应用SCID和NOD/SCID小鼠构建急性髓系白血病模型成瘤率的比较

目的:比较应用SCID和NOD/SCID小鼠构建急性髓系白血病模型成瘤率的不同。方法:分别给SCID和NOD/SCID小鼠腹腔注射HL-60细胞,观察小鼠的一般情况、应用流式细胞术检测骨髓细胞CD33阳性率,病理学检查鉴定动物模型。结果:应用SCID小鼠构建急性髓系白血病模型成瘤率为30%,而应用NOD/SCID小鼠构建急性髓细胞白血病模型成瘤率为100%。结论:接种HL-60的NOD/SCID小鼠相对于SCID小鼠成瘤率高,小鼠发病率稳定,更适宜应用于白血病机制研究。

SCID小鼠-人白血病模型在白血病研究中的应用

SCID小鼠 -白血病模型是研究白血病细胞增殖、分化及其调控机制的重要手段和方法。本文综述了SCID小鼠 -白血病模型的建立及研究进展 ,并对该模型在白血病发病学、白血病细胞生物学、临床诊疗措施和判断病人预后等方面的可能应用进行了探讨。最后提出了此模型的应用局限性 ,以便更好的完善该模型 ,用于白血病的研究。

对NOD/SCID和SCID小鼠皮下接种的黑色素瘤生长特性比较

目的比较两种常用免疫缺陷小鼠皮下接种黑色素肿瘤细胞后肿瘤生长及小鼠生存情况。方法 7和17周龄的NOD/SCID及SCID小鼠左腋下接种小鼠黑色素瘤细胞,接种第8天开始隔1天测量肿瘤长径和短径,计算肿瘤体积,每天观察小鼠生存情况,记录生存时间,待1组小鼠完全死亡结束实验。结果 a.7周龄不同品系小鼠接种小鼠黑色素瘤后,NOD/SCID较SCID小鼠肿瘤生长速度更快、中位生存期更长;17周龄2种品系小鼠肿瘤生长情况无显著性差异。b.同品系NOD/SCID和SCID小鼠接种小鼠黑色素瘤后,小周龄较大周龄肿瘤生长速度更快,中位生存期更短。结论与7和17周龄SCID小鼠及17周龄NOD/SCID小鼠相比,7周龄NOD/SCID小鼠肿瘤生长情况更好,生存期较为适当,可能更适合作为黑色素瘤小鼠模型的实验动物。

SCID小鼠-人白血病模型在白血病研究中的应用新进展

本文综述了白血病细胞在重症联合免疫缺陷(severe combined immunodeficiency,SCID)小鼠体内的增殖、分化及发病机制的研究进展,并介绍了SCID小鼠-白血病模型在白血病发病学、白血病细胞生物学、临床诊疗措施和病人预后判断等方面的可能性应用价值,SCID小鼠-人白血病模型为白血病的深入研究提供了新的手段。

小剂量K562细胞NOD/SCID小鼠动物模型的建立

【目的】探索建立小剂量(1×106)人急性红白血病K562细胞株的NOD/SCID小鼠动物模型及通过流式细胞仪对NOD/SCID小鼠的肿瘤负荷情况进行评价的可行性。【方法】实验组NOD/SCID小鼠分别经尾静脉接种K562细胞1×106、5×106,比较不同剂量接种实验组小鼠的生存时间、组织病理改变及通过流式细胞术对NOD/SCID小鼠体内的肿瘤标记进行检测。【结果】1×106及5×106K562细胞接种的NOD/SCID小鼠的生存时间分别为(30.3±4.3)d和(22.2±3.7)d;其外周血、骨髓及肝、肺组织匀浆中均可发现不同比例的肿瘤细胞;通过流式细胞术检测5×106K562细胞接种组NOD/SCID小鼠外周血、肝匀浆中人CD13表达水平显著高于1×106接种组,而肺匀浆的CD13表达水平两组无显著性差异。【结论】小剂量(1×106)K562细胞NOD/SCID小鼠动物模型的建立是完全可行的,这有助于降低实验成本。

