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Identification of differentially expressed genes between Sclerotinia-resistant and its near-isogenic susceptible lines of Brassica napus infected with Sclerotinia sclerotiorum
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作者 Chunyun Guan Mei Guan 《Oil Crop Science》 2017年第3期133-145,共13页
The gene-expression profiles between the Sclerotinia-resistant and its nearisogenic susceptible rapeseed lines (Brassica napus) infected with Sclerotinia sclerotiorum were examined by microarray analysis. 102 differen... The gene-expression profiles between the Sclerotinia-resistant and its nearisogenic susceptible rapeseed lines (Brassica napus) infected with Sclerotinia sclerotiorum were examined by microarray analysis. 102 differentially expressed genes (DEGs)were successfully identified, including genes highly related to pathogen resistance. Among these DEGs, 46 were up-regulated and 56 were down-regulated. To verify the reliability of microarray, 2 up-regulated genes (NM_130355 and NM_126666) and 1 down-regulated gene (NM_100191) were chosen and their expression level were detected by real-time fluorescence-based quantitative PCR analysis (RT-PCR). Subsequently, the 102 DEGs were GO (gene ontology) annotated, and to be classified into 22 categories, including enzymes,binding proteins, transcription factors, and proteins with unknown functions. Further subcellular localization prediction demonstrated that these DEGs might be located in/on intracellular region, cell wall, cell membrane, cytoplasm, nucleus, endoplasmic reticulum, chloroplasts and mitochondria. The analysis of Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG) pathways revealed that 10 DEGs were participated in several known biological pathways, including lysine biosynthesis, sulfur assimilation, cysteine metabolism, carotenoid biosynthesis, glyoxylic acid and oxalic acid metabolism etc. Taken together, the preliminary results would provide important information for exploring the molecular basis of Sclerotinia-resistance in Brassica napus. 展开更多
关键词 microarray sclerotinia sclerotiorum differentially expressed genes brassica napus
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油菜BnJAZ7通过调控抗氧化途径促进核盘菌侵染
