锯缘青蟹抗菌肽Scygonadin基因的转录表达特性研究

Scygonadin是从锯缘青蟹生殖系统分离获得的一种抗菌肽,我们用Dot-blot检测了该基因在锯缘青蟹幼体(溞状幼体和大眼幼体)和成体锯缘青蟹(雄性和雌性)的鳃、甲壳、眼、血细胞、肝胰脏、心脏、肌肉、甲壳下皮层、胃和生殖系统等10个不同组织器官中的转录表达情况.结果显示,该基因仅在雄性生殖系统中转录表达.进一步分析该基因在性成熟雄性锯缘青蟹和远洋梭子蟹生殖系统中不同部位(精巢、输精管、贮精囊和射精管)的转录表达情况,结果显示,Scygona-din基因主要在性成熟锯缘青蟹的射精管中转录表达.

海洋鱼类和青蟹抗菌肽hepcidin和scygonadin的研究

抗菌肽或抗微生物肽因具有杀死或抑制微生物的共同特性,近年来科学家又将这些肽类称为"天然抗生素",有望在将来作为一种新型的生物药物替代现有的化学类抗生素.海洋动物中蕴藏着世界上丰富的抗菌活性物质,研究与开发应用海洋动物抗菌肽成为近年来的研究热点.结合国内外的相关研究进展,简要总结了课题组近年来在我国海水养殖鱼类抗菌肽hepcidin和青蟹抗菌肽scygonadin的研究进展,从抗菌肽的蛋白分离、纯化、基因克隆、基因表达模式、基因工程表达以及抗菌肽合成与表达产品的抗菌活性等进行了简要细致的叙述,对深入探索海洋动物抗菌肽在我国水产养殖业的开发应用具有重要的参考价值.

拟穴青蟹抗菌肽scygonadin在毕赤酵母中的表达及其抗菌活性

采用PCR方法克隆获得拟穴青蟹抗菌肽scygonadin基因成熟肽片段,将其连接到Pichia pastoris酵母表达载体pPIC9K中,构建了分泌表达载体pPIC9k-Scy.电击转化毕赤酵母GS115,经表型筛选和PCR鉴定证实了目的基因已稳定整合入酵母基因组中.以甲醇诱导表达阳性克隆,上清中表达产物经过Tricine-SDS-PAGE鉴定与预期的目的蛋白大小(约10ku)相符.并利用琼脂孔穴扩散法证明了表达产物能抑制革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的生长.

口服投喂抗菌肽Scygonadin对黑鲷免疫及抗氧化指标的影响

本实验以黑鲷(Sparusmacrocephlus)为研究对象,利用抗菌肽基因工程表达产物Scygonadin进行口服试验,探讨抗菌肽口服后是否对鱼体内免疫学指标或者抗氧化反应指标有影响。黑鲷空腹三天后,口服投喂不同浓度(0.2、0.4、0.8 mg/m L)的Scygonadin各100μl,以PBS为对照组,采集不同时间点(6、12、24、48、72 h)血清及肝、肠组织样品,测定超氧化物歧化酶(SOD)、脂质过氧化(MDA)、一氧化氮合酶(NOS)、一氧化氮(NO)、谷胱甘肽(GSH)等抗氧化指标。实验结果表明黑鲷口服投喂基因工程表达产物Scygonadin对其免疫及抗氧化指标无显著性影响,表明口服抗菌肽Scygonadin不会影响鱼类的正常免疫功能,从而为抗菌肽在水产养殖业的应用提供了科学依据。

三疣梭子蟹抗菌肽Scygonadin基因的克隆与序列分析

抗菌肽Scygonadin是一种存在于甲壳动物中与生殖免疫相关的抗菌肽。研究采用RT-PCR和RACE技术,克隆三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)Scygonadin基因并进行序列分析。结果表明,三疣梭子蟹Scygonadin c DNA序列全长为549 bp,含有一个372 bp的开放阅读框(ORF),编码123个氨基酸,其中含29个氨基酸的信号肽,5'和3'非编码区分别为56 bp和121 bp。与已报道的锯缘青蟹(Scylla serrata)Scygonadin核苷酸序列的同源性为77.4%,氨基酸序列的同源性为68.3%。三疣梭子蟹Scygonadin基因序列的获得为研究其免疫防御机制和基因功能打下基础。

锯缘青蟹Scygonadin抗菌肽的毕赤酵母表达及其产物抑菌活性分析

Scygonadin抗菌肽是一类阴离子抗菌肽,从锯缘青蟹体内分离得到,对溶壁微球菌和嗜水气单胞菌具有较好的抑制作用。研究从锯缘青蟹c DNA文库中找出Scygonadin抗菌肽的成熟核苷酸序列和对应的氨基酸序列,并根据毕赤酵母的偏好密码子进行密码子优化,优化后的密码子经人工合成后连接到毕赤酵母表达载体p PCIZαA上,构建锯缘青蟹Scygonadin抗菌肽的真核表达载体,然后经电击转化至毕赤酵母X-33中。表达产物经镍柱纯化后进行SDS-PAGE电泳。结果表明,锯缘青蟹Scygonadin抗菌肽在毕赤酵母X-33中获得表达,且测序结果显示与最初设计的氨基酸序列一致;体外抑菌试验表明:纯化的重组多肽具有抑制溶壁微球菌及嗜水气单胞菌的作用,而且还可抑制金黄色葡萄球菌等多种革兰阳性菌,但其对革兰阴性菌的抑制作用相对较弱。