不同时相移植人骨髓间充质干细胞对人脐血CD34^+细胞植入NOD/SCID小鼠的影响

为了观察不同时相移植人骨髓间充质干细胞(MSC)对脐血(UCB)CD34+细胞移植的NOD/SCID小鼠造血重建的影响,明确最佳的移植时机,将体外培养扩增的人骨髓MSC分别于c细胞移植同时、移植前48小时及移植后48小时输入经60Coγ射线照射的NOD/SCID小鼠,观察共移植后42天内小鼠外周血白细胞和血小板变化,并于移植后42天处死小鼠,用FACS检测外周血、骨髓和脾脏人源细胞含量。结果表明:(1)MSC和UCB CD34+细胞同时输注可明显降低外周血白细胞和血小板下降幅度,缩短白细胞和血小板恢复时间;二者不同时输注均不降低白细胞和血小板下降幅度,且输注UCB CD34+细胞后48小时输注MSC时外周血血小板恢复时间明显晚于同时输注者。(2)与单纯UCB CD34+细胞移植相比较,不同时相输注MSC均可促进UCB CD34+细胞的植入,三个共输注组间促进骨髓各系造血植入效应无明显差异。结论:人骨髓MSC与UCB CD34+细胞共移植时,以同时移植效果最佳,此结果为MSC的临床应用提供了实验依据。

K562/NOD-SCID小鼠白血病模型的建立

本研究探讨人CML急性变的白血病细胞在NOD-SCID小鼠体内建立白血病模型的方法并研究其生长特性。首先将K562细胞接种于全身受照射后的裸鼠,待皮下成瘤后取出局部瘤块,选取无坏死的瘤组织制成瘤细胞悬液,再腹腔接种于全身受照射后的NOD-SCID小鼠。结果表明:成功建立全身播散的白血病模型,4周时外周血涂片可见白血病细胞,晚期浸润肝、脾、骨髓等造血器官,白细胞上升到接种前的8-10倍,血涂片中白血病细胞达20%-30%。腹腔局部出现瘤块,多位于腹腔内或大网膜,较少累及其他器官。结论:腹腔接种K562瘤细胞于全身照射后的NOD-SCID小鼠能建成全身播散的白血病模型,该模型较好地反映白血病在体内的演变过程,是进行新药疗效试验、生物导向治疗及基因治疗的理想工具。

人M5型白血病-SCID小鼠模型的建立及白血病病理变化的分析

目的:建立人M5型白血病细胞系SHI-1/SCID(重症联合免疫缺陷)小鼠模型,探讨白血病细胞的接种密度与SCID小鼠成瘤率及病理变化的关系。方法:将不同密度的人白血病细胞SHI-1注射至SCID小鼠腹腔。定期尾静脉取血并以流式细胞术(FCM)监测肿瘤细胞表面标志CD14及CD137L的变化。通过病理组织学检查和FCM分析SCID小鼠的骨髓、肝脏、脾脏和肾脏中白血病细胞的浸润及病理变化。结果:将不同密度的SHI-1细胞移植至小鼠腹腔,均可发现瘤块生长。同时中、高剂量组小鼠的主要组织器官呈现不同程度的肿瘤细胞的浸润。最早在移植3周后即可在尾静脉检测到肿瘤细胞,并与注射细胞量相关。结论:建立的SHI-1/SCID小鼠模型为人M5型白血病的研究提供了有价值的动物模型。

