Antitumor effects and compatibility mechanism of Hedyotis Diffusa-Sculellaria Barbata herb pair

OBJECTIVE Hedyotis diffusa Willd and Scutellaria barbata D Don are most commonly used herb pair for cancer treatment in traditional Chinese medicine.This study aimed to evaluated the in vitro and in vivo antitumor effects and the compatibility mechanisms of Hedyotis diffusa-Sculellaria barbata herb pair.METHODS Hedyotic diffusa extract,Scutellariae Barbatae extract,and herb pair extract were prepared and the component were detected by UPLC-Q-TOF-MS.The effects of different concentrations of Hedyotic diffusa extract,Scutellariae Barbatae extract,and herb pair extract were detected using MTS assay.The in vivo antitumor effects were evaluated in Panc28 pancreatic cells bearing nude mice model.The compatibility mechanism of Hedyotis diffusa-Sculellaria barbata herb pair were evaluated based on the network pharmacology,using TCMSP,Cytoscape 3.6.1 software,and DAVID 6.8.The anticancer mechanism were further validated in vitro.RESULTS Both the MTS and in vivo results showed that herb pair extract showed more obvious inhibitory effects on cancer cells compared to each individual.A total of 37 active components were selected from Hedyotis diffusa and Sculellaria barbata,33 kinds of active ingredients are involved in their anti-tumor effects.58 cancer-related targets and 66 KEGG pathways were identified.The potential targets for the herb pair might be prostaglandin G/H synthase 2(PTGS2),HSP90,EGFR,72 ku typeⅣcollagenase,PPAR-γ,et al.In vitro validation result showed that compatibility mech⁃anisms was related with HSP90,EGFR related pathways.CONCLUSION The result of the study preliminarily verified the basic anti-tumor pharmacological effects of Hedyotis diffusa-Sculellaria barbata herb pair,and lays a solid foundation for further studies on the anti-tumor mechanism of the herbal pair.

半枝莲治疗恶性胸腔积液作用机制的网络药理及分子对接研究

目的通过网络药理和分子对接方法,探究半枝莲治疗恶性胸腔积液(malignant pleural effusion,MPE)的作用机制。方法利用IBW SPSS Modeler 18.0软件对绍兴第二医院中医科门诊治疗MPE处方信息进行数据挖掘,使用中药系统药理学数据库与分析平台筛选半枝莲有效活性成分,利用GeneCards、OMIM、DisGeNET数据库获取MPE疾病靶点,通过Cytoscape3.9.1软件构建“中药-成分-靶点”网络图。利用DAVID在线平台生成基因本体(gene ontology,GO)功能富集分析图和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路富集分析图。使用PyMol和AutoDock vina软件将半枝莲有效活性成分与核心靶点蛋白进行分子对接验证。结果半枝莲治疗MPE的主要活性成分有18种,其中黄芩黄酮、3-甲基鼠李素、荠苧黄酮、黄芩素、木犀草素等为主要活性成分,EGFR、AKT1、HIF1A、SRC等为核心靶点蛋白。结论半枝莲通过多成分、多靶点作用于MPE,为进一步研发MPE治疗药物提供理论基础和新的切入点。

半枝莲总生物碱的纯化分离及其抗肿瘤活性研究

目的 筛选半枝莲总生物碱的纯化分离最优方法及抗肿瘤活性最好部位。方法 通过大孔树脂色谱法及酸提碱沉法分别纯化半枝莲总生物碱,利用紫外光谱法测定各部分总生物碱含量;同时,对各分离部位进行人肝癌细胞(HepG2)细胞毒活性考察,并用Anneix V/PI双标记法检测活性最好部位对细胞凋亡的影响。结果 半枝莲最优的纯化方法为大孔吸附树脂法,其中细胞毒活性表现最好的部位为大孔树脂70%乙醇洗脱部分。细胞流式实验结果显示在一定浓度范围内70%乙醇洗脱部分对HepG2细胞的凋亡呈剂量依赖性。结论 半枝莲生物碱能有效的诱导肿瘤细胞发生凋亡,且大孔树脂70%乙醇洗脱所得生物碱抗肿瘤活性最强。本研究为半枝莲中具有抗肝癌作用总生物碱的筛选提供了可靠方法,也为中药半枝莲经济价值的评估提供了一定参考依据。