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作者 杨浩蓉 贾凡 +7 位作者 胡徐 穆蓉 刘维娜 刘昌云 王善之 孙现超 马冠华 陈国康 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第19期3799-3809,共11页
【目的】由核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)引起的油菜菌核病是危害油菜生产的第一大病害。通过分子克隆获得甘蓝型油菜BnJAZ7,利用生物信息学、细胞生物学以及分子生物学手段,明确甘蓝型油菜BnJAZ7的表达特征及其在核盘菌侵染过程中... 【目的】由核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)引起的油菜菌核病是危害油菜生产的第一大病害。通过分子克隆获得甘蓝型油菜BnJAZ7,利用生物信息学、细胞生物学以及分子生物学手段,明确甘蓝型油菜BnJAZ7的表达特征及其在核盘菌侵染过程中的作用,为油菜抗菌核病分子育种打下理论基础。【方法】利用分子克隆技术扩增BnJAZ7全长,并分析其生物信息学特征,利用MEGA X构建BnJAZ7的亲缘关系树。利用实时荧光定量PCR技术测定BnJAZ7在油菜中的组织表达以及核盘菌侵染过程中的表达特征;构建BnJAZ7与GFP的融合表达载体,在激光共聚焦显微镜下观察融合蛋白的亚细胞定位。在本氏烟叶片中瞬时表达融合蛋白,并接种核盘菌,分析BnJAZ7的表达对核盘菌侵染的影响。构建BnJAZ7-OE过表达转基因油菜,在其T2代叶片上接种核盘菌,观察其对核盘菌侵染的影响。利用生化技术检测核盘菌侵染BnJAZ7-OE后抗氧化酶SOD、POD、CAT以及PAL活性;通过实时荧光定量PCR技术分析核盘菌侵染BnJAZ7-OE油菜后相关基因BnSOD、BnPOD、BnPAL和BnCAT的转录水平。【结果】BnJAZ7全长801 bp,编码266个氨基酸,由TIFY和CCT_2两个结构域组成,分子式为C_(1244)H_(2000)N_(358)O_(384)S_(13),等电点为9.57,理论分子量为28.53 kDa,不具跨膜结构域。BnJAZ7与油菜TIFY 7的亲缘关系最近,在油菜茎中表达量最高,并且核盘菌侵染后6、12、24、48 h其表达量持续上升。亚细胞定位显示eGFP:BnJAZ7定位于细胞膜和细胞核。在本氏烟叶片中异源瞬时表达eGFP:BnJAZ7促进核盘菌侵染;BnJAZ7过表达的BnJAZ7-OE转基因油菜也促进核盘菌侵染。核盘菌在BnJAZ7-OE植株中侵染后显著降低了BnPOD、BnSOD和BnPAL的转录水平,显著增加了BnCAT的转录水平,从而降低POD、SOD和PAL活性,增加CAT活性。【结论】甘蓝型油菜BnJAZ7的表达受到核盘菌侵染诱导,且BnJAZ7过表达显著加快了核盘菌的侵染速度。核盘菌通过诱导BnJAZ7上升后降低抗氧化酶编码基因BnPOD、BnSOD和BnPAL转录水平、增加BnCAT转录水平,从而调控抗氧化酶活性来进一步加快侵染。 展开更多
关键词 甘蓝型油菜 BnJAZ7 核盘菌 基因表达 油菜菌核病 抗氧化酶
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甘蓝型油菜Cu/ZnSOD和FeSOD基因的克隆及菌核病菌诱导表达 被引量:17
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作者 杨鸯鸯 李云 +4 位作者 丁勇 徐春雷 张成桂 刘英 甘莉 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期71-78,共8页
依据拟南芥、芥菜型油菜和白菜已知超氧化物歧化酶(SOD)保守序列设计引物,用同源序列法和RT-RACE技术克隆甘蓝型油菜Cu/ZnSOD和FeSOD基因,经序列分析和基因片段拼接,得到Cu/ZnSOD和FeSOD基因的全长cDNA,分别为756 bp(GenBank登录号AY970... 依据拟南芥、芥菜型油菜和白菜已知超氧化物歧化酶(SOD)保守序列设计引物,用同源序列法和RT-RACE技术克隆甘蓝型油菜Cu/ZnSOD和FeSOD基因,经序列分析和基因片段拼接,得到Cu/ZnSOD和FeSOD基因的全长cDNA,分别为756 bp(GenBank登录号AY970822)和1 037 bp(GenBank登录号EF634058)。以cDNA序列设计引物,获得1 322 bp的Cu/ZnSOD基因组DNA(GenBank登录号DQ431853)和1 659 bp的FeSOD基因组DNA(GenBank登录号EF634057)。生物信息学分析表明,Cu/ZnSOD基因ORF框长459 bp,编码152个氨基酸残基的蛋白质,在基因组序列结构上具有7个外显子和6个内含子。而FeSOD基因ORF框长792 bp,编码263个氨基酸残基的蛋白质,在基因组序列结构上具有8个外显子和7个内含子。二者外显子和内含子交接处完全符合GT/AG规则。利用获得的Cu/ZnSOD的cDNA片段作探针,对菌核病菌诱导甘蓝型油菜叶片的mRNA进行Northern blot分析,结果显示在同一品种(系)中菌核病菌诱导后Cu/ZnSOD mRNA表达量比诱导前升高,抗(耐)型油菜Cu/ZnSOD mRNA表达量明显高于感病型。油菜叶片SOD酶活性分析结果也获得了完全一致的结果。以上结果表明,甘蓝型油菜SOD基因与菌核病抗性相关。 展开更多
