滇黄芩总黄酮酶解超声提取工艺及抗氧化活性研究

该文研究了滇黄芩总黄酮酶解超声提取的工艺条件及总黄酮的抗氧化活性。结果表明,纤维素酶解超声工艺对滇黄芩总黄酮的提取具有协同作用,提高总黄酮提取得率。在超声功率100 W条件下,通过单因素和正交试验,得出酶解超声最佳工艺条件为提取时间4 h、乙醇体积分数55%、加酶量50 U/g(干原料)、液料比30∶1(m L∶g)、提取温度50℃,在此条件下,平均提取得率为24.03%。抗氧化实验研究表明,滇黄芩总黄酮对超氧阴离子和羟自由基的清除率IC_(50)分别为0.14 mg/m L、0.20 mg/m L。

HPLC测定滇黄芩中黄芩苷的含量

目的建立高效液相色谱法测定滇黄芩药材中黄芩苷的含量.方法色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18柱(4.6 mm×150 mm,5 μm),甲醇-0.2%磷酸(45∶55)为流动相,柱温25℃,流速1 ml·min-1,紫外检测波长280 nm.结果线性范围0.2336～1.1680 μg(r=0.9999),平均回收率为99.13%,RSD=1.13%(n=9).结论所用方法简便、准确、重复性好,可作为滇黄芩药材质量控制的有效方法.

滇黄芩器官发生与不同继代次数遗传稳定性的RAPD分析

本研究以滇黄芩不带腋芽茎段为外植体,采用不同配比激素的MS培养基建立了滇黄芩器官发生,植株再生体系。结果表明,茎段在MS+6-BA 2mg/L+NAA 0.5mg/L培养基上培养时,愈伤组织诱导率达到100%;以相同培养基进行分化,并在MS+6-BA 2mg/L+NAA 0.2mg/L培养基上扩繁丛生芽。在1/2MS+IBA 0.2mg/L培养基诱导生根,扦插继代。利用RAPD分析不同继代次数再生植株,所用的39条随机引物中只有1条引物带型发生变化。说明经组织培养获得的再生植株遗传稳定,可多次继代培养,为滇黄芩进一步遗传操作和扩大药材资源奠定基础。

滇黄芩毛状根的诱导及其黄芩苷含量测定

本文利用发根农杆菌A grobacterizum rhizogenes1.2556感染滇黄芩再生苗的茎段和叶片,建立了毛状根培养及其植株再生体系。毛状根可直接从受伤的茎、叶外植体表面产生,在无外源激素的MS固体和液体培养基上自主生长,表现出典型的发根特征。毛状根茎段的诱导率较叶片高,最高可达到14.44%;经rolB基因PCR分析和甘露碱纸电泳检测,证明Ri质粒T-DNA已整合到滇黄芩基因组中并表达;毛状根在附加6-BA2mg/L和NAA0.2mg/L的MS固体培养基上直接诱导不定芽,并在MS培养基上生根,形成再生植株。获得的毛状根系经MS液体培养基培养30d后通过HPLC都能检测到黄芩苷,其中1个转化系黄芩苷含量为2.59%,是药材黄芩的0.20倍,而从3年单位时间黄芩苷生成量计算,毛状根是药材黄芩的7.18倍。本研究建立的毛状根培养体系,将对滇黄芩转基因技术的完善和利用毛状根生产黄芩苷的生物转化提供了实验基础。

民族药滇黄芩的本草考证

通过对滇黄芩的本草学考证 ,结合现代有关滇黄芩化学成分、药理作用及临床等方面的研究 ,表明本草文献中关于滇黄芩的记载与现代研究结果基本一致 ,历代使用滇黄芩的正品药材为唇形科黄芩属滇黄芩(ScutellariaamoenaC .H .Wright)的根。并对其资源状况、栽培方法及近缘种加以阐述。

滇黄芩体胚诱导与植株再生

以附加2％蔗糖的MS为基本培养基，添加不同的植物激素，进行滇黄芩体胚诱导与植株再生。结果表明：叶柄及不带腋茎段在含NAA0．2～1mg／L的培养基中可诱导愈伤组织；茎尖及带腋茎段在6-BA（或KT）0．5mg／L＋IBA0．5mg／L培养基中诱导胚状体和芽丛，在6-BA（或KT）0．05mg／L＋IBA 0．1mg／L培养基中增殖小植株；在1／2MS＋IAA 1mg／L＋3％蔗糖培养基中能产生带2～3级根的壮根；所有培养需附加1％琼脂粉，克服玻璃化现象。

