利用RAPD和SRAP建立快速鉴定凤尾菇菌株的SCAR标记

为建立一套基于DNA分子标记技术快速鉴定凤尾菇菌株的有效方法,首先对生产上常用的9个凤尾菇菌株进行RAPD和SRAP多态性分析,从巴西凤平、高温凤尾菇、327和凤尾菇4个菌株中分别获得了片段长度为1 760 bp、356 bp、1 113 bp和400 bp的4条特异片段,将其克隆、测序、引物设计,成功转化为4个稳定的SCAR标记。试验结果表明,利用这些特异SCAR标记,能在1 d内有效地解决9个凤尾菇菌株中的"同名异物"和"同物异名"现象,快速鉴定凤尾菇菌株,最终证实SCAR标记在凤尾菇菌株快速鉴定上的可行性和可靠性。

大麻性别的RAPD和SCAR分子标记

利用随机扩增多态性DNA (randomamplifiedpolymorphicDNA ,RAPD)技术获得与大麻性别连锁的分子标记。将 10株雄性大麻或 10株雌性大麻的单个DNA样品等量混合分别组成雄性或雌性DNA池(DNA pool) ,以提供具有相同遗传背景的雌、雄性DNA样品。每个随机引物分别用三个不同的循环程序进行PCR扩增。在 30个随机引物中 ,用引物S40 1扩增得到一条约 2 .5kb雄性多态性片段。对该片段进行了克隆和序列分析 ,并根据序列分析结果将上述RAPD分子标记转化为重复性和特异性更好的SCAR(sequencecharacterizedamplifiedregions)

南蛇藤雌性性别相关的RAPD和SCAR标记

南蛇藤(Celastrus orbiculatus Thunb)属卫矛科南蛇藤属落叶藤本植物,是中国传统中药材,雌雄异株,少量雄全同株。由于目前在分子水平上对南蛇藤性别差异的研究较少,极大地限制了对其的开发利用。本研究利用RAPD分子标记对南蛇藤雌株、雄株和雄全同株进行了差异比较。100个引物中有5个引物(S127、S140、S148、S174及S111)在不同性别南蛇藤的基因组DNA中扩增到存在明显差异的条带。根据序列分析的结果将RAPD引物转化成特异性较强的SCAR引物后,仅引物S111扩增出一条雌性特异性条带。序列分析发现,该片段包含两个超过100个氨基酸的开放阅读框,其功能有待进一步的研究。

鲤抗寒性状的RAPD标记转化为SCAR标记的研究

以黑龙江鲤Cyprinus carpio haematopterus、荷包红鲤抗寒品系、荷包红鲤Cyprinus carpio var.、柏氏鲤Cyprinus pellegnini pellegnini以及荷包红鲤抗寒品系(父本)与柏氏鲤(母本)杂交F2的DNA样品为材料,用300个随机引物对其进行PCR扩增,获得2个与鲤抗寒性状相关的分子标记AL04986和AR02788。回收、纯化这两个RAPD标记,连接到pMD18-T载体中,转化DH5α大肠杆菌感受态细胞,并对插入片段进行测序。根据测序结果,设计了3对SCAR引物SCAL04L/SCAL04R1、SCAL04L/SCAL04R2和SCAR02L/SCAR02R,其中SCAR02L/SCAR02R这对引物可以成功的反映出杂交F2两个群体在抗寒能力上的差异,适宜的退火温度为57℃,将此标记命名为SCAR02788。根据AL04986的测序结果设计的两对SCAR引物并没有反映出这种差异。SCAR02L/SCAR02R标记可以用作鲤抗寒基因分子辅助选择的依据。

谭清苏铁性别连锁的RAPD和SCAR分子标记

利用RAPD(Random amplified polymorphicDNA)分子标记技术,寻找谭清苏铁(Cycas tanqingii)中与性别相关的分子标记,筛选了160个10bp的随机引物,产生了2500多个RAPD条带。只有引物S0465(CCCCGGTAAC)产生了一条大约500bp的雌性特异RAPD标记,该分子标记出现在所有的供试雌性植株中,而所有的供试雄性植株都不具有该标记。对该特异片段进行了克隆和序列测定,并根据序列分析结果将RAPD标记转化为重复性和特异性更好的特异特征序列扩增区域(SCAR)分子标记,并命名为STQC-S465-483。分子标记的建立可用于谭清苏铁幼苗性别的早期鉴定,为谭清苏铁就地保护和迁地保护提供技术支持。

