UPLC法同时测定紫龙金片中野黄芩苷等8种成分的含量

目的:建立同时测定紫龙金片中新绿原酸、绿原酸、咖啡酸、隐绿原酸、阿魏酸、野黄芩苷、丹酚酸B、芹菜素含量的超高效液相色谱法。方法:采用Waters Acquity UPLC HSS T3(2.1 mm×100 mm, 1.8μm)色谱柱,以乙腈-0.1%磷酸进行梯度洗脱,进样量1μL,柱温为30℃,流速为0.3 mL·min^(-1),检测波长为323 nm。结果:8种成分在各自质量浓度范围内线性关系良好(r>0.999 0),平均加样回收率94.1%~101.6%,RSD%0.70%~1.93%。测定4批样品,不同批次样品除新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸含量略有差异,其余成分含量基本一致。结论:本法简便、高效、准确,可综合全面地评价本品的内在质量,更好地为紫龙金片的质量评价提供参考。

HPLC法同时测定丹灯通脑胶囊中野黄芩苷和丹酚酸B的含量

目的 建立丹灯通脑胶囊中野黄芩苷和丹酚酸B含量的测定方法。方法 采用HPLC法,色谱柱为Diamonsil C18（200 mm×4.6 mm,5μm）,流动相为体积分数为2%的冰醋酸水溶液（溶液A）和乙腈-甲醇（体积比为1：1,溶液B）,进行梯度洗脱,在0～15 min,溶液B体积分数由30%线性改变至36%;15～25 min,维持溶液B体积分数为36%不变;25～30 min,溶液B体积分数由36%线性改变至30%,流速为1.0 mL.min-1,检测波长为280 nm,柱温为35℃。结果 野黄芩苷和丹酚酸B分别在5.7～57.0 mg·L^-1和22.2～222.0 mg·L^-1内与色谱峰面积线性关系良好,相关系数r分别为0.9998和0.9999。野黄芩苷和丹酚酸B的平均回收率分别为99.7%和100.3%,RSD（n=9）分别为0.9%和0.5%。结论 HPLC法简便、专属、重复性好,可用于丹灯通脑胶囊中野黄芩苷和丹酚酸B的含量测定。

高血脂大鼠脑缺血再灌注损伤后Bcl-2和Bax的表达变化及灯盏乙素的影响

目的观察高血脂大鼠缺血侧大脑皮质额叶内B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达变化,探讨灯盏乙素对高血脂大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法大鼠建立高血脂模型后,线栓法阻塞大脑中动脉建立脑缺血再灌注损伤模型,HE染色观察大脑皮质额叶的病理变化,免疫组织化学和免疫印迹法观察Bcl-2、Bax蛋白的表达变化,同时结合神经行为学评分和2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色观察大鼠的神经行为及脑梗死灶体积的变化。结果与假手术组相比,生理盐水组大鼠脑组织损伤加重,Bcl-2的表达明显减少,Bax的表达明显增高,同时大鼠的神经行为学评分和脑组织梗死灶体积明显增加(P<0. 05)。与生理盐水组相比,灯盏乙素治疗组脑组织损伤减轻,Bcl-2的表达明显增多,Bax的表达明显减少,同时大鼠的神经行为学评分和脑组织梗死灶体积明显降低(P<0. 05)。结论灯盏乙素对高血脂大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用可能是通过促进Bcl-2的表达,抑制Bax的表达实现的。