半枝莲含药血清对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响

目的:探讨半枝莲含药血清对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响及其机制。方法:体外常规培养人卵巢癌SKOV3细胞,倒置显微镜下观察半枝莲含药血清作用后SKOV3细胞形态的改变,MTT法检测细胞增殖抑制率,应用流式细胞技术检测细胞周期及凋亡率。结果:与空白对照组比较,给药后细胞状态变差,形态和贴壁情况等发生改变。半枝莲含药血清可有效抑制SKOV3细胞生长,低、中、高剂量组抑制率呈递增趋势,同剂量组24 h、48 h、72 h抑制率递增。流式细胞仪检测结果显示,与空白对照组比较,半枝莲含药血清组G0/G1期细胞所占比例增多,空白对照组、半枝莲含药血清低、中、高剂量组48 h细胞凋亡率分别为7.94%、8.36%、17.82%、21.12%。结论:半枝莲含药血清对人卵巢癌SKOV3细胞的增殖有抑制作用,其机制与影响细胞周期和诱导细胞凋亡有关。

复方汉防己颗粒中野黄芩苷的定性鉴别和含量测定

目的 建立对复方汉防己颗粒中来源于半枝莲的有效成分野黄芩苷的定性鉴别和含量测定方法 。方法 采用薄层色谱法对野黄芩苷进行定性鉴别,采用高效液相色谱法进行含量测定。结果 薄层色谱图斑点显色清晰,阴性对照无干扰;含量测定野黄芩苷在22.4～156.8μg/ml质量浓度范围内与峰面积呈良好线性关系,r=0.999 6（n=5）,平均加样回收率为97.79%,RSD=0.32%（n=6）。结论 所建立方法 专属性强、重现性好,可作为复方汉防己颗粒的质量控制方法 。

半枝莲联合针灸对2型糖尿病大鼠肝脾肺组织结构的保护作用

【目的】明确半枝莲醇提物联合针灸对2型糖尿病(T2DM)的治疗效果,为动物T2DM提供有效的治疗手段,进而保障宠物业的健康发展。【方法】选取60只4周龄的SPF级近交系Wistar雄性大鼠随机分为2组,健康对照组(H组)15只和建模组(M组)45只;链脲佐菌素(45 mg/kg)联合高糖高脂诱导构建T2DM大鼠模型,建模成功后将其随机分为模型对照组(M组,15只)、半枝莲治疗组(S组,15只)及半枝莲联合针灸治疗组(A组,15只,针灸穴位包括脾俞、肾俞、三阴交和足三里)。对A组和S组进行3个疗程(每疗程6 d)的治疗,分别于治疗第7、14和21 d采集各处理组大鼠的尾静脉血测定空腹血糖(FBG),同时各处理组分别处死5只大鼠,取肝脏、脾脏和肺脏固定后制作石蜡切片,肝脏和脾脏采用HE染色,肺脏采用HE染色和Masson染色,观察其组织结构病理变化。【结果】与H组相比,M组大鼠的体重极显著下降(P<0.01,下同),而FBG极显著升高;肝脏细胞由水肿发展为脂肪变性或局灶性坏死,炎症细胞浸润逐渐增强;脾脏组织局部细胞坏死,红髓和白髓分布混乱,淋巴细胞减少且排列紊乱;肺脏肺泡内出血,支气管黏膜下层和血管壁胶原纤维增生,最终导致部分肺泡萎陷或实变消失。与M组相比,A组和S组大鼠的体重呈增长趋势,至治疗第21 d极显著升高,而FBG在治疗第14和21 d均极显著降低;肝脏脂肪变性得到改善、水肿减轻、炎症细胞浸润减少;脾脏红髓和白髓结构、生发中心均逐渐趋于正常,淋巴细胞数量和脾小结数量均增多,且A组大鼠的增加数量多于S组大鼠;肺脏内出血减轻、炎症细胞减少,A组大鼠肺脏的肺间隔增厚程度低于S组大鼠。【结论】STZ联合高脂高糖诱导T2DM大鼠模型稳定,能对大鼠肝脏、脾脏和肺脏造成损伤。半枝莲或半枝莲联合针灸治疗对T2DM大鼠肝脏、脾脏和肺脏组织结构均具有较好的改善效果,且以针灸配合半枝莲的效果更优。

