半枝莲抑制肿瘤血管生成的作用及其机制研究

背景与目的:以血管再生作为靶点的诸多化学合成药物在有效抑制血管生成的同时具有不可抵抗的副作用,近年来国内外都在致力于从天然药物中开发肿瘤血管生成阻断剂。作为传统抗癌有效药物半枝莲,其阻断血管生成的作用研究少见报道。本实验拟探讨其对肿瘤血管生成的抑制作用及其可能的机制。方法:采用Matrigel栓、原代人脐静脉内皮细胞(humanumbilicalvascularendotheialcell,HUVEC)建立体内外血管生成模型,观察半枝莲对血管生成的影响;通过Transwell小室趋化实验检测半枝莲对宫颈癌细胞HeLa培养上清诱导内皮细胞迁移能力的影响;采用酶联免疫吸附法(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)检测半枝莲对HeLa细胞血管内皮细胞生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)蛋白水平的影响。结果:半枝莲能明显抑制Matrigel栓内微血管的形成;体外小管形成实验发现,20%、40%半枝莲含药血清组小管形成数为(5.6±1.1)、(1.0±0.7),与同浓度空白血清组(9.8±1.3和13.4±1.1)相比有显著性差异(P值分别为0.001、0.000)。经20%、40%半枝莲含药血清处理后内皮细胞迁移数分别为(19.75±2.63)、(14.00±2.58),明显少于同浓度空白血清组(24.25±2.06和26.50±4.65)(P值分别为0.038、0.006)。40%含药血清作用24、48h后HeLa细胞VEGF表达量分别为(138.67±9.50)、(93.84±41.11),与空白血清组(195.82±2.43和193.68±18.37)相比具有显著性差异(P值分别为0.006、0.036)。结论:半枝莲能有效抑制肿瘤血管生成,其机制可能与阻断内皮细胞迁移、下调VEGF蛋白表达有关。

半枝莲提取物诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及其对凋亡相关蛋白表达的影响

目的探讨半枝莲提取物(Scutellaria barbata D.Don extract,SBE)对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-2,Survivin和Caspase-3表达的影响。方法体外培养SMMC-7721细胞,以2.5,5和10 mg.L-1SBE处理48 h,并以2.5 mg.L-1顺铂(DDP)作为阳性对照。用MTT法检测细胞抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,二步法免疫组化检测Bcl-2,Survivin和Caspase-3蛋白表达。结果与正常对照组相比,SBE各浓度组细胞抑制率显著升高(P(0.001),细胞凋亡率明显上升(P(0.01),Caspase-3蛋白表达显著上升(P<0.01或P<0.05),Bcl-2和Survivin蛋白表达明显下降(P<0.01或P<0.05)。结论SBE具有诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡的作用,其分子机制可能与上调Caspase-3蛋白表达以及下调Bcl-2和Survivin蛋白表达有关。

半枝莲对宫颈癌细胞钙信号系统的影响

为探讨半枝莲对Hela细胞胞内游离钙浓度的影响及其抗癌作用机理。利用荧光染料Fura 2在细胞内能与游离钙结合 ,在一定波长光的激发下可发出荧光的特性 ,根据荧光的强度来检测游离钙的变化 ,结果显示半枝莲对Hela细胞增殖的抑制作用不明显 ,但可通过促进细胞内储藏钙的释放和胞外钙离子的内流 。

半枝莲化学成分研究

研究了半枝莲Scutellaria barbata D.Don的化学成分。利用硅胶色谱、Sephadex LH-20凝胶色谱、HPLC等手段对化学成分进行分离纯化;通过理化性质、波谱分析方法结合文献对照,鉴定了化合物的结构。从半枝莲甲醇提取物中,共分离鉴定了10个单体化合物:齐墩果酸(1)、熊果酸(2)、反式-4-甲基肉桂酸(3)、金色酰胺醇酯(4)、对羟基苯甲醛(5)、对羟基苯乙酮(6)、5-羟基-7,3′,4′,5′-四甲氧基黄酮(7)、芹菜素(8)、5,7,4′-三羟基-8-甲氧基黄酮(9)、5,7,4′-三羟基-6-甲氧基黄酮(10)。化合物1、3、7为首次从该植物中分离得到。

