１，对ＡＡ诱导的血小板聚集抑制作用较弱，５ｍｉｎ时的ＩＣ５０为２０３ｍｇ·Ｌ－１，ｉｖＡＰＩ０１３４７０和１００ｍｇ·ｋｇ－１，对ＡＤＰ和Ｃｏｌｌ诱导的大鼠血小板聚集也呈显著抑制作用，抑制率分别为２７．８％～３９．５％和２４．３％～３５．０％。

API 0134对钙调素非依赖型环核苷酸磷酸二酯酶的影响

采用钙调素非依赖型环核苷酸磷酸二酯酶（ＰＤＥ－Ⅱ）测定方法，观察ＡＰＩ０１３４对ＰＤＥ－Ⅱ的作用。ＡＰＩ０１３４浓度５０ｍｇ·Ｌ－１时明显抑制ＰＤＥ一Ⅱ活性，半效抑制浓度为２１３ｍｇ·Ｌ－１。酶促动力学分析表明：ＡＰＩ０１３４存在时，ＰＤＥ－Ⅱ的Ｋｍ值不变，为１．９２×１０－４ｍｏｌ·Ｌ－１，而Ｖｍａｘ值则随ＡＰＩ０１３４剂量增大而减小，提示ＡＰＩ０１３４为ＰＤＥ－Ⅱ的非竞争性抑制剂。

API0134对血管平滑肌细胞增殖和血小板源生长因子B链、碱性纤维母细胞生长因子及相关癌基因表达的影响

为探讨API0134防治冠状动脉粥样硬化和腔内成形术后再狭窄的作用机制，采用内皮素诱导建立培养的血管平滑肌细胞增殖模型，用氚标胸腺嘧啶脱氧核苷掺入法、流式细胞术、免疫细胞化学检测及Northernblot方法，观察了API0134对血管平滑肌细胞增殖的作用及对血小板源生长因子B链、碱性纤维母细胞生长因子及其相关癌基因C－sis和C－mpc表达的影响。结果发现，API0134能逆转内皮素所致的氚标胸腺嘧啶脱氧核苷掺入量增多（对照组为499±92，内皮素组为617±98，API0134组为506±102），阻止血管平滑肌细胞由静止期（G0／G1期；对照组为72％，内皮素组为50％，API0134组为60％）进入DNA合成期（S期；三组分别为26％、36％和30％）和有丝分裂期（G2／M期，三组分别为2％、14％和4％），并能逆转内皮素引起的血小板源生长因子B链、碱性纤维母细胞生长因子抗原、c－sis和c－mpc的mRNA表达增强。提示API0134有抑制血管平滑肌细胞增殖的作用，这种作用与生长因子及癌基因调控的分子生物学机制有关。

API_(0134)对凝血酶作用下血小板环核苷酸和胞浆游离钙离子浓度的影响

为观察穿心莲有效成分（ＡＰＩ０１３４）对凝血酶作用下血小板活化的抑制作用，将家兔２４只随机分为ＡＰＩ０１３４（Ａ）组（ｎ＝９），噻氯匹定（Ｔ）组（ｎ＝８）和对照组（ｎ＝７），治疗１周，然后检测凝血酶作用下血小板内ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ和胞浆游离钙离子浓度，以及血小板超微结构。结果表明ｃＡＭＰ水平在Ａ、Ｔ两组显著高于Ｃ组（Ｐ＜０．０５），而胞浆游离钙离子浓度明显低于Ｃ组（Ｐ＜０．０１），超微结构表明Ａ组和Ｔ组血小板脱颗粒现象较Ｃ组明显减轻。在Ａ和Ｔ组之间各项参数均无统计学差异。