关键词 Cu/Zn-超氧化物歧化酶 Fe-超氧化物歧化酶 甘蓝型油菜 菌核病菌 基因表达分析
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核盘菌诱导下甘蓝型油菜防御相关基因表达差异分析 被引量:4
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作者 马田田 彭琦 +1 位作者 陈松 张洁夫 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期416-423,共8页
菌核病是油菜主要病害,至今尚未在油菜及相关植物中找到抗性基因。本研究利用qRT-PCR法比较了抗病品种宁RS-1和感病品种APL01在接种核盘菌后0~48 h内11个防御相关基因的表达差异,以揭示抗病品种宁RS-1的抗病机制。结果表明,4个基因(PGI... 菌核病是油菜主要病害,至今尚未在油菜及相关植物中找到抗性基因。本研究利用qRT-PCR法比较了抗病品种宁RS-1和感病品种APL01在接种核盘菌后0~48 h内11个防御相关基因的表达差异,以揭示抗病品种宁RS-1的抗病机制。结果表明,4个基因(PGIP、Cu/ZnSOD、OXO和GLP)在核盘菌诱导前后抗、感品种内表达量均较高,且抗病品种的表达量显著高于感病品种,尤其是PGIP基因,抗病品种宁RS-1在24 h的表达量为诱导前的170.4倍,而感病品种仅为诱导前的3.5倍,该时期抗病品种PGIP的表达量为感病品种的1299.4倍;2个基因(LOX2和PDF1.2)在诱导前后抗、感品种内的表达量均较低,但抗、感品种间表达量差异显著;5个基因(FeSOD、PAL、EDS1、PR1和EIN3)诱导前后抗、感品种内的表达量均较低,且抗、感品种间的表达量差异不显著。推测抗病品种宁RS-1对菌核病的抗性可能是由于PGIP的上调表达,抑制了核盘菌PG蛋白对侵染部位油菜组织细胞壁的降解,从而抑制了油菜菌核病的发生与蔓延。 展开更多
关键词 核盘菌 甘蓝型油菜 防御基因 表达差异
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甘蓝型油菜异分支酸合酶基因的克隆及信号通路相关基因的诱导表达 被引量:4
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作者 彭琦 高建芹 +4 位作者 周晓婴 张洁夫 戚存扣 浦惠明 陈松 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期7-12,共6页
为了解异分支酸合酶1(ICS1,水杨酸合成的限速酶)在甘蓝型油菜抗病过程中的功能,以甘蓝型油菜耐菌核病品种宁RS-1为材料,在核盘菌侵染时,研究甘蓝型油菜ICS1基因和水杨酸信号通路相关基因的诱导表达。首先利用同源序列法克隆得到宁RS-1中... 为了解异分支酸合酶1(ICS1,水杨酸合成的限速酶)在甘蓝型油菜抗病过程中的功能,以甘蓝型油菜耐菌核病品种宁RS-1为材料,在核盘菌侵染时,研究甘蓝型油菜ICS1基因和水杨酸信号通路相关基因的诱导表达。首先利用同源序列法克隆得到宁RS-1中ICS1基因的c DNA序列,命名为Bn ICS1。Bn ICS1序列全长1 719bp,编码572个氨基酸残基,含有1个分支酸结合域。表明油菜中也存在异分支酸途径。接种核盘菌前、后及不同时期荧光实时定量PCR结果发现Bn ICS1在核盘菌接种后6hpi(接种后6h)表达量升高,但是24hpi后降低;而MPK4基因的表达量在6hpi降低,24hpi后升高,说明SA合成先是被核盘菌诱导,但随后又被抑制。EDS5基因和PR1基因表达量从接种后6hpi持续升高,而PDF1.2基因的表达量不断降低,说明SA信号通路最终受核盘菌诱导形成病斑,而茉莉酸途径及其诱导的植物防御反应受到抑制。 展开更多
关键词 甘蓝型油菜 异分支酸合酶 核盘菌 水杨酸信号通路 基因克隆 基因表达
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抗感菌核病甘蓝型油菜近等基因系盛花期叶片转录组比较分析 被引量:4
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作者 张秋平 文李 +2 位作者 张振乾 王峰 官春云 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2020年第3期168-177,共10页