HPLC法测定丹灯通脑胶囊中阿魏酸、丹酚酸B、葛根素、野黄芩苷

目的建立HPLC同时测定丹灯通脑胶囊（丹参、灯盏细辛、川芎、葛根）中阿魏酸、丹酚酸B、葛根素与野黄芩苷的方法。方法丹灯通脑胶囊甲醇提取液的测定,采用岛津LC-2010AHT高效液相色谱仪,色谱柱为Thermo Hypersil GOLD C18（4.6 mm×250 mm,5μm）,梯度洗脱、双波长检测（0-10 min,250 nm;10-35 min,336 nm）的方法。结果阿魏酸、丹酚酸B、葛根素、野黄芩苷的线性范围分别为3.045-60.90μg/m L（r=0.999 6）、82.78-1 655.5μg/m L（r=0.999 7）、28.64-572.80μg/m L（r=0.999 8）和31.725-634.50μg/m L（r=0.999 7）;平均回收率（n=9）分别为100.2%（RSD为0.5%）、100.0%（RSD为0.7%）、99.8%（RSD为0.8%）和100.0%（RSD为0.7%）。结论本方法是对现行的两个质量标准（只对其单一组分进行测定）的改进。

云南栽培灯盏花指纹图谱建立及4个成分测定

目的采用HPLC法建立云南(大理、红河、曲靖)栽培灯盏花Erigeron breviscapus(Vant.)Hand-Mazz.的指纹图谱,并测定绿原酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、飞蓬酯乙、灯盏乙素的含有量。方法分析采用Agilent ZORBAX SBC18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为0.3%磷酸(A)-甲醇(B),梯度洗脱;体积流量1.0 m L/min;检测波长335 nm;柱温20℃。结果 HPLC指纹图谱中有17个共有峰,相似度大于0.971。红河栽培灯盏花中灯盏乙素和4个成分的总含有量明显高于大理,但3,5-二咖啡酰奎宁酸显著低于大理,两地绿原酸和飞蓬酯乙相近。结论红河栽培灯盏花质量更稳定,更有利于质量控制。

高效液相色谱法测定灯盏细辛提取物中两种有效成分的含量

目的：探讨灯盏细辛提取物中野黄芩苷、3,4-二-O-咖啡酰奎宁酸2种有效成分含量的高效液相色谱测定方法。方法：色谱柱选择Dikma Kromasil C18（250mm×4.6mm,5.0μm）,流动相选择乙腈：0.2%磷酸溶液=30∶70,检测波长为332nm,柱温为35℃。结果：野黄芩苷的线性回归方程为Y=1.554×103-0.201×102（r=0.9997）;3,4-二-O-咖啡酰奎宁酸的线性回归方程为Y=1.724×103-0.081×102（r=0.9996）;野黄芩苷在0.0341~1.3121μg范围内,3,4-二-O-咖啡酰奎宁酸在0.0592~2.3426μg范围内呈良好的线性关系。结论：采用高效液相色谱法同时测定灯盏细辛提取物中2种有效成分的含量,操作简单,精密度高,重现性好,可以作为灯盏细辛提取物中这2种有效成分的定量分析方法。

参七消痞颗粒中野黄芩苷和丹酚酸B含量测定方法研究

目的 建立参七消痞颗粒中野黄芩苷和丹酚酸B的含量测定方法.方法 采用HPLC法,色谱柱为Waters SunFireTM C18（4.6×150 mm,5μm）,流动相为甲醇-0.1％磷酸水溶液梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,柱温为30℃,野黄芩苷和丹酚酸B检测波长分别为335 nm、280 nm.结果 野黄芩苷和丹酚酸B分别在0.064 16 ～0.385 0μg和0.743 ～4.455 μg质量范围内与色谱峰面积呈良好线性关系,相关系数分别为0.999 5和0.999 4.野黄芩苷和丹酚酸B的平均加样回收率分别为101.9％和96.3％,RSD分别为1.17％和0.33％.结论 本方法简单可靠,结果准确,可用于参七消痞颗粒的质量控制.