一种新型的分子标记—SCARs验证王浆高产蜜蜂的RAPD分子标记—W316bp的研究

为了验证王浆高产蜜蜂的RAPD分子标记—W 316bp正确性 ,采用了新型分子标记—SCARs ,研究结果获得的SCARs分子标记与原来RAPD分子标记有一致的显性行为 。

烟草品种的SCAR标记鉴别

利用6对SCAR引物对12个烟草(Nicotiana tabacum L.)品种复烤叶片的基因组DNA进行SCAR-PCR扩增分析。根据6个SCAR标记在不同烟草品种中的扩增差异,建立了12个烟草品种的分子ID和鉴别路线,分析了SCAR标记鉴别遗传差异较小烟草品种的可行性。结果表明:利用组合标记策略,6个SCAR标记可准确地区分12个烟草品种中具有相同抗感性,亲缘关系较近的烟草品种,并可用于复烤叶片的品种鉴定。

与鲤鱼抗寒性状相关的RAPD分子标记的筛选及其克隆

以黑龙江鲤(Cyprinus carpio haematopterusTemminck et Schlegel)、荷包红鲤抗寒品系(Cyprinus carpiovar.wana-nensis)、荷包红鲤(Cyprinus carpiovar.wananensis)、柏氏鲤(Cyprinus pellegniniTchang)以及荷包红鲤抗寒品系和柏氏鲤的杂交F2的DNA样品为材料,用200个随机引物对其进行PCR扩增,获得了1个与鲤鱼抗寒性状相关的分子标记RAG20,并在F2代分离个体中得到验证。至此,本实验室共获得10个与鲤鱼抗寒性状相关的分子标记,更加证明抗寒性状是数量性状(QTL)受微效多基因控制。此外,将其中4个标记从琼脂糖凝胶上进行回收,并与pMD18-T vector连接,将其转入感受态大肠杆菌E.coliDH 5α,对克隆片段进行序列分析,旨为根据每一序列重新设计引物,将RAPD标记转化为稳定的SCAR标记。

小麦抗禾谷类根线虫基因Rkn-mnl的SCAR标记

将 2个与小麦抗禾谷类根线虫基因Rkn mnl紧密连锁的RAPD标记分别克隆、测序 ,根据测序结果设计两对特异PCR引物 ,通过SCAR PCR反应条件优化 ,成功地将特异RAPD标记OPY16 10 65转换成了稳定的SCAR标记 .图4参

小麦条锈菌条中32号生理小种SCAR检测标记的建立

【目的】建立具有应用价值的小麦条锈菌条中32生理小种的SCAR检测标记。【方法】用100条随机引物对我国目前主要流行的12个小麦条锈菌生理小种进行RAPD筛选,寻找特异性片断,并对其进行克隆、测序,将该特异性片段转化成条中32号小种的SCAR专化型标记。设计并合成SCAR特异性引物,对不同来源的条中32号进行SCAR检测。【结果】引物S1271从条中32号生理小种中扩增出长度为320 bp的特异片段,该片段可作为条中32号的SCAR标记。从不同来源的条中32号生理小种中扩增出了筛选到的SCAR标记。【结论】成功建立了条中32专化SCAR标记。

RAPD技术在生物学研究中的应用

ＲＡＰＤ标记具有简易、快速、灵敏、经济的优点。本文介绍了该技术在生物物种鉴别、遗传多样性、基因定位、分子连锁图谱构建和外源导入基因的分子检测等生物学领域广泛应用的概况。由ＲＡＰＤ转化而来的ＲＡＰＤ－ＰＣＲ－ＳＣＡＲ标记稳定、灵敏、准确性高，在种质资源鉴别、分子标记辅助育种中有着潜在的应用前景。