三种酶联免疫吸附法筛选“渗漏”型SCID小鼠的比较

目的 选择简单的方法筛选“渗漏”型SCID小鼠。 方法 采用 3种酶联免疫吸附法 (双抗夹心ELISA、双抗夹心间接ELISA及生物素 亲和素夹心ELISA)测定SCID小鼠血清中IgG含量。 结果 生物素 亲和素夹心ELISA法灵敏度最高 ,用此法共检测了 4 1只 6～ 8周龄小鼠 ,其中 4 0只的IgG含量为 0 2 4± 0 16mg L ;只有 1只小鼠IgG含量为 2 3mg L ,渗漏比例为 2 4 %。 结论 用生物素 亲和素夹心ELISA法对SCID小鼠“渗漏”进行初筛 ,是简便、敏感。

NOD/SCID小鼠模型在实验血液学研究中的应用

NOD/SCID(非肥胖糖尿病/重症联合免疫缺陷)小鼠是在SCID(重症联合免疫缺陷)小鼠的基础上与非肥胖性糖尿病小鼠(NOD/Lt)品系回交的免疫缺陷鼠。NOD/SCID小鼠既有先天免疫缺陷,又有T和B淋巴细胞缺乏,各种肿瘤细胞可以植入,且较少发生排斥反应及移植物抗宿主病(GVHD),所以NOD/SCID小鼠逐渐成为血液学实验研究的有用工具。本文从NOD/SCID小鼠的生物学特性、建立人类白血病模型、干细胞移植、药物研究及NOD/SCID小鼠应用中存在的不足和改良等方面综合述评。

人脐血CD34^+细胞来源的树突状细胞疫苗在SCID小鼠体内的抗肿瘤免疫作用

目的观察脐血CD34+干细胞来源的树突状细胞(dendriticcells,DC)疫苗在严重联合免疫缺陷(severecombinedimmunitydeficiency,SCID)小鼠体内对人肝癌细胞的免疫治疗和免疫保护作用。方法采用微磁珠分选系统(MiniMACS)从脐血单个核细胞中分离CD34+干细胞。重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(recombinedhumangranulocytemacrophagecolonystimulatingfactor,rhGMCSF)、重组人肿瘤坏死因子(recombinedhumantumornecrosisfactor,TNF)α诱导脐血CD34+细胞向DC分化,相差显微镜下观察DC分化过程中细胞的形态及数量变化。用人肝癌细胞BEL7402裂解物冲击DC制备DC疫苗。在SCID小鼠体内观察DC疫苗致敏的淋巴细胞对人肝癌细胞的免疫治疗和免疫保护作用。结果脐血CD34+细胞在细胞因子诱导下,细胞形态由小变大、由圆形逐渐变为不规则形;细胞分裂扩增过程中,数量逐渐增多,形成细胞集落。经过细胞因子联合诱导2周的DC胞质突起丰富,具有典型的树枝状形态。在体内的抗肿瘤实验中,经DC疫苗致敏的人外周血淋巴细胞治疗荷瘤小鼠,肿瘤生长速度、瘤体积和重量明显小于未致敏淋巴细胞治疗组(P<005)。与未致敏淋巴细胞免疫组和DC疫苗致敏的淋巴细胞治疗组比较,经DC疫苗致敏的淋巴细胞免疫SCID小鼠,肝癌细胞攻击后。

NOD/SCID小鼠在实验血液学研究中的应用

NOD/SCID(非肥胖糖尿病/重症联合免疫缺陷)小鼠是在SCID(重症联合免疫缺陷)小鼠的基础上与非肥胖性糖尿病小鼠(NOD/Lt)品系回交的免疫缺陷鼠。NOD/SCID小鼠既有先天免疫缺陷,又有T和B淋巴细胞缺乏,各种肿瘤细胞可以植入,且较少发生排斥反应及移植物抗宿主病(GVHD),所以NOD/SCID小鼠逐渐成为血液学实验研究的有用工具。本文从NOD/SCID小鼠的生物学特性及其在建立人类白血病模型、干细胞移植、药物研究及NOD/SCID小鼠应用中存在的不足和改良等方面综合述评。