API0134对实验性动脉粥样硬化家兔血液凝固性和血栓弹力图的影响

为探讨穿心莲抗动脉粥样硬化的可能机制，用血小板聚集仪、血栓弹力描记仪和ACL－200型凝血仅分别观察了穿心莲成份API0134对实验性动脉粥样硬化家兔血小板聚集率、血栓弹力图和血液凝固性改变的影响。结果发现，动脉粥样硬化模型家兔的血液呈高凝和低纤溶状态，表现为血小板活化因子诱导的血小板聚集显著增强；血栓弹力图的反应时间和凝固时间显著缩短，血栓最大幅度和血栓弹力度显著增大；部分凝血活酶时间明显缩短，优球蛋白溶解时间显著延长。经API0134治疗3天后，上述异常的血凝和纤溶参数显著改善，基本恢复至正常水平。提示，API0134具有抗血小板聚集、抗血栓形成和促进纤溶活性的作用，这种作用可能是其抗动脉粥样硬化的机理之一。

API_（0134）对大鼠血浆和血小板血栓素B_2生成与血小板聚集的影响

用放射免疫分析法和比浊法测定ＡＰＩ＿（０１３４）对大鼠血浆血栓素Ｂ＿２（ＴＸＢ＿２）浓度、血小板ＴＸＢ＿２生成血小板聚集的影响。静脉注射ＡＰＩ＿（０１３４）７０ｍｇ或１００ｍｇ·ｋｇ￣（－１）显著降低血浆ＴＸＢ＿２浓度，其降低率分别为３８．８％和５１．６％， ＡＰＩ＿（０１３４）明显抑制ＡＤＰ诱导的大鼠血小板聚集和ＴＸＢ＿２生成，抑制率分别为２７．８％、３９．５％和４１．４％、５３．６％，两抑制率间呈显著正相关。对胶原诱导的大鼠血小板聚集和ＴＸＢ＿２生成也有明显抑制作用，其抑制率分别为２４．３％、３５．０％和４４．８％、４５．５％，两抑制率间相关显著。

穿心莲成分API_(0134)防治家兔系膜增殖性肾炎的实验研究

建立家兔系膜增殖性肾炎模型，研究API0134对家兔血脂、超氧歧化酶（SOD）及丙二醛（MDA）作用以及对肾脏组织的影响，并探讨了可能的机制。结果表明，API0134用药组血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL－C）低于模型组，高密度脂蛋白胆固醇（HDL－C）及HDL－C／LDL－C高于模型组（P＜0．05），SOD活性明显高于模型组（P＜0．01），而MDA正常。用药组肾组织损害较轻。研究证实，API0134能够预防兔的高脂血症，具有抗氧化作用，能够抑制系膜细胞及基质的增殖，保护肾组织。

API0134对高脂血症家兔血栓形成及血小板信号转导物质的影响

建立高脂血症家兔动脉血小板依赖性血栓模型 ,应用流式细胞术、放射免疫法及3 H 肌醇掺合等检测方法观察穿心莲成分API0 134对闭塞性血栓形成时间、血小板聚集功能、血小板胞浆游离Ca2 +和Mg2 +浓度以及血小板内环磷酸腺苷、环磷酸鸟苷和三磷酸肌醇含量的影响。结果发现 ,API0 134能够显著延长闭塞性血栓形成时间和抑制血小板聚集。 5 0mg kgAPI0 134的药理作用明显强于 5mg kgAPI0 134。API0 134可显著抑制血栓形成所诱导的血小板内 [Ca2 +]i、[Mg2 +]i和三磷酸肌醇浓度升高 ,显著抑制血小板内环磷酸腺苷浓度降低。抑制作用与用药剂量有关。结果提示 ,API0 134具有较强的抗血栓形成和抗血小板聚集作用。抗血小板聚集的作用机制与调节血小板信号转导物质 [Ca2 +]i、[Mg2 +]i。