滇黄芩中滇黄芩新素的结构研究

前已报道自四川产滇黄芩Scutellaria,amoena C.H.Wright中分离出五种黄酮成分和从云南产的中得到另八个黄酮类化合物。本文继续报道从云南产滇黄芩中得到的六个化合物和从四川产本种植物中得到一个黄酮化合物的结构鉴定。

滇黄芩中五个新的黄酮类配糖体

从滇黄芩 (Scutellariaamoena)根中分离到 5个新的黄酮类配糖体 ,命名为滇黄芩甙甲-戊 (amoeninsA -E)。经光谱分析 ,化学结构分别证明为 :2′ ,4′ ,6′ -三羟基二氢查耳酮 4′- [O - β -D -半乳吡喃糖基 ( 1→ 2 ) ]-O - β -D -葡萄吡喃糖甙 ,5,7,2′ -三羟基 - 6-甲氧基二氢黄酮 7-O - β -D -葡萄吡喃糖醛酸甙 ,(顺式 ) - 5,7,2′ -三羟基二氢黄酮醇 3-O - β -D -葡萄吡喃糖甙 ,(反式 ) - 5,7,2′ ,6′ -四羟基二氢黄酮醇 3-O - β -D -葡萄吡喃糖甙和 (顺式 ) - 5,7,2′ ,6′ -四羟基二氢黄酮醇 3-O - β -D -葡萄吡喃糖甙。同时 ,还分离到 8个已知化合物 ,分别鉴定为 :二氢黄芩甙 ,白杨素 8-C - β -D -葡萄吡喃糖甙 ,白杨素 6-C - β -D -葡萄吡喃糖基 - 8-C -α -L -阿拉伯吡喃糖甙 ,(trans ) - 5,7,2′ ,6′ -四羟基二氢黄酮醇 ,5,7,2′ ,6′ -四羟基二氢黄酮 ,邻苯二甲酸二丁酯 ,β

滇黄芩快速繁殖研究

滇黄芩幼嫩茎作外植体,用MS+IAA 0.1 mg/L+BA 0.5(0.2)mg/L培养基上可诱导成苗,在MS+BA0.2(1.5)mg/L+IAA 0.1 mg/L+NAA 0.1 mg/L+2,4-D 0.5(1.5)mg/L培养基上可增殖、继代培养。分化苗在1/2 MS+NAA 0.1(0.2)mg/L+IBA 0.1(0.2)mg/L+PP3331.0 mg/L培养基上可迅速生根,生根率达100%。

外源褪黑素对滇黄芩愈伤组织增殖和分化的影响

以滇黄芩(Scutellaria amoena)为试材,研究了不同浓度外源褪黑素(MEL)对滇黄芩愈伤组织增殖和不定芽分化的影响,并与相应浓度的IAA和NAA作了效果比较。结果表明:在附加0.1、1.0、10.0和100.0μM MEL的MS培养基上,愈伤组织增殖率均显著高于对照,其作用类似于IAA,而NAA无明显促进作用;低浓度的MEL(0.1、1.0、10.0μM)有助于愈伤组织的增殖,0.1μM MEL愈伤组织的增长率最高,达到171%。同时培养基中附加低浓度MEL(0.1或1.0μM)有助于不定芽分化,1.0μM的MEL作用下得到最高分化率为30.4%,而高浓度MEL(100.0μM)则对不定芽分化有抑制作用,与IAA作用相似。

滇黄芩再生植株中黄酮类化合物的组织化学定位及黄芩苷的含量测定

应用植物组织化学定位方法,研究了组织培养滇黄芩再生植株中黄酮类化合物的积累分布状态;并且通过HPLC对滇黄芩再生植株中黄芩苷的含量进行测定。结果表明,滇黄芩再生植株黄酮类化合物主要存在于营养器官的表皮和皮层,以及茎、叶腺毛中。同时,测定再生植株中黄芩苷的含量表明,地下部分(根)含量为0.12%;地上部分(茎、叶)含量为0.43%。