SCID小鼠宣威肺癌原位模型的构建及生物学特性研究

背景与目的宣威女性肺癌发病率居全国首位,亟待深入探讨其发病机制。本研究拟建立SCID小鼠原位宣威肺癌模型,为该病的深入研究提供实验平台。方法将宣威肺癌细胞XWLC-05分别以高低剂量接种于SCID小鼠肺原位,并与皮下移植瘤比较,观察成瘤率、成瘤特性、自发性转移及生存情况。结果原位移植高低剂量组的成瘤率分别为81%和83%,其中高剂量组接种后13天小鼠出现恶液质、对侧肺及胸腔的广泛粘连,无远处转移;低剂量组接种后25天小鼠出现恶液质及远处转移。皮下移植高低剂量组成瘤率分别为100%及94.5%,无远处转移。原位移植组组内及皮下与原位移植组组间的转移率存在统计学差异(P<0.05)。两组组内和组间的生存率比较有统计学差异(P<0.001)。结论成功建立了宣威肺癌的SCID小鼠原位动物模型,为该病的深入研究奠定了实验基础。

人卵巢癌SCID小鼠移植瘤模型、细胞系建立及其生物学特性研究

目的 建立人卵巢癌SCID小鼠移植瘤模型和相应体外细胞系。方法 将病理证实的人卵巢浆液性乳头状腺癌手术切除标本移植于SCID小鼠皮下 ,成瘤后行鼠间传代 ,取移植瘤细胞体外分离培养、传代和建系 ,并应用细胞、分子生物学手段对移植瘤和建系细胞进行一系列生物学特性检测。结果 历时 14个月传至 5代 ,皮下移植瘤存活率为 90 % ,持续 6个月 ,体外建系 (OVA 319)细胞生长稳定。镜下观察组织形态学和超微结构符合原肿瘤组织基本特征 ;染色体分布在 12～ 46条之间 ,多为异倍体 ,显示人类肿瘤异常染色体 ;流式细胞术和RT PCR技术分析原代、体内移植瘤和OVA 319细胞结果一致 ,表现为瘤细胞生长活跃、细胞周期分布相仿 ,MAGE 2基因在mRNA水平异常表达。结论 人卵巢癌SCID小鼠移植瘤模型和OVA

NOD/SCID小鼠抗原对脐血T细胞上TCRVβ亚家族基因克隆性的影响

目的:了解脐血单个核细胞(MNC)体外与NOD/SCID小鼠抗原共培养后,TCRVβ亚家族T细胞分布和克隆性增殖的特点。方法:将NOD/SCID小鼠外周血MNC、骨髓、胸腺及脾细胞反复冻融3次制成可溶性抗原,分别与Ficoll-Hypaque法分离的脐血MNC共培养。第15天和第20天,分别收集细胞提取RNA,用RT-PCR扩增人TCRVβ亚家族基因,并用基因扫描进行T细胞克隆性分析。结果:扩增前脐血T细胞表达大部分Vβ亚家族,经NOD/SCID小鼠抗原诱导后,TCRVβ亚家族T细胞呈限制性表达,某些Vβ亚家族基因(Vβ10、11)呈寡克隆性增殖,而某些Vβ亚家族基因(Vβ2、15、16、19)呈寡克隆表达的趋势。结论:NOD/SCID小鼠抗原可刺激脐血T细胞选择性增殖,提示在建立人源化NOD/SCID小鼠免疫模型时应考虑所存在的GVHR问题。