中药半枝莲黄酮类成分的分离与结构鉴定

目的对中药半枝莲(Scutellaria barbata D.Don)全草的化学成分进行研究。方法应用大孔树脂、正相硅胶、反相ODS、Sephadex LH-20以及制备型高效液相等色谱法对中药半枝莲的化学成分进行了分离;并通过理化性质和光谱数据对化合物的结构进行了鉴定。结果分离鉴定了7个黄酮类化合物,分别为芹菜素(apigenin1,)、木犀草素(luteolin,2)、5,7,4'-三羟基-8-甲氧基黄酮(5,7,4'-trihydroxy-8-methoxyflvone,3)、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(apigenin-7-O-β-D-glucuronide,4)、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯(apigenin-7-O-β-D-glucuronide methyl ester,5)、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷(apigenin-5-O-β-D-glucopyranoside,6)、山奈酚-3-O-β-D-芦丁糖苷(kaempferol-3-O-β-D-rutino-side,7)。结论化合物4-7为半枝莲植物中首次分离得到。

半枝莲醇提物抗肿瘤活性的研究

目的 研究中药半枝莲醇提物的抗肿瘤活性。方法 采用小鼠腋下接种肿瘤细胞法测定了半枝莲醇提物的抗肿瘤活性 ;采用MTT法测定了半枝莲醇提物对小鼠脾细胞的增殖活性。结果 半枝莲醇提物对移植性肿瘤 (肉瘤S180 和肝癌H2 2 )具有显著的抑制作用 ,而对小鼠脾细胞的增殖具有促进作用 ,并有较好的剂量依赖关系。

半枝莲的化学成分研究(Ⅱ)

目的研究半枝莲的化学成分。方法利用多种分离方法,从半枝莲全草的乙醇提取液中分离得到7个化合物,利用理化性质和波谱学分析,鉴定它们的化学结构。结果分离鉴定了7个已知化合物,分别是对羟基苯甲醛(1)、反式-1-(4′-羟基苯基)-丁-1-烯-3-酮(2)、对羟基苯甲酸乙酯(3)、对羟基苯乙酮(4)、松脂素(5)、杜仲树脂酚(6)、豆甾醇(7)。结论化合物5、6为首次从该属植物中分得的已知化合物。

半枝莲的化学成分

目的对黄芩属植物半枝莲(Scutellaria barbataD.Don)的抗肿瘤活性部位(氯仿萃取物和正丁醇萃取物)的化学成分进行分离、鉴定。方法用体积分数为70%的乙醇加热回流提取干燥药材,经石油醚、氯仿、正丁醇分步萃取,利用反复硅胶柱色谱、聚酰胺柱色谱、Sephadex LH 20凝胶柱色谱进行分离、纯化,根据理化性质和核磁共振氢谱、碳谱数据对所得化合物进行结构鉴定。结果得到8个化合物,分别鉴定为对羟基苯甲醛(1)、3,4二羟基苯甲酸(2)、对羟基苯乙酮(3)、5,7,4′三羟基8甲氧基黄酮(4)、5,7,4′三羟基6甲氧基黄酮(5)、5,7,4′三羟基黄酮(6)、5,4′二羟基6,7,3′,5′四甲氧基黄酮(7)、5羟基4′甲氧基黄酮7OαL鼠李糖基(1→6)βD吡喃葡萄糖苷(8)。结论化合物7、8为半枝莲中首次分离得到。

半枝莲中总黄酮和多糖的微波提取与含量测定

目的:从半枝莲中提取总黄酮和多糖,并测定其含量。方法:运用微波技术提取半枝莲总黄酮和多糖,用比色法测定总黄酮和多糖含量。结果:测得半枝莲中总黄酮含量为3.74%,平均回收率为98.91%,相对标准偏差(RSD)为2.01%(n=5);多糖含量为5.79%,平均回收率为101.3%,相对标准偏差(RSD)为3.0%(n=5)。结论:运用微波技术从半枝莲中联合提取总黄酮和多糖,反应速度加快,提高了提取效率。

半枝莲多糖对小鼠S_(180)肉瘤抑制作用的研究

探讨半枝莲多糖对体内S180肉瘤肿瘤抑制作用及相关机制.采用动物移植性肿瘤实验观察半枝莲多糖对小鼠体内肿瘤细胞生长的影响,ELISA法检测对荷瘤小鼠外周血血清中白细胞介素-2和干扰素-α质量浓度的影响.结果显示,半枝莲多糖对S180肉瘤生长的抑制率以中剂量为佳;各剂量组均对脾脏指数有显著性差异,能够提高S180荷瘤小鼠外周血血清中白细胞介素-2及干扰素-α的质量浓度,但中剂量最为显著,表明半枝莲多糖在小鼠体内具有抑制S180肉瘤的作用.