滇黄芩的研究进展及作为黄芩药用的探讨

滇黄芩(Scutellaria amoena C. H. Wright)为黄芩属药用植物,具有消炎、抗病毒、抗肿瘤等药用价值。黄芩作为正品在我国大部分地区药用,学术界对其已有较广泛而深入的研究;然而,滇黄芩作为我国西南地区地道药材,尚未受到足够重视。对滇黄芩的研究进展进行综述,并与黄芩(S. baicalensis Georgi)进行比较:二者形态结构的差异可作为对原植物及药材进行鉴别的科学依据,化学成分及含量的差异则显示滇黄芩部分有效成分含量高于黄芩。表明滇黄芩具有极大的研究价值及开发潜力。

滇黄芩中新黄酮成分的结构研究

从唇形科植物滇黄芩Scutellaria amoena C.H.Wright的根中分得八种黄酮类成分(Ⅰ～Ⅷ)。经理化常数测定、光谱分析和化学反应证明,Ⅰ和Ⅱ为新化合物,其结构分别为(2S)-2′,5,6′-三羟基-7-甲氧基双氢黄酮-2′-O-β-D-葡萄吡喃糖甙(Ⅰ)和(2 R,3 R)-2′,3,5,7-四羟基双氢黄酮(Ⅱ);其余六种为已知化合物,分别鉴定为(2S)-5,7,8-三羟基双氢黄酮(Ⅲ)、(2S)-2′,5,6′,7-四羟基双氢黄酮(Ⅳ)、(2 R,3 R)-2′,3,5,6′,7-五羟基双氢黄酮(Ⅴ)、2′,5,6′,7-四羟基黄酮(Ⅵ)、去甲汉黄芩素(Ⅶ)和千层纸甲素(Ⅷ),此六种化合物均为首次从该植物中得到。

滇黄芩总黄酮不同提取方法的比较分析

目的:研究不同提取方法对滇黄芩总黄酮提取率的影响。方法:以滇黄芩总黄酮得率、干膏得率为指标,对煎煮法、乙醇回流提取法、纤维素酶-磷酸缓冲水溶液提取法、乙醇超声提取法、纤维素酶-乙醇超声提取法进行研究分析。结果:考察五种提取方法对考察指标的影响,计算综合评价指标Y值,Y值的大小顺序为纤维素酶-乙醇超声提取法>乙醇超声提取法>煎煮法>乙醇回流提取法>纤维素酶-磷酸缓冲水溶液提取法。结论:滇黄芩总黄酮的提取方法以纤维素酶-乙醇超声提取法为佳。

滇黄芩中5种重金属残留量的测定

目的建立滇黄芩中5种重金属(铅、镉、砷、汞、铜)的测定方法。方法样品经微波消解,采用石墨炉原子吸收法测定铅、镉、铜;采用原子荧光法测定砷、汞。结果 5种重金属的回收率为98.23%～105.98%。结论该方法简便、准确、可较好的用于滇黄芩中重金属的测定。

滇黄芩幼苗对增强UV-B辐射与干旱胁迫的生理响应

以滇黄芩（Scutellaria amoena C.H.Wright）幼苗为材料,采用盆栽试验,研究了模拟紫外线B波段（UV-B）增强辐射（280-320 nm）和干旱胁迫对滇黄芩幼苗叶片中的丙二醛（MDA）含量、抗氧化酶（SOD、CAT、APX、GR）活性、游离脯氨酸和可溶性糖及类黄酮含量的影响;应用隶属函数值法,对单一胁迫与复合胁迫下的滇黄芩幼苗抗逆性进行综合评价。结果表明,增强UV-B辐射后植株体内的类黄酮含量、抗氧化酶活性、可溶性糖与游离脯氨酸含量均显著增加,MDA含量呈先升后降的变化趋势;干旱胁迫下植株体内SOD和CAT活性始终低于对照,MDA含量显著增加,SOD、APX、GR活性以及游离脯氨酸、可溶性糖、类黄酮含量呈先升后降的变化趋势。增强UV-B辐射与干旱复合胁迫对滇黄芩幼苗的影响,一方面表现为增强UV-B辐射与干旱协同促进了游离脯氨酸和可溶性糖含量的提高（处理20-30 d）;另一方面表现为增强UV-B辐射削弱了干旱对滇黄芩幼苗造成的伤害,植株体内的抗氧化酶活性逐渐恢复或超过正常水平,类黄酮含量显著升高,使胁迫后期（30-40 d）的MDA含量下降。经隶属函数值法分析,得出滇黄芩幼苗的抗逆能力在4个处理里由高到低的顺序依次为增强UV-B辐射、增强UV-B辐射与干旱复合胁迫、对照、干旱胁迫。