灯盏花乙素调节AMPK/SIRT1/PGC-1ɑ信号通路对溃疡性结肠炎大鼠肠道菌群的影响

目的 探究灯盏花乙素(SCU)调节腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)/沉默调节蛋白1(SIRT1)/过氧化物酶体增殖活化受体γ辅助活化因子1α(PGC1α)信号通路对溃疡性结肠炎(UC)大鼠肠道菌群的影响。方法 随机选择6只SD大鼠作为空白对照组(NC组),另取24只腹腔注射3.5%葡聚糖硫酸钠(DSS)构建UC大鼠模型。将UC大鼠随机平分为UC组、SCU组(100 mg/kg)、Compound C组(AMPK/SIRT1/PGC-1ɑ信号通路抑制剂Compound C 250μg/kg体重)以及SCU+Compound C组(SCU100 mg/kg体重+250μg/kg体重Compound C),NC组、UC组给予等量生理盐水。每组均6只大鼠。ELISA法检测血清炎性因子水平;HE染色观察结肠组织病理学变化;对粪便进行短链脂肪酸(SCFAs)测序以及16s测序,并进行序列分析;Western blot检测AMPK/SIRT1/PGC-1ɑ信号通路蛋白表达水平。结果 NC组大鼠结肠绒毛形态完整,结肠黏膜上皮结构清晰可见,肠腺内多个细胞整齐排列,无任何病变。与NC组相比,UC组大鼠结肠组织隐窝和杯状细胞消失,炎症细胞浸润增加,乙酸盐、丙酸盐、丁酸盐含量,Shannon、Simpson、Chao1指数,乳酸杆菌属相对丰度及AMPK、SIRT1、PGC1α水平均显著降低(均P<0.05);IL-1β、TNF-α、IL-6水平,大肠埃希菌-志贺菌属及拟杆菌属相对丰度显著升高(均P<0.05)。与UC组相比,SCU组粘膜结构以及炎性细胞浸润现象得到改善,粘膜结构基本完整,杯状细胞数量显著增多;乙酸盐、丙酸盐、丁酸盐含量,Shannon、Simpson、Chao1指数,乳酸杆菌属相对丰度及AMPK、SIRT1、PGC1α水平均显著增加(均P<0.05);IL-1β、TNF-α、IL-6水平,大肠埃希菌-志贺菌属及拟杆菌属相对丰度均显著减少(均P<0.05)。Compound C组上述指标变化趋势与SCU组比较均相反。结论 SCU可通过激活AMPK/SIRT1/PGC-1ɑ信号轴升高有益菌的丰度,降低致病菌,改善UC大鼠肠道菌群失衡,减轻UC的炎症状态,发挥对UC的治疗作用。

液质联用分析芦丁、野黄芩苷和半枝莲碱B在小鼠灌胃给药后体内的组织分布

目的:建立UPLC-MS同时测定小鼠组织中芦丁、野黄芩苷和半枝莲碱B的分析方法,并对该3种成分在小鼠体内的组织分布进行研究。方法:以2-氰基-3,12-二氧代齐墩果烷^(-1),9(11)-二烯-28-酸甲酯(CDDO-Me)为内标,通过甲醇沉淀组织样品蛋白,使用LC-MS技术进行定量分析,采用ACQUITY UPLC BEH-C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm),以0.1%甲酸水溶液-乙腈为流动相,梯度洗脱,正、负离子检测模式,检测离子质荷比(m/z)为芦丁609.2、野黄芩苷463.3、半枝莲碱B 558.4和CDDO-Me 506.7。结果:在小鼠肝脏、心脏、脾脏、肺脏、肾脏等组织中,芦丁、野黄芩苷、半枝莲碱B分别在0.005 0~0.160 0、0.004 0~0.133 0、0.0033~0.106 7μg·m L^(-1)的线性范围内线性关系良好(r≥0.9913);方法的精密度和稳定性RSD均小于15%;回收率为90.0%~98.4%,RSD小于15%,符合化学药物非临床药代动力学研究技术指导原则。芦丁等3个成分在小鼠体内分布比较广泛,其中在肝脏和肾脏中分布较多,在肺脏中分布含量最低。结论:本方法经方法学验证,可对小鼠组织中的芦丁、野黄芩苷、半枝莲碱B含量进行测定;在用于小鼠体内化学成分的组织分布研究中,芦丁在肾脏中含量多、脾脏中最少,野黄芩苷在心脏中含量最多、肺脏中最少,半枝莲碱B在肝脏中含量最多、肾脏中最少。