温室白粉虱SCAR分子鉴定技术的建立及应用

温室白粉虱Trialeurodes vaporariorum是为害我国蔬菜作物的重大害虫之一。本研究采用随机扩增多态性DNA(Random Amplified Polymorphic DNA,RAPD)技术对温室白粉虱进行研究,筛选出一条620bp的特异性片段(GenBank登录号为JQ690764),据此片段的测序结果设计一对特异性的序列特异性扩增区(Sequence characterized Amplified Region,SCAR)标记(Tv-F和Tv-R),可成功从室内饲养的和从不同地区田间采集的温室白粉虱的基因组DNA中扩增出一条412bp的特异性条带,而不能从供试的其他粉虱类害虫中扩增出该相应条带。单头温室白粉虱成虫的基因组DNA稀释1000倍时,该SCAR标记仍可成功扩增出预期条带,显示出极高的灵敏度。该SCAR标记对温室白粉虱的基因组DNA扩增重复性和稳定性好,且操作简便,灵敏度高,可用于样品的大规模检测,为田间温室白粉虱的快速识别鉴定及其有效防治提供了技术基础。

华山新麦草3Ns染色体特异SCAR标记的开发

为快速准确地建立小麦-华山新麦草杂交后代的分子标记鉴定方法,采用150条10bp的随机引物R1-R150对华山新麦草、普通小麦7182、中国春及华山新麦草1Ns-7Ns全套二体附加系共10个材料进行了RAPD分析,从中获得了华山新麦草3Ns染色体上2个特异RAPD分子标记片段FR-113和FR-125。克隆这两个片段并测序,发现其全长分别为543bp和515bp;分析序列后对其分别设计SCAR引物S-113和S-125,重新对10个材料进行SCAR分析,结果只在华山新麦草和小麦-华山新麦草3Ns二体附加系上扩增出了特异条带,由此证明已将华山新麦草3Ns染色体上获得的两个RAPD标记成功转化为稳定可靠的SCAR标记。这两个SCAR标记可用于检测小麦背景下的华山新麦草3Ns染色体,同时为小麦-华山新麦草杂交后代提供了分子鉴定依据。

稻蝗属特异性SCAR分子标记的鉴定

【目的】研究稻蝗属特异性DNA分子标记,为稻蝗属物种的分类鉴定提供快速有效的分子检测方法。【方法】基于稻蝗属物种及其近缘属种的大量RAPD-PCR结果,筛选出稻蝗属物种特异性的RAPD条带,对该特异RAPD条带进行克隆、测序。基于所测序列设计特异引物,以稻蝗属不同物种和蝗总科其它物种基因组DNA为模板进行PCR扩增。【结果】随机引物S823可在稻蝗属不同物种扩增出约650bp的RAPD条带,经对该条带的克隆、测序,发现在3个受试的稻蝗属物种中序列同源度达92.3%—96.6%,序列G+C含量大于15%,并富含大量的A、T重复区;基于已知序列设计的特异引物对稻蝗属7个物种可以扩增出目的条带(550bp),而对赤胫伪稻蝗及蝗总科其它物种均无扩增条带。【结论】鉴定了稻蝗属特异的RAPD条带,基于该条带序列设计的特异引物可用于稻蝗属物种的快速分子鉴定。

利用SCAR-PCR检测杂交油菜“蜀杂9号”的杂种纯度

用两个分别能在“蜀杂9号”父、母本之间稳定产生多态性的随机引物S18和S31,对父、母本DNA样品进行RAPD扩增,将得到的特异标记片段S18750和S31550进行回收、克隆和测序。根据测序结果设计序列特异性扩增(SCAR)引物SZ9SP1和SZ9SP2,将“蜀杂9号”的亲本RAPD标记转化为序列特异的SCAR标记。当用两对引物分别扩增杂种F1代单株总DNA时,能分别获得父、母本特异序列扩增带,表明获得的SCAR标记能可靠地用于“蜀杂9号”杂种纯度的检测。