滇黄芩根化学成分的研究

目的研究滇黄芩Scutellaria amoena C.H.Wright根的化学成分。方法滇黄芩根90%乙醇提取物的分析采用硅胶、Sephadex LH-20、重结晶进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构。结果从中得到20个化合物,分别鉴定为黄芩素(1)、黄芩苷(2)、千层纸素A(3)、千层纸素A-7-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(4)、千层纸素A-7-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷甲酯(5)、千层纸素A-7-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷乙酯(6)、汉黄芩素(7)、汉黄芩素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷甲酯(8)、去甲汉黄芩素(9)、去甲汉黄芩素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷甲酯(10)、白杨素(11)、白杨素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(12)、白杨素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷甲酯(13)、5,7,2′-三羟基-6-甲氧基黄酮(14)、韧黄芩素Ⅱ-7-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(15)、韧黄芩素Ⅱ-2′-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(16)、高车前素(17)、亚油酸(18)、韧黄芩素Ⅱ-7-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷甲酯(19)、韧黄芩素Ⅱ-2′-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(20)。结论化合物5、8、10、13、15~18为首次从该植物中分离得到。

滇黄芩茎叶乙醇提取物及其不同溶剂萃取部位的抗氧化和降脂活性研究

目的:研究滇黄芩茎叶乙醇提取物及其不同溶剂萃取部位的抗氧化活性和降脂活性。方法:取滇黄芩茎叶用95%乙醇回流提取,得乙醇提取物;取上述提取物,依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取,回收溶剂得到不同溶剂萃取部位。以维生素C(Vc)为阳性对照,采用羟基自由基、超氧阴离子自由基、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除法检测滇黄芩茎叶乙醇提取物、石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物的体外抗氧化活性并计算半数抑制浓度(IC50)。以脂肪乳建立脂肪变性L02肝细胞模型,以非诺贝特(20μg/m L)为阳性对照,考察高、低质量浓度(100、50μg/mL)滇黄芩茎叶乙醇提取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物对细胞中TC、TG含量的影响。结果:对羟基自由基的清除能力强弱排序为滇黄芩茎叶正丁醇萃取物>乙酸乙酯萃取物>Vc>乙醇提取物>石油醚萃取物,IC50分别为0.15、0.17、0.35、0.75、1.17 mg/mL;对超氧阴离子自由基的清除能力强弱排序为Vc>正丁醇萃取物>乙酸乙酯萃取物>乙醇提取物>石油醚萃取物,IC50分别为0.034、0.55、0.75、3.32、3.73 mg/mL;对DPPH自由基的清除能力强弱排序为Vc>正丁醇萃取物>乙酸乙酯萃取物>乙醇提取物>石油醚萃取物,IC50分别为0.003 2、0.028、0.033、0.048、0.057 mg/mL。滇黄芩茎叶乙醇提取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物对脂肪变性L02肝细胞中TC、TG含量均有显著的降低作用(P<0.01),其降脂能力强弱排序为正丁醇萃取物(低浓度)≈非诺贝特>乙酸乙酯萃取物(高浓度)>乙醇提取物(高浓度)>正丁醇萃取物(高浓度)>乙酸乙酯萃取物(低浓度)>乙醇提取物(低浓度)。结论:滇黄芩茎叶乙醇提取物、石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物均有一定的抗氧化活性和降脂活性(除石油醚萃取物外),其中正丁醇和乙酸乙酯萃取物的抗氧化活性和降脂活性较高。