消癌解毒方中有效成分在小鼠体内的组织分布研究

目的：使用液质联用方法对消癌解毒方水提液中芦丁、野黄芩苷、半枝莲碱B等在小鼠组织中的分布进行研究。方法：以2-氰基-3,12-二氧代齐墩果烷-1,9（11）-二烯-2-酸甲酯（CDDO-Me）作为内标,以甲醇对组织中蛋白进行沉淀,通过液质联用技术对芦丁、野黄芩苷和半枝莲碱B含量进行测定,使用Waters ACQUITY UPLC BEH-C18色谱柱（100 mm×2.1 mm,1.7μm）,0.1%甲酸水溶液（A）-乙腈（B）梯度洗脱,正、负离子模式检测,检测离子质荷比（m/z）芦丁609.2、野黄芩苷463.3、半枝莲碱B558.4和CDDO-Me 506.7。结果：在小鼠肝脏、心脏、脾脏、肺脏、肾脏等组织中,芦丁、野黄芩苷、半枝莲碱B在测定的线性范围内线性关系良好（r≥0.9913）;方法的精密度和稳定性RSD小于均15%;回收率为89.89%~113.35%,RSD值小于15%,符合化学药物非临床药代动力学研究技术指导原则。芦丁等3种成分在不同组织中分布情况各不相同,芦丁主要分布在肝脏和肾脏,其次为心脏和脾脏,肺脏中分布最少;野黄芩苷只在肺脏中检出;半枝莲碱B的分布趋势为肝脏、肾脏和心脏中,肺脏和脾脏中分布较少。结论：本方法能够方便、灵敏、准确地对小鼠组织中的芦丁、野黄芩苷、半枝莲碱B的含量进行测定。

HPLC法同时测定丹灯通脑胶囊中四组分含量

目的:建立HPLC同时测定丹灯通脑胶囊中葛根素、野黄芩苷、丹酚酸B与丹参酮ⅡA的方法。方法:采用HPLC法,色谱柱为Inerstil-ODS-SP(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液梯度洗脱;流速1 m L·min^(-1);检测波长为280 nm;柱温为30℃。结果:葛根素、野黄芩苷、丹酚酸B、丹参酮ⅡA分别在3.85~115.41μg·m L^(-1)(r2=0.999 8)、5.77~173.22μg·m L^(-1)(r2=0.999 9)、11.47~344.07μg·m L^(-1)(r2=0.999 8)和2.08~62.04μg·m L^(-1)(r2=0.999 9)质量浓度范围内与峰面积具有良好的线性关系;平均回收率(n=9)分别为100.4%,100.4%,99.4%和99.8%。结论:该方法简便、专属、重复性好,可作为丹灯通脑胶囊的质量控制方法。

《中华人民共和国药典》中灯盏细辛含量测定方法的优化

目的:优化《中华人民共和国药典》(简称《中国药典》)中灯盏细辛含量测定项下野黄芩苷的供试品溶液制备方法及色谱条件。方法:对供试品溶液制备方法进行比较;采用DAD检测器对野黄芩苷色谱峰进行峰纯度检查,分离色谱峰中的杂质化合物鉴定其结构,选择能将野黄芩苷与杂质峰分离的色谱条件。结果:采用50%甲醇超声处理制备供试品溶液方法提取更完全且操作简便。《中国药典》灯盏细辛的含量测定项下"野黄芩苷"峰实际是野黄芩苷与飞蓬酯乙的混合峰;以甲醇-四氢呋喃-0.2%磷酸溶液(14∶14∶72)为流动相可使野黄芩苷与飞蓬酯乙完全分离;经方法学验证其线性范围为21.2~424.0μg·mL^-1(r=0.9999);加样回收率平均值(n=12)为98.7%,RSD为2.1%。结论:优化后的方法较《中国药典》方法测定结果准确,且简便,重复性好,为灯盏细辛质量标准修订提供依据。