API0134抗动脉粥样硬化的实验研究

为探讨穿心莲成分API0134对动脉粥样硬化性疾病的防治作用，系问高胆固醇喂饲加牛血清白蛋白注射方法建立家克动脉粥样硬化模型的同时，实验组动物加饲API0134，每天150mg／kg，并用硝苯地平作对照，喂养8周．结果发现，API0134用药组血浆高密度脂蛋白胆固醇水平比模型组高，差异有显著性（P＜0．05）。模型组主动脉脂质斑块面积百分比为51．2％士20．0％。冠状小动脉粥样硬化发生率为62．4％±174％，冠状动脉管腔狭窄程度为57．6％±17．4％；API0134用药组主动脉脂质斑块面积百分比为7.1％±4，5％，冠状小动脉粥样硬化发生率为12.5％±4．8％；冠状动脉管腔狭窄程度为10．6％±3．4％；两者相比，均有高度显著性差异（P<0．01）。图像分析数据显示．硝苯地平用药组的病变明显重于API0134用药组，但比模型组轻。以上结果表明，API0134具有显著的抗实验性家兔动脉粥样硬化作用，硝苯地平亦有类似作用，但效果不及API0134。

API_（0134）对犬心肌缺血－再灌注过程中血浆6－酮－前列腺素F_（1α）和粒细胞产生氧自由基的影响

目的：研究药物ＡＰＩ０１３４对实验性急性心肌缺血—再灌注过程中血浆６－酮－前列腺素Ｆ１α和粒细胞产生氧自由基的影响。方法：结扎犬冠状动脉左前降支９０分钟后行再灌注１２０分钟。用药组（ｎ＝８）在冠状动脉左前降支结扎４５分钟时静脉给予ＡＰＩ０１３４（９ｍｇ／ｋｇ）至再灌注６０分钟。对照组（ｎ＝８）给予同等量５％葡萄糖盐水。放射免疫法测定血浆６－酮－前列腺素Ｆ１α和凝血烷Ｂ２（ＴＸＢ２，血栓素Ｂ２）含量，化学发光法测定粒细胞产生氧自由基的量。结果：与对照组比较，用药组在用药后心肌缺血—再灌注期间，血６－酮－前列腺素Ｆ１α增高（Ｐ＜０．０５）、凝血烷Ｂ２降低，粒细胞产生氧自由基的量减少（Ｐ＜０．０５）。结论：ＡＰＩ０１３４可促进心肌缺血—再灌注过程中６－酮－前列腺素Ｆ１α（即前列腺素）的生成，抑制粒细胞产生氧自由基，这可能是该药减轻心肌再灌注损伤的重要机制之一。

穿心莲成分API 0134对高脂血症患者血小板膜糖蛋白表达的影响

目的 观察中药穿心莲成分API 0134(API)对高脂血症患者血小板膜糖蛋白的影响,探讨API抗血小板聚集的机制。方法 随机选择30例高脂血症患者,应用免疫荧光标记和流式细胞仪测定静息血小板、活化血小板和不同浓度API作用后的活化血小板膜糖蛋白GPⅡb/Ⅲa、GPIb、P选择素(GMP-140)和血小板假性血友病因子(vWF)免疫荧光强度值。结果 与活化血小板组比较,不同浓度API(25mg/L、50mg/L、100mg/L)均能够显著抑制GPⅡb/Ⅲa的平均荧光强度,抑制作用强度与用药剂量成正比;API 50mg/L和API 100mg/L亦能显著减低活化血小板的GMP-140,API 100mg/L可降低vWF的平均荧光强度(P<0.05,P<0.01)。不同浓度API对活化血小板膜糖蛋白GPIb表达影响不显著(P>0.05)。结论 API具有显著的抗血板GPⅡb/Ⅲa的药理作用,中、大剂量API对血小板GMP-140和vWF的表达亦有抑制作用。

穿心莲成分API_(0134)对系膜增殖性肾炎家兔一氧化氮、内皮素的影响

为探讨穿心莲 API0 1 34 防治家兔系膜增殖性肾炎 (Ms PGN )作用机理 ,采用高胆固醇饲料另加牛血清白蛋白一次性注射方法建立家兔 Ms PGN模型 ,观察 4～ 8周 ,检测血清一氧化氮 (NO) ,血浆内皮素 (ET) ,环鸟苷酸(c GMP)脂质过氧化物以及肾组织形态学改变。结果发现 ,与模型组相比较 ,穿心莲成分 API0 1 34 预防用药 4～ 8周能升高血清 NO,c GMP含量和 SOD活性 (P<0 . 0 1) ,降低 ET和 L PO的含量 (P<0 .0 1) ,其肾脏病理损害较轻 ,而模型组病理损害较重。认为 API0 1 34 能够抗氧化 ,保护系膜细胞 ,维持 NO/ ET平衡 ,阻止肾脏组织病变。