半枝莲中4种黄酮类化合物的含量测定

建立一种同时测量半枝莲中野黄芩苷、野黄芩素、木樨草素和芹菜素含量的高效液相测定方法。采用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),甲醇-乙腈-0.1%甲酸水为流动相(梯度洗脱),流速为1.0 mL/min,进样量为10μL,柱温为30℃。结果表明4个化合物分别在浓度范围10.20~1020μg/mL、2.21~221μg/mL、2.05~205μg/mL、2.00~200μg/mL内呈现出良好的线性关系(R≤0.9995),四种标准品的加样回收率在90.17%~107.4%之间。本方法简便易行,适于同时检测半枝莲中野黄芩苷、野黄芩素、木樨草素、芹菜素的含量。

姜黄素脂质体的制备及包封率测定

目的:探讨姜黄素脂质体的制备,建立其含量测定方法,测定其包封率。方法:采用薄膜分散法制备姜黄素脂质体,采用超速离心法分离脂质体及游离药物,采用紫外分光光度法(UV)测定姜黄素含量,计算其包封率。结果:采用薄膜分散法制得的姜黄素脂质体为黄色,呈圆形或类圆形,平均粒径为0.49μm,分布均匀,脂质体的平均包封率为96.02%,符合2010版《中国药典》的要求。姜黄素脂质体中姜黄素含量为9.87mg/g,RSD为0.99%。结论:薄膜分散法可以简单快速地制备姜黄素脂质体,操作流程掌握容易,制备的脂质体形态较好、包封率较高;超速离心法与紫外分光光度法结合可以准确、可靠地测定姜黄素脂质体的含量。

半枝莲对5-FU治疗晚期大肠癌的疗效及血清miRNA-34a表达水平的影响

目的 探讨半枝莲对5-氟尿嘧啶(5-FU)治疗晚期大肠癌的临床疗效及血清miRNA-34a表达水平的影响。方法 将60例晚期大肠癌患者按随机数字表法分为对照组和半枝莲组,每组30例。对照组给予5-FU治疗,半枝莲组在对照组治疗的基础上给予半枝莲片口服。比较2组血清miRNA-34a表达水平及治疗有效率、患者的生存期,采用Pearson相关系数分析血清miRNA-34a表达水平与预后的关系。结果 半枝莲组治疗有效率明显高于对照组(66.67%比40.00%,P <0.05),半枝莲组患者的生存期为(21.27±2.54)个月,明显长于对照组的(18.82± 3.44)个月(P<0.05),半枝莲组血清miRNA-34a表达水平为(1.21±0.33),明显高于对照组的(1.03±0.25)(P<0.05)。相关性分析结果显示,血清miRNA-34a表达水平与患者的生存期呈正相关(r=0.78,P <0.05)。结论 半枝莲能提高5-FU治疗晚期大肠癌的治疗有效率,延长患者的生存期,这可能与半枝莲下调血清miRNA-34a的表达水平有关。

基于生物信息学方法探讨白花蛇舌草-半枝莲抗乳腺癌的分子机制

目的通过生物信息学及网络药理学方法,探讨白花蛇舌草(HDW)-半枝莲(SB)治疗乳腺癌(BC)的分子机制。方法通过中药系统药理数据库(TCMSP)筛选HDW-SB共同有效成分及有效成分的潜在靶点基因,使用基因表达综合数据库(GEO)中GSE45827芯片筛选出BC组织和癌旁正常组织差异表达基因(DEGs),建立HDW-SB共同有效成分所调控的BC靶点的蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络,经拓扑分析和预后价值分析筛选出BC关键靶点。最后,通过对BC关键靶点与HDW-SB共同有效成分进行分子对接,筛选出HDW-SB核心有效成分。结果共鉴定出25种HDW-SB共同有效成分,并筛选出544个BC DEGs,分别构建BC DEGs和HDW-SB共同有效成分所调控的BC靶点的PPI网络;拓扑分析和预后价值分析确定BC的关键靶点为HSPB1、CCNA2和NQO1,分子对接分析显示,HDW-SB治疗BC的核心有效成分为quercetin、rhamnoside和luteolin。结论HWD-SB可能是通过干预HSPB1、CCNA2和NQO1达到治疗BC的作用。

