改性膨润土混凝剂Scpb处理印染废水

探讨了改性膨润土混凝,Scpb对印染废水的实际处理效果,明确了Scpb在短时间内不但能够使COD去徐率达到60％以上,去浊率达70％以上,脱色率达60％以上,而且有较宽的pH适用范围。改性膨润土混凝剂Scpb是由膨润土添加SCMC、PAC改性制成的80目固体颗粒。

罗非鱼无乳链球菌C5a肽酶(ScpB)的原核表达及其免疫原性

以尼罗罗非鱼（Oreochromisniloticus）为鱼体样本，克隆了罗非鱼源无乳链球菌（Streptococcusagalactiae）scpB基因，构建了原核表达质粒pET32a（＋）-scpB，转入大肠杆菌BL2I（DE3）后，IPTG诱导表达，表达的重组蛋白经镍离子金属螯合柱纯化及超滤管浓缩后，进行SDS-PAGE和Westernblot分析鉴定。纯化的重组蛋白以不同剂量（1μg/g、3μg/g、5μg／g）免疫尼罗罗非鱼后，每周检测各实验组鱼体血清非特异性免疫指标[溶菌酶活性、超氧化物歧化酶（SOD）活力]及抗体水平变化情况，并于免疫4周后以4倍LD50的剂量对其进行人工攻毒。结果显示，该重组蛋白在大肠杆菌中以包涵体的形式存在；对尼罗罗非鱼的相对免疫保护率为69．66％-89．00％，其中5pg儋组的相对保护率最高；受免鱼体血清中溶菌酶活性、SOD活力和抗体水平较对照组有极显著提高（P〈0．01），结果表明，重组蛋白ScpB具有较强的免疫原性和保护作用。本研究旨在为GBS多肽疫苗的研制奠定基础。

罗非鱼源无乳链球菌ScpB蛋白的表达及IgM抗体间接ELISA方法的建立

为了建立一种具有良好特异性、敏感性、重复性和准确性的,能够检测罗非鱼源无乳链球菌的ELISA方法,试验首先进行了罗非鱼源无乳链球菌ScpB基因的克隆及其蛋白的表达和纯化,然后以重组蛋白作为包被抗原、罗非鱼待测血清作为一抗、抗罗非鱼IgM单克隆抗体2C10作为二抗、羊抗鼠IgG-HRP作为三抗建立间接ELISA方法并对该方法进行条件(抗原包被质量浓度、一抗稀释度、抗原包被条件、封闭液、一抗作用时间、二抗作用时间)优化,最后确定该方法的临界值并进行特异性、敏感性、重复性和符合性试验。结果表明:纯化后的罗非鱼源无乳链球菌ScpB蛋白大小为104.6 ku,与预期大小一致,可被罗非鱼IgM抗体特异性识别;建立的IgM抗体间接ELISA方法的最佳抗原包被质量浓度为0.1μg/mL,最佳一抗稀释度为1∶5,最佳抗原包被条件为4℃、12 h,最佳封闭液为5%脱脂乳,最佳一抗作用时间为2 h,最佳二抗作用时间为0.5 h;临界值上限为0.456,临界值下限为0.377;批内变异系数为3.349%~5.272%,批间变异系数为2.793%~5.902%,均低于10.000%;仅可检测出罗非鱼无乳链球菌阳性血清和罗非鱼ScpB蛋白免疫血清,无法检测出罗非鱼嗜水气单胞菌阳性血清、罗非鱼荧光假单胞菌阳性血清、罗非鱼海豚链球菌阳性血清和罗非鱼鳗弧菌阳性血清;待测血清最大稀释度为1∶640;与无乳链球菌全菌包被ELISA检测方法比较,阳性率略低,符合率为83.43%。说明本研究建立的罗非鱼源无乳链球菌IgM抗体间接ELISA方法具有良好的特异性、敏感性、重复性和准确性。

基于cfb和scpb基因的无乳链球菌PCR检测方法比较及临床应用

目的比较基于cfb和scpb基因检测无乳链球菌(GBS)的两种PCR方法,建立合理的实时荧光PCR检测体系,实现快速检测生殖道无乳链球菌的目的。方法通过对60株临床分离的无乳链球菌和15株非无乳链球菌进行PCR扩增,对比和验证cfb和scpb基因的敏感性和特异性,选择检测性能更好的基因为靶标,建立实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测体系。对100份宫颈拭子、精液等常见临床标本进行检测,检测结果与传统的培养法进行比较。阳性率的比较采用卡方检验,P<0.05为差异有统计学意义。结果cfb和scpb基因的特异性均为100%,敏感性分别为98.3%、66.7%,差异有统计学意义(P<0.005)。基于cfb基因的real-time PCR检测100份GBS临床样本的阳性率为35%,高于培养法(30%),差异无统计学意义,但这100份标本中有7份real-time PCR法扩增阳性但未培养出无乳链球菌。结论基于cfb基因的real-time PCR法检测GBS具有直接、快速、简便、高特异性等特点,且敏感性高于常规培养法,可应用于多种临床标本的检测,在临床上具有较大的应用前景。

罗非鱼无乳链球菌特异性IgM抗体ELISA检测方法的建立及对疫苗免疫效果的评估

为建立检测罗非鱼无乳链球菌特异性抗体的方法及评价疫苗的免疫效果,本研究首先制备纯化罗非鱼无乳链球菌特异性IgM和兔抗罗非鱼无乳链球菌IgM的IgG,利用原核表达纯化的无乳链球菌ScpB蛋白作为包被抗原,通过优化反应条件,建立检测无乳链球菌特异性IgM抗体的ELISA方法,并通过比较测定无乳链球菌疫苗免疫后血清抗体水平变化与攻毒后相对免疫保护率的关系来评估该方法的有效性。结果表明:该方法仅能够特异性的检测罗非鱼的血清抗体,而与其它鱼类的血清抗体无交叉反应,特异性良好,其敏感性为1∶800,批内、批间变异系数均小于10%,具有较好的重复性,并且抗体水平的变化与相对免疫保护率(RPS)变化具有平行相关性,变化趋势基本一致。本研究首次建立了检测罗非鱼无乳链球菌特异性IgM抗体的ELISA方法,该方法可以作为评估无乳链球菌疫苗免疫效果的有效手段,也为罗非鱼无乳链球菌病的检测提供技术支撑。