体外扩增的脐血单个核细胞植入NOD/SCID小鼠的研究

为了探讨在无血清、无基质培养条件下SCF、FL和TPO3种因子组合体外扩增的脐血单个核细胞(MNC)的最佳移植时机及植入潜能,将SCF,FL和TPO3种因子组合体外扩增的脐血单个核细胞培养14天,在0、7、10和14天检测有核细胞数(TNC),CD34+细胞数,CD34+CXCR4+细胞数,CD34+CD49d+的细胞数及集落形成单位(CFU)数,并将SCF+FL+TPO3种因子组合的无血清无基质条件下扩增培养7天前后的脐血单个核细胞移植给经亚致死量照射的NOD/SCID小鼠,6周后用流式细胞术,PCR法检测存活小鼠体内的人源性细胞。结果表明,经过14天的培养,脐血细胞得到了有效的扩增,TNC数,CD34+细胞数,CD34+CD49d+的细胞数于7天达高峰,其后开始下降,而CFU数,CD34+CXCR4+细胞数于第10天达高峰。在移植6周后,扩增脐血移植组的NOD/SCID小鼠的存活率和人源性CD45+细胞的检出率分别为56.25%和(1.39±0.63)%,高于新鲜脐血移植组31.25%和(0.73±0.16)%,亦高于生理盐水移植组(0和0),差异有显著性(p<0.05),扩增脐血移植组有6只NOD/SCID小鼠骨髓细胞中可检测到人特异ALU序列的表达。结论:体外培养7-10天可能是收获细胞的最佳时机;SCF+FL+TPO3种因子组合扩增7天的脐血单个核细胞能够植入NOD/SCID小鼠,其植入水平优于未扩增的脐血;上调脐血造血细胞上CXCR4,CD49d的表达可能会增加脐血造血细胞的植入能力。

含脐血MSCs体系扩增后的脐血重建NOD／SCID小鼠造血的研究

【目的】探讨含人脐血(umbilical cord blood，UCB)来源的间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)联合造血生长因子(hematopoietic growth factors，HGFs)体系扩增后的脐血造血细胞在NOD／SCID小鼠体内植入及重建小鼠造血的能力。【方法】①用含女性胎儿脐血MSCs(UCBMSCs)及HGFs组合的无血清扩增体系体外扩增男性新生儿UCB CD34^+细胞。②收获扩增第6天的UCB细胞，经尾静脉移植给亚致死量照射后的雌性NOD／SCID小鼠。③动态观察移植后小鼠生存情况及外周血象的恢复。④移植后8周，流式细胞仪检测存活小鼠骨髓中人CD45^+、CD45^+CD33^+、CD45^+CD41^+、CD45^+CD3^+和CD45^+CD19^+细胞含量；PCR法检测移植小鼠外周血中人Y染色体表达。【结果】①非扩增组小鼠存活率为60％，扩增组存活率为90％。②动态观察发现：扩增组白细胞和血红蛋白于移植后第20天恢复，PLT于移植后第40天恢复，明显短于非扩增组。③移植后8周，两组小鼠外周血中人Y染色体检测均为阳性，扩增组和非扩增组小鼠骨髓中人CD45+细胞的含量分别为18.5％±8.3％和16.5％±5.7％，差异无统计学意义(P＞0.05)。④移植后8周，扩增组小鼠体内CD45^+CD33^+和CD45^+CD41a^+细胞的百分率均高于非扩增组，但CD45^+CD3^+、CD45^+CD19^+细胞百分比均低于非扩增组。【结论】①含人UCBMSCs体系扩增后的UCB细胞具有NOD／SCID小鼠体内植入并重建小鼠造血的能力，似不具有提高小鼠体内植入率的作用。②扩增后的UCB移植可显著促进移植后小鼠造血恢复，提高小鼠存活率。③扩增后的UCB移植主要促进小鼠髓系及巨核系的植入，但对淋巴系的植入有抑制作用。

慢病毒介导的B区缺失的人凝血因子Ⅷ在NOD/SCID小鼠中的持续表达(英文)