罗汉果性别相关的SCAR标记筛选

以罗汉果雌雄单株各30份为试材,采用随机引物筛选法,筛选与罗汉果性别相关的RAPD标记,并根据特异片段的测序结果,将RAPD标记转化为特异性和稳定性更好的SCAR标记,以期为罗汉果的性别早期鉴定和分子辅助育种研究提供参考依据。结果表明:在330条随机引物中获得了分别与罗汉果雌性和雄性相关的RAPD引物S2124和S343。根据特异序列测序结果,对雌性特异带S2124-1K和雄性特异带S343-1.4K各自设计并合成了2对SCAR引物,经验证,SCAR引物SC2124-1K-14在62℃和SC2124-1K-8在56℃均可扩增出1 019bp的雌性特异带,SC343-1.4K-12在64℃和SC343-1.4K-4在56℃均可扩增出1 373bp的雄性特异带。这些特异的SCAR标记具有较好的应用价值,可为罗汉果的性别早期鉴定提供分子依据。

贵农21白粉病抗性基因的RAPD分子标记

应用RAPD技术对贵农 2 1的白粉病抗性基因进行了分子标记 ,结果找到了贵农 2 1中的两个白粉病抗性基因的分子标记 ,其中有一个抗病性基因相同于P38中的Pm2 1,来自于簇毛麦 ,其分子标记就是P38的RAPD标记OPH1712 65和OPH1714 0 0 ,并已转化为SCAR标记 ;另外一个抗病性基因的RAPD的分子标记为OPO15 12 0 0 。

药用黄芪的特异性SCAR标记的开发

目的:为了更好的保护利用黄芪资源,本研究试图开发出准确可靠、快速稳定的分子标记用于黄芪药材的研究及鉴定。方法:本研究以15份黄芪的基因组DNA为模板,进行随机扩增多态DNA(RAPD)扩增,筛选差异条带并回收、克隆和测序,根据差异条带的测序结果设计特异性SCAR引物。结果:成功获得了5个SCAR标记,SCAR引物在黄芪样品中的扩增结果表明,相对于RAPD标记,其多态信息含量降低,但标记的稳定性、特异性增高。结论:因此认为可以通过RAPD转化为SCAR标记的方法,大量开发这一特异性分子标记,为黄芪资源的遗传多样性研究、鉴定技术以及遗传图谱的构建奠定物质基础。

华山新麦草2Ns染色体SCAR标记的开发

为准确快速地建立小麦-华山新麦草杂交后代的分子标记鉴定方法,利用180条长度为10 bp的随机引物R1~R180对小麦-华山新麦草全套(1Ns~7Ns)二体附加系及其亲本华山新麦草和普通小麦7182共9个材料进行了RAPD分析。结果表明,R131在华山新麦草和小麦-华山新麦草2Ns二体附加系中可以扩增出特异条带。将该特异条带回收并测序,发现其全长为1126 bp,对其进行序列比对分析后设计SCAR引物S131,然后利用S131重新对9份材料进行了SCAR分析。结果显示,S131只在华山新麦草和小麦-华山新麦草2Ns二体附加系中扩增出特异性条带,表明RAPD标记R131已成功转化为可靠、特异的SCAR标记S131。这个新的SCAR标记可用于检测普通小麦背景下华山新麦草2Ns染色体。

马铃薯瓢虫与茄二十八星瓢虫SCAR标记的建立及应用

为了探索快速鉴定马铃薯瓢虫Henosepilachna vigintioctomaculata(Motschulsky)和茄二十八星瓢虫Henosepilachna vigintioctopunctata(Fabricius)的分子生物学方法,本研究在随机扩增多态性DNA(random amplified polymorphic DNA,RAPD)的基础上,分别设计了可以鉴别两个物种的序列特征扩增区域(sequence characterized amplified regions,SCAR)标记。从随机合成的60条引物中筛选出来2条特异性引物(分别为OPI-6和OPJ-15),引物OPI-6在马铃薯瓢虫中扩增出约750 bp的特异性条带,引物OPJ-15在茄二十八星中扩增出约750 bp的特异性条带,根据测序结果设计了两对SCAR引物对筛选结果进行验证,发现根据OPI-6的测序结果所设计的SCAR引物(OPI-6 test)仅能在马铃薯瓢虫中扩增出645 bp的条带,而根据OPJ-15的测序结果所设计的SCAR引物(OPJ-15 test)仅能在茄二十八星瓢虫中扩增出436 bp的条带。这两对SCAR引物能够准确、稳定且快速地区分马铃薯瓢虫与茄二十八星瓢虫,对这两种害虫的精准防控具有重要意义。