穿心莲有效成分API_0134抗血小板聚集的机理

ＡＰＩ０１３４是一种新的穿心莲有效成分，为黄酮类化合物。体外研究证实ＡＰＩ０１３４能有效地抑制ＡＤＰ诱导的人血小板聚集，其半抑制浓度（ＩＣ５０）为７０ｇ／ｍｌ；ＡＰＩ０１３４能强烈的抑制钙调蛋白（ＣａＭ）的活力，ＩＣ５０为３４ｇ／ｍｌ，但其对ＣａＭ依赖性磷酸二酯酶（ＰＤＥ－Ｉ）的基础活力无影响。在浓度增高时ＡＰＩ０１３４也能抑制ＣａＭ不依赖性磷酸二酯酶（ＰＤＥ－Ⅱ）活力，ＩＣ５０为２４０ｇ／ｍｌ；动力学分析的结果表明，ＡＰＩ０１３４虽不能改变ＰＥＤ－Ⅱ的表观Ｋｍ值但可降低Ｖｍａｘ。这就表明ＡＰＩ０１３４对（ＰＤＥ－Ⅱ）的抑制为非竞争性。本文的结果揭示，抑制ＣａＭ和ＰＤＥ活力可能是ＡＰＩ０１３４抗血凝的作用机理之一。

API0134对氧自由基诱导内皮细胞表达c－sis mRNA和血小板源性生长因子B链的影响

本文应用免疫组织化学和原位杂交方法，观察中药穿心莲成分ＡＰＩ０１３４对氧自由基诱导猪主动脉内皮细胞表达癌基因ｃ-ｓｉｓｍＲＮＡ和血小板源性生长因子Ｂ链的影响。结果是，氧自由基能诱导内皮细胞ｃｓｉｓｍＲＮＡ的转录和促血小板源性生长因子Ｂ链表达。ＡＰＩ０１３４能显著抑制氧自由基的上述诱导作用，抑制效应与药物浓度呈正相关。因此提示，ＡＰＩ０１３４的这一作用可能是其抗动脉粥样硬化的机制之一。

API_（0134）对钙调素及其依赖性环核苷酸磷酸二酯酶的作用

应用钙调素（ＣａＭ）靶酶环核苷酸磷酸二酯酶（ＰＤＥ－Ｉ）活性测定方法观察穿心莲有效成分（ＡＰＩ０１３４）拮抗ＣａＭ的作用。当ＡＰＩ０１３４浓度大于７．８ｍｇ·Ｌ－１时能明显抑制ＣａＭ激活ＰＤＥ－Ｉ的活性，其半抑制浓度（ＩＣ５０）为２６·９ｍｇ·Ｌ－１，在浓度为７．８～１２５ｍｇ·Ｌ－１范围内，ＡＰＩ０１３４对ＰＤＥ－Ｉ的基础活性没有影响。

API_(0134)对缺血一再灌注心肌氧自由基和钙超负荷的作用

在犬急性心肌缺血一再灌注模型上，结扎冠状动脉左前降支（LAD）90min后，行再灌注120min。发现缺血区心肌组织超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH－Px）活性降低，丙二醛（MDA）含量增加（均为P＜0．05）；Na+、Ca(2+)含量明显增加，K+含量及K+／Na+比值显著降低（均为P＜0．01）。再灌注前45min静脉给予API(0134)，则见相应的缺血区SOD、GSH－Px活性。K+含量及K+／Na+比值高于对照组（P＜0．05或P＜0．01），而MDA和Na+、Ca(2+)含量明显低于对照组。说明API(0134)能防治再灌注损伤，这与它减轻氧自由基的危害，降低组织钙超负荷有关。