滇黄芩总黄酮不同极性萃取部位对非酒精性脂肪肝模型大鼠的改善作用研究

目的研究滇黄芩总黄酮不同极性萃取部位对非酒精性脂肪肝(NAFLD)模型大鼠的改善作用。方法采用乙醇回流提取法制备滇黄芩总黄酮(SAF);将SAF用水分散后依次用乙酸乙酯、正丁醇进行萃取,分别得到滇黄芩总黄酮乙酸乙酯、正丁醇萃取部位(分别记为SAFA、SAFB)。将36只大鼠分为正常组(n=6)和造模组(n=30)。造模组大鼠通过饲以高脂饲料复制NAFLD模型。成模后,将造模组大鼠随机分为模型组(生理盐水)、非诺贝特组(阳性对照,20 mg/kg)、SAF组(300 mg/kg)、SAFA组(300 mg/kg)和SAFB组(300 mg/kg),每日灌胃1次,连续6周。末次灌胃后,计算大鼠的肝脏指数,检测大鼠血清中总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平和肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,并观察大鼠肝组织病理形态学变化。结果与正常组比较,模型组大鼠肝脏指数和血清/肝组织中TC、TG、AST、ALT、LDL-C、MDA、IL-1β、IL-6、TNF-α水平均显著升高(P<0.05),而HDL-C、SOD、GSH-Px水平均显著降低(P<0.05)。与模型组比较,除SAFA组大鼠血清中HDL-C、ALT水平差异无统计学意义外(P>0.05),滇黄芩总黄酮各极性萃取部位给药组大鼠血清/肝组织中上述指标均显著改善(P<0.05),肝组织炎症细胞浸润、脂肪空泡等现象明显改善。与SAF组和SAFA组比较,SAFB组大鼠血清/肝组织中TC、TG、AST、MDA、IL-6、TNF-α水平均显著降低(P<0.05),SOD水平显著升高(P<0.05),肝组织病理形态学变化改善更为明显。结论滇黄芩总黄酮各极性萃取部位均可通过调控氧化应激、抑制炎症因子分泌而发挥其对NAFLD的改善作用,且以正丁醇萃取部位的效果更好。

滇黄芩醇提物及其不同溶剂萃取部位对CCl4致小鼠肝损伤的保护作用研究

目的:研究滇黄芩醇提物及不同溶剂萃取部位对四氯化碳(CCl4)致小鼠肝损伤的保护作用。方法:用95%乙醇提取滇黄芩得到醇提物浸膏;再经乙酸乙酯、正丁醇依次萃取,得不同溶剂萃取部位。从48只小鼠中随机选取8只为正常组,其余40只为造模组。正常组小鼠腹腔注射给予等体积橄榄油,每3日1次,连续6周;造模组小鼠腹腔注射给予30%CCl4橄榄油溶液,首次剂量为5 mL/kg,以后每次3 m L/kg,每3日1次,连续6周,造成肝损伤模型。将造模成功后的小鼠随机分为模型组(生理盐水)、水飞蓟宾组(阳性对照,20 mg/kg)、滇黄芩醇提物组(100 mg/kg)、滇黄芩乙酸乙酯组(100 mg/kg)、滇黄芩正丁醇组(100 mg/kg),每组8只。每日灌胃1次,连续给药6周。观察各组小鼠实验期间的一般状态;末次给药1 h后,采用酶标仪检测其血清中总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)的含量;经苏木精-伊红染色后,观察其肝组织病理形态学变化并进行Ishak评分。结果:正常组小鼠活动正常,毛发浓密有光泽,体质量正常增长,肝组织未见明显病理形态学改变;模型组小鼠精神萎糜,毛发蓬乱无光泽,体质量(给药前及给药第1、2周)均较正常组显著减轻(P<0.05或P<0.01);与正常组比较,模型组小鼠血清中TC、TG、ALT和AST含量均显著升高(P<0.01或P<0.05);肝小叶结构受到破坏严重,炎症细胞浸润严重,肝索组织排列紊乱,Ishak评分显著升高(P<0.01)。与模型组比较,各给药组小鼠上述症状及肝组织病理损伤均有不同程度的改善;水飞蓟宾组、滇黄芩乙酸乙酯组小鼠血清中TC、ALT、AST含量,各给药组小鼠血清中TG含量以及水飞蓟宾组、滇黄芩醇提物组、滇黄芩乙酸乙酯组小鼠肝组织Ishak评分均显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论:滇黄芩醇提物及其不同溶剂萃取部位对CCl4致肝损伤模型小鼠均有不同程度的肝保护作用,乙酸乙酯部位可能是其护肝活性部位。