基于分子对接和网络药理学探讨半枝莲治疗脑梗死的作用机制

目的 运用网络药理学研究半枝莲治疗脑梗死的作用机制。方法 通过中药系统药理学数据库(TCMSP)筛选半枝莲的化学成分及对应靶点,借助GeneCards、OMIM数据库获取脑梗死的相关靶标,通过网络可视化软件Cytoscape 3.7.2制作“半枝莲-关键化学成分-脑梗死-靶蛋白”网络图,通过蛋白质互作在线数据库构建蛋白互相作用图,对共有基因进行基因本体(GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。结果 共筛选出半枝莲关键药效成分29个,脑梗死疾病靶点1714个,半枝莲与脑梗死的共同靶点57个,GO富集分析获得73条生物学过程,KEGG富集分析筛选出半枝莲治疗脑梗死的信号通路109条。分子对接结果显示主要活性成分与关键靶点有较好的结合力。半枝莲治疗脑梗死的主要成分为槲皮素、汉黄芩素、黄芩苷、木犀草素,推测其可能通过干预糖尿病并发症晚期糖基化终末产物与其受体信号通路、流体剪切应力与动脉粥样硬化、细胞凋亡通路、p53信号通路等,发挥治疗脑梗死的作用。结论 半枝莲治疗脑梗死潜在的分子机制与血管生成、抗炎及凋亡等生物学过程密切相关,白细胞介素-6(IL-6)、半胱天冬氨酸蛋白酶-3(CASP3)、血管内皮生长因子A(VEGFA)可能是核心作用靶基因。

应用野菊花、板蓝根、半枝莲超声雾化治疗慢性咽炎的用药效果探讨

目的探讨野菊花、板蓝根以及半枝莲超声雾化吸入治疗慢性咽炎的临床疗效。方法收集2012年1月-2014年1月收治的慢性咽炎患者120例,随机分为观察组与对照组,各60例。对照组予以庆大霉素和地塞米松超声雾化吸入,观察组予以野菊花、板蓝根以及半枝莲超声雾化吸入,比较两组的临床疗效。结果观察组的治疗总有效率为93.3%,显著高于对照组的81.7%（P〈0.05）;两组均未见明显不良反应。结论野菊花、板蓝根以及半枝莲超声雾化吸入治疗慢性咽炎疗效显著,无明显不良反应,是一种安全有效的用药方案,值得推广应用。

不同厂家半枝莲配方颗粒中野黄芩苷的含量考察

目的:以野黄芩苷为含量测定指标,考察不同生产厂家生产的半枝莲配方颗粒的质量。方法:建立半枝莲配方颗粒野黄芩苷的反相高效液相色谱分析方法,测定半枝莲配方颗粒中野黄芩苷的含量。Dionex C18柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相:以甲醇-水-醋酸(35∶61∶4)为流动相,流速:1.0mL/min;柱温:30℃。于335nm测定半枝莲配方颗粒中的野黄芩苷含量。结果:野黄芩苷在0.01mg/mL^0.16mg/mL范围内有良好的线性关系,平均回收率为98.50%(RSD=1.18%,n=6)。测定了6个厂家12批半枝莲配方颗粒。结论:目前半枝莲配方颗粒中野黄芩苷含量存在一定的差异,建议确定半枝莲配方颗粒含量标准及测定方法。该研究所用方法准确、简便、无干扰,可用于半枝莲配方颗粒中野黄芩苷的含量测定。