Die experimentelle Untersuchung uber die praventiven Wirkungen von API_(0134) gegen die Reokklusion nach der Thrombolyse der Koronararterien bei Hunden

Zusammenfassung: Mit dem Herzinfarktmodell bei Hunden wurden die praventiven Wirkungen von Andrographis Panikulata Isolate 0134 (API 0134 , API) gegen Reokklusion und seine moglichen Mechanismen untersucht. Die Behandlung mit API nach der Thrombolyse dauerte einen Monat. Dabei wurde festgestellt, da die Reokklusionsrate bei der Versuchsgruppe (16,7 %,1/6) wesentlich niedriger als die bei der Kotrollgruppe (87,5 %, 7/8) war ( P <0.01). Die Plasmakonzentration von TXB 2 bei der Versuchsgruppe nahm erheblich ab, wahrend sie bei der Kontrollgruppe stark zunahm, und auf einem hohen Stand blieb (Vergleich: 4 Stunden P <0,01, 3 Tag P <0,01, 30 Tag P <0,05). Bei thrombozytaren Membrane Glykoprotein 140(GMP 140) erschien die gleiche Veranderung. Auerdem wies API sowohl eine schutzende Wirkung auf die Endothelzellen des Kranzgefaes als auch eine fordernde Wirkung auf die Fibrinolyse auf. Schlufolgerung: API besitzt eine starkere Wirkung gegen die Reokklution nach Thrombolyse. Seine Mechanismen beziehen sich mit der Gegenaktivierung der Thrombozyten, der Beforderung der Fibrinolyse und der Abschutzung der Endothelzellen, was eine gute klinische Bewertung hat.

穿心莲成分API_（0134）对猪主动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用

采用体外培养的猪主动脉平滑肌细胞（ＳＭＣ）为模型。在高脂血清（ＨＬＳ）造成ＳＭＣ增殖条件下，观察穿心莲成分ＡＰＩ０１３４对ＳＭＣ增殖的作用及其机制，并与Ｉｌｏｐｒｏｓｔ进行比较。结果发现：ＨＬＳ培养促进ＳＭＣ增殖。加用ＡＰＩ０１３４后，可以使氚－胸腺嘧啶核苷（３Ｈ－ＴｄＲ）掺入量减少，拮抗ＳＭＣ的ＤＮＡ合成，增殖及ＨＬＳ造成的形态学改变。这些作用可能与降低脂质过氧化物（ＬＰＯ），使前列环素（ＰＧＩ２），环磷酸腺苷（ｃＡＭＰ）含量增多，纤溶酶原激活物抑制物（ＰＡＩ）活性降低有关。Ｉｌｏｐｒｏｓｔ抗ＳＭＣ增殖作用及作用环节与ＡＰＩ０１３４相似，但有差别。提示：ＡＰＩ０１３４是穿心莲中有前途的抑制血管ＳＭＣ增殖的活性成分。

Effects of Andrographitis Paniculata Extracts on the Expression of CD40 in Endothelial Cells

In order to investigate the expression of CD40 in endothelial cells （ECs） in a variety of injured conditions and the interventional role of Andrographitis Paniculata isolate （API0134）, the thoracic aorta ECs of guinea pigs were cultured in vitro until the third passage, incubated in the presence of media containing xanthine oxidase （XO） and xanthine （Xan） which produced oxygen free radical （OFR group）; oxidized-LDL （ox-LDL group）; XO, Xan and API0134 （OFR＋API0134 group）; or ox-LDL and API0134 （ox-LDL＋API0134 group）. The expression of CD40 in ECs was detected by immunofluorescence assay and reverse transcription-PCR （RT-PCR）. The results showed as compared with the control group, the expression of CD40 in ECs in OFR group and ox-LDL group was increased （P〈0.01）, but attenuated significantly in OFR＋ API0134 group and ox-LDL＋API0134 group （P〈0.05）. It was suggested that mPI0134 could protect atherosclerosis by inhibiting the expression of CD40 molecule in injured ECs.