为了研究甘蓝型油菜与菌核病病原核盘菌互作的分子机制,挖掘分别与甘蓝型油菜抗、感病相关的基因,以高抗菌核病品种湘油15(Xiangyou 15)及其感病的近等基因系98C40NL为材料,利用转录组测序技术(RNA-Seq)对2个品种盛花期叶片接种核盘菌... 为了研究甘蓝型油菜与菌核病病原核盘菌互作的分子机制,挖掘分别与甘蓝型油菜抗、感病相关的基因,以高抗菌核病品种湘油15(Xiangyou 15)及其感病的近等基因系98C40NL为材料,利用转录组测序技术(RNA-Seq)对2个品种盛花期叶片接种核盘菌前及接种后12,24 h差异表达基因进行了分析,并采用实时荧光定量PCR技术对部分基因表达进行验证。测序得到34.16 G Clean bases,6个样本中共鉴定出78 582个基因。相对于高感品种,湘油15在3个时间点共有1 296个基因下调表达,1 495个基因上调表达;54个基因在3个时间点都表现显著差异,其中18个基因在3个时间点都下调,27个基因在3个时间点都上调。差异基因主要富集在氧化还原、植物激素信号转导、钙信号通路、苯丙烷类代谢、次生代谢产物合成等途径。通过荧光定量PCR验证,BnaA03g09060D、BnaA01g26640D、BnaA03g09090D、BnaA04g12120D、BnaA01g26920D 5个基因在高抗品种的表达显著高于高感品种,可能与寄主植物防御核盘菌的侵染有关;BnaA06g10010D、BnaA09g16180D、BnaAnng19580D、BnaC01g40400D、和BnaC06g05340D 5个基因则在高感品种中表达显著高于高抗品种,可能与核盘菌感病受体相关。研究结果为解析油菜与核盘菌互作机理及挖掘菌核病抗性和受体基因提供参考依据。 展开更多
关键词 甘蓝型油菜 菌核病 转录组 差异表达基因 功能
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茉莉酸和乙烯信号途径参与了油菜菌核病防卫反应 被引量:3
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作者 王政 姚银安 《生物学杂志》 CAS CSCD 2013年第1期1-4,13,共5页
茉莉酸(JA)和乙烯(ET)介导的信号防卫反应在植物抗病性方面具有重要作用。用核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)分别接种甘蓝型油菜(Brassica napus)抗病品种中双9号和感病品种84039,通过荧光定量RT-PCR方法探测JA和ET的关键合成基因及... 茉莉酸(JA)和乙烯(ET)介导的信号防卫反应在植物抗病性方面具有重要作用。用核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)分别接种甘蓝型油菜(Brassica napus)抗病品种中双9号和感病品种84039,通过荧光定量RT-PCR方法探测JA和ET的关键合成基因及其信号途径标志基因的相对表达水平。结果显示,S.sclerotiorum在这两个品种中都能够诱导这些基因的表达,并且这些基因的相对表达水平在中双9号中显著高于84039;甲基茉莉酸(MeJA)和1-氨基环丙烷-1-羧酸(ACC)的药理学实验结果显示JA和ET信号反应能够相互促进,并且JA和ET信号反应本身存在自我放大的功能。这些结果表明茉莉酸和乙烯信号转导途径参与了甘蓝型油菜菌核病防卫反应。 展开更多
关键词 甘蓝型油菜 菌核病 茉莉酸 乙烯 基因表达
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甘蓝型油菜几丁质酶基因家族进化及其应答病菌的表达分析(英文) 被引量:4
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作者 徐文 周腾胜 +3 位作者 鲁丹丹 安素妨 侯锦娜 栗根义 《河南农业科学》 北大核心 2020年第2期89-103,共15页
黑胫病和菌核病是造成世界油菜产量下降的2种主要病害,分别由油菜茎基溃疡病菌和核盘菌引起。几丁质酶基因家族被认为是一类病害相关蛋白质,在植物抵抗病菌和非生物胁迫应答过程中发挥着重要作用。然而,甘蓝型油菜中关于几丁质酶基因家... 黑胫病和菌核病是造成世界油菜产量下降的2种主要病害,分别由油菜茎基溃疡病菌和核盘菌引起。几丁质酶基因家族被认为是一类病害相关蛋白质,在植物抵抗病菌和非生物胁迫应答过程中发挥着重要作用。然而,甘蓝型油菜中关于几丁质酶基因家族进化及其应答黑胫病和菌核病的表达研究尚未有报道。本研究在甘蓝型油菜基因组中共鉴定了68个几丁质酶基因,分为5个不同的类,分布在15条染色体上。进化分析表明,甘蓝型油菜中几丁质酶基因家族成员的扩张主要是由片段复制和串联重复所致。此外,利用转录组测序数据分析了甘蓝型油菜几丁质酶基因家族应答2种病菌胁迫的表达谱。结果表明,在2种病菌侵染下,几丁质酶基因家族中有一些成员的表达均被诱导,也存在一些几丁质酶基因家族成员被特异地诱导表达。由此可见,甘蓝型油菜中几丁质酶基因家族不同成员的功能在长期进化过程中发生了分化,在应答不同病害胁迫中发挥特异的作用。 展开更多
关键词 甘蓝型油菜 几丁质酶基因家族 表达模式 油菜茎基溃疡病菌 核盘菌
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甘蓝型油菜BnCNGC基因家族鉴定及其在核盘菌侵染和PEG处理下的表达特性分析