半枝莲β-谷甾醇抗肝肿瘤机制的研究

目的探讨半枝莲β-谷甾醇的抗肿瘤作用机制。方法建立小鼠体内移植性肝癌模型,分别比较半枝莲β-谷甾醇(Sβ)组和环磷酰胺(cytoxan,CTX)组抗肝癌的作用。结果与模型组比较,CTX组、Sβ组、CTX+Sβ组均能显著抑制实体瘤生长(P<0.01),与CTX组比较,Sβ组能显著提高胸腺、脾脏指数(P<0.01),Sβ对荷瘤小鼠脾细胞分泌IL-2具有显著促进作用(P<0.01),而对荷瘤小鼠脾细胞分泌IL-10具有显著抑制作用(P<0.01)。结论 Sβ有一定的抗肿瘤作用,能提高机体免疫功能;其抗肿瘤机理可能与升高IL-2和降低IL-10有关。

半枝莲总黄酮对高脂高糖糖尿病大鼠模型糖脂代谢及血液流变学的影响

目的:观察半枝莲总黄酮对高脂高糖糖尿病大鼠糖脂代谢及血液流变学的影响。方法:采用喂养高糖高脂饲料加舌下静脉注射25mg/kg链脲佐菌素造糖尿病大鼠模型,大鼠随机分为空白组、模型组、二甲双胍组(250mg/kg)、半枝莲总黄酮400mg/kg、200mg/kg、100mg/kg组,连续给药30天。于给药的第10、20、30天测空腹6小时血糖值;第31天,禁食后12h,灌胃后2h,腹主动脉采血,检测血液流变学的各项指标,并测血清中低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、胆固醇、甘油三酯、胰岛素、胰岛素抗体、糖化血清蛋白等指标;取胰腺组织并采用HE染色观察病理变化。结果:与模型组比,二甲双胍组、半枝莲总黄酮各剂量组均可显著降低血糖水平;降低低密度脂蛋白、胆固醇、甘油三酯含量,可显著升高高密度脂蛋白;显著升高胰岛素含量,降低胰岛素抗体和糖化血清蛋白水平,降低全血低切、中切、高切粘度、血浆粘度、红细胞压积、血沉水平;并能显著改善糖尿病模型大鼠的胰岛细胞萎缩。结论:半枝莲总黄酮对大鼠糖尿病模型具有保护作用,可改善大鼠糖尿病模型的糖脂代谢和血液流变学。

半枝莲总黄酮对糖尿病小鼠模型的影响

目的观察半枝莲对糖尿病小鼠的降血糖效果。方法采用腹腔注射肾上腺素建立小鼠高血糖模型、尾静脉注射链脲佐菌素建立小鼠糖尿病模型。小鼠随机被分为空白组、模型组、二甲双胍组、半枝莲总黄酮高剂量组、半枝莲总黄酮中剂量组、半枝莲总黄酮低剂量组。测定血清中血糖、肝糖原、糖化血清蛋白、胰岛素等指标,HE染色法观察胰腺、肾脏的病理变化。结果在肾上腺素致小鼠高血糖模型的实验中,与模型组相比,二甲双胍组和半枝莲总黄酮各剂量组均可显著降低动物的血糖值,升高肝糖原含量。在链脲佐菌素致小鼠糖尿病模型的实验中,与模型组相比,二甲双胍组和半枝莲总黄酮各剂量组均降低动物的血糖值,升高肝糖原和糖化血清蛋白的含量;促进胰岛素的分泌;可改善胰腺、肾脏的病理变化。结论半枝莲总黄酮有明显的降血糖作用,在发挥降血糖作用的同时还可修复胰岛细胞组织、保护肾脏。

希明妥颗粒剂的定性鉴别与含量测定

目的建立希明妥颗粒剂的定性鉴别及含量测定的方法。方法采用TLC法鉴别处方中的半枝莲、灵芝及紫草;以半枝莲中野黄芩苷为指标成分,采用HPLC法测定含量;采用Agilent Zorbax SB-C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),甲醇-水-乙酸(35∶61∶4)为流动相,流速1.0 m L·min^(-1),检测波长335 nm,柱温30℃。结果三味药材的斑点清晰,Rf值适中;采用50%甲醇为提取溶剂,超声处理30 min,可实现最佳的提取率;0.916~9.16μg野黄芩苷与峰面积的线性关系良好(r=0.9994),平均回收率为95.05%(RSD=1.83%)。结论所用方法简便可行,可用于希明妥颗粒剂的质量控制。