乌司他丁对热打击诱导人肠上皮细胞释放白细胞介素-8与p38信号通路的研究

目的 研究乌司他丁对热打击诱导人肠上皮细胞释放细胞因子的影响以及可能参与调控的信号通路.方法 用不同温度的热打击(39、41、43 ℃)1 h刺激培养的人肠上皮细胞株(SW480)后,继续于37 ℃下培养24 h,收集细胞和细胞上清液.另将细胞进行热打击(43 ℃,1 h),同时加用100 kU/L和1 000 kU/L的乌司他丁继续于37 ℃下培养24 h后收集细胞和细胞上清液;用酶联免疫吸附法(ELISA)检测上清液中白细胞介素-8(IL-8)的含量,用蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测细胞裂解液中p38蛋白表达.结果 低温度的热打击(39 ℃)对SW480细胞分泌IL-8没有诱导作用,但高温(41 ℃、43 ℃)可明显诱导IL-8水平的升高(均P【0.01);而乌司他丁可明显抑制热打击对SW480细胞IL-8的诱导表达作用(均P【0.01),尽管大剂量乌司他丁对IL-8的抑制作用较小剂量组更加明显,但两个剂量乌司他丁组间无明显差异.不同温度的热打击可诱导SW480细胞p38表达上调,并具有一定剂量依赖效应(均P【0.01).而乌司他丁不仅可以抑制SW480细胞p38的基础表达水平,并且小剂量的乌司他丁即可明显抑制热打击对p38的诱导表达作用(P【0.01),但两个剂量乌司他丁组间无明显差异.结论 乌司他丁可能通过降低p38表达来抑制热打击对肠上皮细胞释放IL-8的诱导作用,但同时也存在其他信号通路参与的可能,这为理解肠屏障细胞的炎症反应在重症中暑中肠道细菌和内毒素移位中的作用机制提供了一定的实验基础,也为乌司他丁作为免疫调节剂未来用于治疗重症中暑提供了实验依据.

中药筋脉通对糖尿病大鼠睫状体神经营养因子表达的影响

目的 观察中药复方筋脉通对糖尿病大鼠坐骨神经睫状体神经营养因子(CNTF)mRNA和蛋白表达的影响.方法 采用一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ)制备糖尿病大鼠模型.将28只糖尿病大鼠按随机数字表法分为模型组(8只)、筋脉通组(10只)和神经妥乐平组(10只),饲养8周形成糖尿病周围神经病变模型后开始灌胃.筋脉通和神经妥乐平组按照成人剂量的10倍灌胃给药(筋脉通0.875 g·kg-1·d-1,神经妥乐平2.67 NU·kg-1·d-1),模型组灌服等量蒸馏水,共16周.检测各组大鼠灌胃前及灌胃4、8、12、16周的体重和血糖变化;并于第16周进行热水甩尾实验、机械痛阈测定,然后取坐骨神经,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测CNTF mRNA的表达,用免疫组化染色法测定CNTF蛋白表达.结果 与模型组相比,筋脉通组和神经妥乐平组血糖、体重在各时间点均无明显差异;与模型组比较,筋脉通组和神经妥乐平组甩尾潜伏期明显缩短[(7.58±6.58) s,(7.41±1.24) s比(11.12±1.79) s]、机械痛阈值明显升高[(14.75±6.58) g,(15.43±6.36) g比(6.92±1.46) g],坐骨神经CNTF的mRNA和蛋白表达明显增加(mRNA:0.030 2±0.010 0,0.026 0±0.005 0比0.006 3±0.003 0,蛋白:14 119.65±5 837.82,13 643.16±5 090.90比11 513.31±4 248.31,P【0.05或P【0.01).而筋脉通组与神经妥乐平组相比均无显著差异.结论 筋脉通能明显增加糖尿病周围神经病变大鼠坐骨神经CNTF的mRNA及蛋白表达.