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作者 陈松余 丁一娟 +5 位作者 孙峻溟 黄登文 杨楠 代雨涵 万华方 钱伟 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期1357-1371,共15页
CNGC是植物中普遍存在的环核苷酸门控通道,对植物的逆境响应有重要作用。系统分析甘蓝型油菜BnCNGC基因家族成员全基因组分布、结构、进化及其响应不同逆境胁迫的表达特性,对于阐明其生物学功能具有重要意义。本研究利用拟南芥和甘蓝CNG... CNGC是植物中普遍存在的环核苷酸门控通道,对植物的逆境响应有重要作用。系统分析甘蓝型油菜BnCNGC基因家族成员全基因组分布、结构、进化及其响应不同逆境胁迫的表达特性,对于阐明其生物学功能具有重要意义。本研究利用拟南芥和甘蓝CNGC蛋白保守结构域及特异基序氨基酸序列在全基因组水平鉴定了甘蓝型油菜BnCNGC家族成员,分析其基因结构、染色体定位、蛋白理化性质、蛋白保守结构域、系统进化及启动子顺式作用元件等。利用转录组数据,筛选甘蓝型油菜逆境响应候选BnCNGC成员,并采用实时荧光定量PCR分析其在核盘菌、PEG模拟干旱胁迫下的表达模式。结果显示,共鉴定到49个甘蓝型油菜BnCNGC成员,分布于除A08、C06的17对染色体上,含有5~10个内含子,其上游1500 bp包含大量逆境胁迫响应元件。BnCNGC家族成员编码的蛋白质含413~801个氨基酸,相对分子量(MW)范围47.62~110.58kD,等电点(pI)范围6.10~9.88。系统进化分析表明,BnCNGC分为Group Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ四类。转录组数据分析表明, BnCNGC9、BnCNGC27和BnCNGC48均参与逆境胁迫响应。实时荧光定量PCR分析表明,甘蓝型油菜叶片中BnCNGC9、BnCNGC27和BnCNGC48均在核盘菌胁迫下表达下调,下调量分别为48.2%~99.1%、79.4%~87.1%和39.7%~92.6%。PEG模拟干旱胁迫时,甘蓝油菜叶片中BnCNGC9在处理24 h后上调3.34倍, BnCNGC48在处理48 h后上调6.27倍, BnCNGC27对干旱胁迫不敏感。 展开更多
关键词 甘蓝型油菜 CNGC基因家族 核盘菌 PEG模拟干旱 表达分析
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水杨酸途径中的防御基因在转草酸氧化酶基因油菜中的表达 被引量:2
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作者 冀瑞琴 董祥柏 +3 位作者 冯辉 高荣村 刘越英 刘胜毅 《植物生理学通讯》 CSCD 北大核心 2009年第7期677-680,共4页
采用RT-PCR方法检测对水杨酸依赖的信号途径中PR-1、GLU和CHI3个防御基因在转OXO基因与非转基因的油菜中表达差异的结果表明,在转基因油菜株系中这3个基因都有不同程度的上调表达,暗示转OXO基因的油菜抗菌核病的能力增强可能与对水杨酸... 采用RT-PCR方法检测对水杨酸依赖的信号途径中PR-1、GLU和CHI3个防御基因在转OXO基因与非转基因的油菜中表达差异的结果表明,在转基因油菜株系中这3个基因都有不同程度的上调表达,暗示转OXO基因的油菜抗菌核病的能力增强可能与对水杨酸依赖的信号途径受诱导有关。 展开更多
关键词 对水杨酸依赖的信号途径 防御基因 油菜 菌核病
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甘蓝型油菜EXA1的克隆及其对植物抗病的调控作用 被引量:1
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作者 吴楠 覃磊 +3 位作者 崔看 李海鸥 刘忠松 夏石头 《植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期385-393,共9页
拟南芥(Arabidopsis thaliana)EXA1缺失会导致exa1-2突变体植株PR基因表达上调,对病原菌的抗性提高。该研究通过克隆甘蓝型油菜(Brassica napus)中的BnaEXA1,并将其在拟南芥exa1-2突变体中异源超表达,发现BnaEXA1超表达不仅可恢复突变... 拟南芥(Arabidopsis thaliana)EXA1缺失会导致exa1-2突变体植株PR基因表达上调,对病原菌的抗性提高。该研究通过克隆甘蓝型油菜(Brassica napus)中的BnaEXA1,并将其在拟南芥exa1-2突变体中异源超表达,发现BnaEXA1超表达不仅可恢复突变体的表型,而且显著降低突变体中PR1和PR2基因的表达量,导致其对核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)和卵菌H.a.Noco2易感,表明BnaEXA1调控植物的基础抗性。 展开更多
关键词 甘蓝型油菜 抗病性 EXA1 PR基因表达 核盘菌
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