丹莲肝康颗粒中药材的提取工艺研究

目的:优选丹莲肝康颗粒中药材的提取工艺。方法:以丹参酮ⅡA提取率和干膏得率为指标,采用均匀设计法优选丹参和紫草醇提工艺中的乙醇体积分数、乙醇用量、浸泡时间、提取时间、提取次数;以野黄芩苷和丹酚酸B的提取率及干膏得率为指标,采用正交设计试验法对水提工艺中的加水量、提取时间、提取次数进行优化,对最优处方工艺进行验证。结果:最佳醇提工艺为丹参、紫草加9.6倍95%乙醇,浸泡3 h,提取2次,每次20 min;3次验证试验显示,丹参酮ⅡA提取率平均值为44.73%,干膏得率平均值为25.55%。药渣和其余药材加水提取3次,第1次加水12倍量水,第2、3次分别加水10倍量,每次提取1 h;3次验证试验丹酚酸B提取率平均值为47.67%,野黄芩苷提取率平均值为71.67%,干膏得率平均值为24.63%。结论:优选的提取工艺稳定可行,为丹莲肝康颗粒的制备提供了科学依据。

液质联用法测定灯银脑通胶囊中6种有效成分的含量

目的建立同时测定灯银脑通胶囊中灯盏乙素、白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B、人参皂苷Rg1和三七皂苷R1等6种有效成分含量的HPLC-MS/MS方法。方法选用Phenomenex Luna C_(18)(4.6 mm×150 mm,5μm)色谱柱,0.2%甲酸甲醇溶液(A)、0.2%甲酸水溶液(B)梯度洗脱方式洗脱,柱温为30℃,流速为0.3 mL·min^(-1),分析时间10.0 min;质谱条件选用ESI源-MRM模式,正离子模式检测。建立的方法对3批灯银脑通胶囊进行了测定。结果灯盏乙素、白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B、人参皂苷Rg1和三七皂苷R_16种有效成分在测定浓度范围内均具有良好的线性关系,r均不小于0.999 0,提取回收率均在94.8%~108.5%之间。结论本法准确可靠、结果稳定、专属性强、重现性良好,为灯银脑通胶囊的质量控制提供了很好的依据。