半枝莲的化学成分

目的:对黄芩属植物半枝莲Scutellaria barbata D.Don全草的抗肿瘤活性部位(三氯甲烷萃取物)的化学成分进行分离、鉴定。方法:采用反复硅胶、LH-20葡聚糖凝胶等柱色谱方法进行分离纯化,并通过理化常数测定与谱学分析鉴定其化学结构。结果:得到7个化合物,分别鉴定为木犀草素(1),柚皮素(2)、半枝莲酸(3),2,4-二羟基苯甲酸(4),香豆酸乙酯(5),β-谷甾醇(6),胡萝卜苷(7)。结论:化合物4、5为首次从半枝莲中分离得到。

半枝莲总黄酮提取物对乳腺癌细胞及甲状旁腺相关蛋白的抑制

目的 ：探讨半枝莲总黄酮类提取物对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响。方法 ：体外培养乳腺癌MDA-MB-231细胞株,提取并鉴定半枝莲总黄酮提取物,配制不同浓度提取物作用于细胞,分别以MTT比色法、细胞划痕实验、transwell实验检测其对MDA-MB-231细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响,用实时定量PCR检测甲状旁腺相关蛋白（PTHr P）m RNA的表达变化。结果：与对照组相比,半枝莲总黄酮类提取物40-200μg/m L共5组作用于MDA-MB-231细胞24 h时,细胞增殖抑制率分别为（11.7±5.7）%、（25.1±4.1）%、（40.1±4.0）%、（44.7±4.0）%、（45.1±2.9）%;细胞迁移抑制率分别为（8.9±1.8）%、（20.4±2.7）%、（21.8±2.4）%、（29.3±4.0）%、（51.7±6.3）%;细胞侵袭抑制率分别为（31.4±0.3）%、（36.5±0.7）%、（57.8±0.8）%、（59.8±1.1）%、（80.7±1.4）%;PTHr P m RNA相对表达水平分别为81.8%、61.8%、46.5%、35.1%、22.2%。结论：半枝莲总黄酮类提取物可能通过下调PTHr P m RNA的表达,抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖、迁移及侵袭能力。

不同采收期半枝莲中黄酮含量比较

目的以黄酮类含量为指标,确定半枝莲药材的最佳采收期。方法以野黄芩苷为对照品,采用紫外-可见分光光度法测定不同采收期半枝莲中总黄酮含量,采用高效液相色谱(HPLC)法测定其中野黄芩苷及大波斯菊的含量。结果不同采收期的半枝莲中总黄酮和野黄芩苷的含量均达到了《中华人民共和国药典》的规定标准,在开花期半枝莲的总黄酮和野黄芩苷的含量最高,其中总黄酮的平均含量(45.74±0.95)mg·g-1,野黄芩苷的平均含量(5.58±0.16)mg·g-1,大波斯菊苷的平均含量(17.39±0.42)mg·g-1。结论半枝莲药材的最佳采收期应为枝繁叶茂的开花期。

纯化前后半枝莲多糖的药效学研究

采用Sevage法纯化半枝莲(Scutellaria barbata D.Don)多糖,并通过苯酚-硫酸法测定多糖含量;进行急性毒性试验考察半枝莲多糖对小鼠的毒性;通过体内移植肿瘤试验测定不同剂量纯化前后半枝莲多糖对小鼠S180瘤的抑制作用。纯化后半枝莲多糖的纯度为49.99%;急性毒性试验表明800 mg/kg及以下剂量半枝莲多糖对小鼠无毒。纯化后半枝莲多糖的抑瘤率低于半枝莲粗多糖,100 mg/kg半枝莲粗多糖的抑瘤率为46.85%。

半枝莲多糖对小鼠S_(180)肉瘤及免疫功能的影响

目的研究半枝莲多糖体内抗肿瘤作用和免疫增强作用。方法采用动物移植性肿瘤实验观察半枝莲多糖对小鼠体内肿瘤细胞生长和免疫器官—胸腺、脾的影响,ELISA法检测对荷瘤小鼠外周血血清中白细胞介素-2和干扰素-γ含量的影响,激光共聚焦检测对荷瘤小鼠脾淋巴细胞内钙离子浓度的影响。结果半枝莲多糖对S180肉瘤生长的抑制率以中剂量为佳;各剂量组均对脾脏指数有显著性差异,但大剂量注射(200mg.kg-1),对胸腺有抑制作用;能够提高S180荷瘤小鼠外周血血清中白细胞介素-2及干扰素-γ的含量,并以中剂量最为显著,且使脾淋巴细胞中钙离子浓度升高。结论半枝莲多糖在小鼠体内具有抑制S180肉瘤的作用,并能增进荷瘤小鼠免疫力。

