马氏钳蝎毒昆虫类神经毒素的分离、纯化及性质研究

经Sephadex G-50,sp-Sephadex C-25二步柱层析法,从山东马氏钳蝎(Bu-thus martensii Karch)粗毒中分离出四种对美洲(虫非)蠊有强直麻痹反应的毒性蛋白组份。其中二个组分在SDS聚丙烯酰胺电泳和等电聚焦电泳上均呈现单一区带,命名为BmK IT-Ⅰ,BmK IT-Ⅱ其pI分别为8.2和8.4,分子量分别为8400和7560。同时还分析了二个组份的氨基酸组成。经DABITC/PITC双偶合法测定了BmKIT-Ⅰ和BmK IT-Ⅱ的N端部份氨基酸排列顺序,它们分别为H_2NVal.Arg.Asp.Ala……H_2NVal.Arg.Asp.Gly……。 电生理学研究表明,纯化的BmK IT-I(1×10^(-5)g/ml)对(虫非)蠊腹Ⅵ神经节的突触传递有阻断作用,阻断后用生理溶液洗,则突触传递可恢复。从同一蝎毒粗毒中分离纯化的哺乳动物类神经毒素BmKⅢ在浓度高出100倍(1×10^(-3)g/ml)时也可以阻断(虫非)蠊腹Ⅵ神经节的突触传递,但用生理溶液冲洗没有观察到恢复。

一种源自北非蝎的抗昆虫毒素Am IT的结构与功能鉴定(英文)

本研究主要分离和鉴定了一种源自北非蝎被称为Am IT的新毒素。详细分析了Am IT对昆虫神经索钠电流的调节效应。Am IT经凝胶过滤纯化后通过C18反相高效液相色谱法纯化。采用雄性德国蟑螂(德国小蠊)的幼虫和C57/BL6小鼠进行Am IT体内毒性分析。Am IT与两种β毒素的竞争实验则采用125I修饰的毒素通过与大鼠脑突触体膜的放射免疫法测定。Am IT的氨基酸序列通过Edman降解法测定。在结合实验中,Am IT被观察到与另一种源自北非蝎的毒素AaH IT4存在竞争效应。而且它可以被β型毒素的抗体识别,由此说明它与β型毒素(或相关毒素家族)的结构相似。新毒素显示了双重的活性,它既能与抗哺乳动物毒素在结合实验中竞争,又能促使昆虫躯体产生收缩反应。该毒素能够竞争携带放射标记的β毒素Css IV与大鼠突触体膜钠通道的结合。通过氨基酸序列分析,Am IT显示出与AaH IT4有92%的同源性。以上结果说明,Am IT不但显示了隶属于旧大陆的抗昆虫毒素的性质,表现为结合于昆虫的钠通道;而且它与隶属于新大陆的抗哺乳动物毒素类似,表现为对小鼠的毒性。因此,Am IT与AaH IT4在结构与功能上是极为类似的。