近年来,基因治疗作为一种新的治疗方法给血友病A的治疗提供了新的思路。本研究旨在探讨在体外和NOD/SCID小鼠中应用慢病毒载体介导的血友病A基因疗法的可能性。构建含有B区缺失的人凝血因子Ⅷ(BDDhFⅧ)基因和IRES-eGFP编码序列的慢病毒表达载体pXZ9/BDDFⅧ。通过3质粒共转染293FT包装细胞,包装后感染293FT,HLF,Chang-liver和人骨髓间充质干细胞。在感染后分别通过酶联免疫吸附试验(ELISA),一期法,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和聚合酶链反应(PCR)法检测凝血因子Ⅷ(FⅧ)活性,FⅧ抗原,FⅧ的mRNA转录和基因整合情况。超速离心收集病毒颗粒,并通过门静脉注射感染NOD/SCID小鼠。ELISA分析小鼠血浆FⅧ抗原,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达,转导后1个月RT-PCR分析小鼠肝脏人FⅧ的转录情况。结果表明:成功制备高浓度的重组慢病毒,并能在体外高效转导靶细胞。感染后72 h能检测到高水平的FⅧ活性和FⅧ抗原。RT-PCR和PCR法能敏感检测到人FⅧ基因转录和整合至感染后的细胞中。在所有接受重组慢病毒颗粒注射后的NOD/SCID小鼠肝脏中均能检测到人FⅧ基因的转录,同时重组慢病毒也能在体内高效转导小鼠肝细胞。在感染后72 h小鼠血浆中人FⅧ水平为(49±6)mU,1周后为(54±8)mU,1个月后为(23±4)mU。结论:携带BDDhFⅧ基因的慢病毒颗粒在体内外能高效转导靶细胞,且所有被转导的靶细胞都能有效的分泌人FⅧ。经过门静脉注射慢病毒颗粒的NOD/SCID小鼠可以持续表达人FⅧ。

重建SCID小鼠免疫功能对肝癌抗原的体液免疫应答

为在ＳＣＩＤ小鼠体内获得人免疫Ｂ淋巴细胞，将１２～１４周龄的胎儿肝细胞（１～２）×１０１０／Ｌ腹腔注射于ＳＣＩＤ小鼠，然后再分次接种肝癌细胞。用ＥＬＩＳＡ法于第４，５，６周连续检测ＳＣＩＤ－ｈｕ小鼠血清人ＩｇＧ；用免疫组化ＡＢＣ法检测各种组织中的人淋巴细胞。各实验小鼠均检测到人ＩｇＧ的存在，最高为３９１μｇ／Ｌ，且随时间的延长呈上升趋势。在ＳＣＩＤ－ｈｕ小鼠肝、脾及腹腔接种瘤组织的周边，可见人ＣＤ３＋和ＣＤ２０＋的淋巴细胞。上述结果表明，用人胎肝细胞移植可在ＳＣＩＤ小鼠体内获得人淋巴细胞，并对人肝癌细胞抗原产生免疫应答，分泌一定水平的抗人肝癌的抗体。提示：用人胎肝细胞在ＳＣＩＤ小鼠体内可建立人免疫系统的部分功能。

急性髓性白血病SCID小鼠模型的建立及鉴定

目的:探讨建立急性髓性白血病小鼠模型,并对模型建立过程进行观察、分析和鉴定。方法:重症联合免疫缺陷小鼠(SCID)建立HL-60细胞白血病动物模型,观察SCID小鼠一般情况,监测小鼠外周血HL-60细胞、白细胞、红细胞、血小板的变化,用流式细胞术、骨髓染色体检查等检测小鼠骨髓,濒死或死亡小鼠行组织病理学检查。结果:接种后3-5周,外周血白细胞上升,外周HL-60细胞占非红系有核细胞比例为3%-11%。骨髓HL-60细胞占非红系有核细胞中比例为40%-58%,骨髓细胞中CD33抗原阳性率8.18%-24.45%。小鼠骨髓细胞中有中、亚中部着丝点染色体。结论:HL-60细胞静脉接种SCID小鼠,白血病发病率为100%。其发病症状及组织浸润与人类白血病相类似,可用于研究白血病增殖、分化等机制,是探索新的白血病治疗手段及判断患者预后的重要载体。