基于HPLC波长切换联合梯度洗脱技术的茵栀黄口服液中15种成分定量研究

目的 建立HPLC波长切换联合梯度洗脱法(HPLC-DVD法)同时测定茵栀黄口服液中14种活性成分新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、栀子苷、对羟基苯乙酮、野黄芩苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、千层纸素A苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、千层纸素A及一种辅料成分苯甲酸的含量。方法 采用HPLC-DVD法,WelchUltimateXB-C18(250mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相,进行梯度洗脱,体积流量前30 min为0.8 mL/min,后续为1.0 mL/min;新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸检测波长为325 nm,栀子苷检测波长为238 nm,对羟基苯乙酮检测波长为275 nm,苯甲酸检测波长为228 nm,野黄芩苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C检测波长为325 nm,千层纸素A苷、汉黄芩苷检测波长为203 nm,黄芩素、汉黄芩素、千层纸素A检测波长为274 nm;进样量为10μL。结果 15种指标成分新绿原酸在74.46~1 574.42 ng(r=0.999 8)、绿原酸在34.58~741.10 ng(r=0.999 6)、隐绿原酸在34.65~742.62 ng(r=0.999 7)、栀子苷在234.42~5 024.45 ng(r=0.999 9)、对羟基苯乙酮在74.46~1 574.42 ng(r=0.999 9)、苯甲酸在321.79~6 897.10 ng(r=0.999 8)、野黄芩苷在44.70~958.08 ng(r=0.999 7)、异绿原酸B在32.53~697.22 ng(r=0.999 5)、异绿原酸A在8.60~184.38 ng(r=0.999 6)、异绿原酸C在31.93~684.30 ng(r=0.999 7)、千层纸素A苷在254.82~5 461.66 ng(r=0.999 5)、汉黄芩苷在10.18~218.12 ng(r=0.999 9)、黄芩素在92.81~1 989.33 ng(r=0.999 6)、汉黄芩素在31.17~668.00 ng(r=0.9995)、千层纸素A在11.74~251.73ng(r=0.9998)与峰面积具有较好的线性关系;精密度良好,RSD≤0.75%;重复性良好,RSD≤1.95%;供试品溶液在室温条件下8 h内稳定,RSD≤1.77%;平均加样回收率和相应的RSD分别为100.69%(0.55%)、101.99%(1.78%)、99.20%(0.72%)、100.13%(0.48%)、100.96%(1.74%)、100.02%(0.46%)、101.14%(0.27%)、99.87%(0.59%)、100.21%(1.56%)、102.18%(0.33%)、99.00%(1.02%)、98.82%(0.65%)、98.31%(0.58%)、96.01%(0.44%)、100.56(0.71%)。10批次供试品中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、栀子苷、对羟基苯乙酮、苯甲酸、野黄芩苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、千层纸素A苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、千层纸素A的含量分别为0.246~0.322、0.213~0.290、0.203~0.267、1.786~2.047、0.035~0.046、2.393~2.541、0.263~0.392、0.139~0.216、0.032~0.067、0.208~0.250、2.120~2.648、0.063~0.102、0.081~1.429、0.164~0.246、0.079~0.110 mg/mL。结论 建立的HPLC-DVD法同时测定茵栀黄口服液中的15种成分,方法简便、快速、准确,可为茵栀黄口服液质量控制提供科学依据。

灯盏细辛药材HPLC指纹特征研究

目的:建立灯盏细辛药材HPLC指纹特征研究方法。方法:采用Alltech C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-甲醇-0.5%甲酸溶液为流动相梯度洗脱,流速1.0 mL.min-1,柱温30℃,检测波长325 nm。结果:确定了13个共有峰的指纹特征图谱,测定2个产地灯盏细辛药材中3个部位的样品并比较其异同,同时对栽培品与市售药材进行测定。结论:为灯盏细辛药材质量控制新模式的建立提供了依据。

民族药材飞蓬的质量标志物研究及资源品质评价

目的 基于质量标志物(quality marker,Q-Marker)核心理论,从网络药理学(有效性)及化学成分(特有性、可测性)角度对民族药材飞蓬治疗心脑血管疾病的Q-Marker进行分析,评价其资源品质、寻找灯盏花素的新资源。方法 采用UPLC-Q-TOF-MS分析飞蓬的主要化学成分;通过网络药理学的有效性及化学成分特有性与可测性对飞蓬治疗心脑血管疾病Q-Marker进行筛选;采用UPLC-DAD法同时测定不同产地飞蓬Q-Marker含量。结果 从飞蓬中鉴定得到灯盏乙素、灯盏花苷I、异绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸B、芹菜素、木犀草素、槲皮素等26个活性成分;初步确定绿原酸、灯盏花苷I、灯盏乙素、异绿原酸A、异绿原酸B为飞蓬治疗心血管疾病的Q-Marker;建立了基于UPLC-DAD测定飞蓬Q-Marker的方法,10批次不同产地的样品被测定,绿原酸质量分数为0.43~2.13mg/g,灯盏花苷I质量分数0.18~1.92mg/g,灯盏乙素质量分数为0.21~3.75 mg/g,绿原酸A质量分数为0.07~0.18 mg/g,异绿原酸B质量分数为0.56~1.76 mg/g。结论 该方法科学、可行,为飞蓬的质量控制研究提供了科学依据,同时为灯盏花素的新资源开发奠定基础。