半枝莲抗肝癌H22小鼠淋巴道转移的实验研究

目的:观察半枝莲对小鼠肝癌淋巴道转移的影响。方法:在小鼠右下肢爪垫内侧皮下注射接种腹水型肝癌H22瘤株,复制淋巴道转移模型,观察小鼠实体瘤抑瘤率、肺部转移率、淋巴结转移情况等得指标变化。结果:半枝莲作用组的小鼠,肺部转移结节数较造模组明显减少,抑瘤率有较明显的增加,且淋巴结转移数有明显的减少。结论:半枝莲对H22肝癌淋巴道转移有一定的抑制作用。

半枝莲多糖体内抗肿瘤及其免疫调节作用的实验研究

目的:研究半枝莲多糖的体内抗肿瘤作用和免疫增强作用。方法:通过动物移植性肿瘤实验观察半枝莲多糖对小鼠体内肿瘤细胞生长和免疫器官胸腺、脾的影响;通过ANAE法观察半支莲多糖对T细胞阳性率的影响。结果:半枝莲多糖对S180肉瘤生长的抑制率以中剂量为佳;各剂量组对脾脏指数的影响均有显著性差异,但大剂量注射(200mg/kg)对胸腺有抑制作用;能够提高S180荷瘤小鼠T淋巴细胞的百分数。结论:半枝莲多糖有抗肿瘤作用和免疫增强作用。

正交试验优选半枝莲超临界二氧化碳萃取条件及GC/MS分析

本文采用正交设计法,对半枝莲挥发油超临界CO2流体提取工艺参数进行优化,并对萃取产物的化学成分进行GC/MS分析。正交实验设计萃取压力（A）、萃取温度（B）、药材粒度（C）作为3个因素,每个因素选3个水平,以挥发油的得率来确定最优化提取条件。用GC-MS分析技术对半枝莲超临界萃取产物进行分离分析,采用MS谱库检索结合保留指数的方法对半枝莲超临界萃取成分进行结构鉴定,应用色谱峰面积归一化法确定萃取产物中各成分的峰面积百分含量。结果表明最优萃取条件：萃取压力30Mpa,萃取温度50℃,药材粒度40~60目。萃取产物GC-MS结果显示,半枝莲中除含高级脂肪酸及其酯类外,还含有大量的甾族化合物。本研究优化的萃取工艺稳定、可行;利用GC/MS分析技术,MS谱库检索结合保留指数鉴定结构的方法准确、快速。

半枝莲化学成分及提取物抗肿瘤作用的研究现状

为了进一步开发半枝莲资源,提高半枝莲的医用价值和经济价值,对半枝莲的化学成分及提取物在抗肿瘤方面的药理作用做一综述。

半枝莲与白花蛇舌草及其药对石油醚部位成分分析及其抗子宫内膜癌细胞活性研究

目的:对半枝莲、白花蛇舌草及其药对石油醚部位成分进行分析,并研究体外抗子宫内膜癌细胞活性。方法:采用GC-MS结合保留指数(Kovats retention index,KI)对主要成分进行分析和鉴定;甲基偶氮唑盐类(MTT)法研究三者的抗子宫内膜癌细胞活性。结果:通过GC-MS分析鉴定出半枝莲、白花蛇舌草及药对石油醚部位中同时含有不饱和脂肪酸、酯类、甾醇类等成分,白花蛇舌草和药对相区别于半枝莲的石油醚部位又含有较多蒽醌类化合物。半枝莲、白花蛇舌草及其药对石油醚部位抗子宫内膜癌细胞HEC-1A的IC50值分别为275.204μg/m L,105.826μg/m L,148.645μg/m L,抗子宫内膜癌细胞Ishikawa的IC50值分别为189.114μg/m L,77.974μg/m L,137.999μg/m L。结论:半枝莲与白花蛇舌草及其药对石油醚部位对子宫内膜癌细胞HEC-1A和Ishikawa均有抑制作用,其中白花蛇舌草的抗子宫内膜癌细胞活性最强,推测可能与含量较高的蒽醌类化合物有关。