Effects of low molecular weight polysaccharide from Sargassum thunbergii against palmitic acid-induced intracellular lipid accumulation in 3T3-L1 adipocyte and HepG2 cells

Low molecular weight polysaccharides can be isolated from Sargassum thunbergii(LMPST)and in vitro experiments were conducted to evaluate the inhibitory effects on lipids.Two natures of LMPST were attained from S.thunbergii and appraised their LMPST on palmitic acid(PA)induced lipid accretion in Hep G2,and 3T3-L1 cells.LMPST treatment lessened lipid deposition and intracellular free fatty acid and triglyceride intensities in PA-treated above mentioned cells.The mechanistic study publicized that LMPST2 significantly suppressed adipogenesis and stimulated the PA-treated 3T3-L1 cells occupied in the lipolysis pathway.Furthermore,in PA-treated Hep G2 cells,the free fatty acid oxidation was significantly increased by LMPST2.Given these constructive properties of LMPST2 from S.thunbergii,is a potential candidate for diminishing the intracellular lipids,and for a therapeutic agent in those conditions.

低分子量酶解灵芝硒多糖对小鼠肠道菌群的影响

目的研究低分子量灵芝硒多糖对肠道菌群紊乱小鼠的改善调节作用。方法利用生物发酵法培养富集灵芝硒多糖,采用热水浸提法提取灵芝硒多糖,并进一步酶解为低分子量多糖,以水解率为响应值,在单因素基础上,用响应面法优化酶解工艺条件。随后使用超滤膜截取10 kDa以下多糖,以头孢克肟诱导建立肠道紊乱小鼠模型,灌胃低分子量灵芝硒多糖,并测定小鼠体重及肠道内容物短链脂肪酸含量,利用16S rRNA高通量测序分析小鼠肠道菌群变化。结果灵芝硒多糖的富硒量为(327±26)mg/g,多糖含量为(6.14±0.18)%,低分子量多糖的酶解最优工艺为温度50℃、pH 5.5、时间121 min,该条件下的水解率为62.8%。研究表明低分子量多糖对小鼠体重无影响,高通量测序结果显示低分子量灵芝硒多糖能有效改善肠道菌群失调症状,调节肠道菌群的物种组成,显著上调厚壁菌门(Firmicutes)丰度,降低拟杆菌门(Bacteroidetes)丰度,上调产酸菌乳杆菌属(Lactobacillus)、布劳特氏菌属(Blautia)、链球菌(Streptococcus)、样棒菌属(Allobaculum)、颤螺菌属(Oscillospira)等丰度,增加乙酸、丁酸含量,下调普雷沃氏菌(Prevotella)、拟杆菌属(Bacteroides)、梭菌属(Clostridium)、粪球菌属(Coprococcus)、瘤胃球菌属(Ruminococcus)丰度,抑制丙酸分泌。结论低分子量灵芝硒多糖具有改善小鼠肠道菌群失调作用,可能是通过调整菌群组成来影响短链脂肪酸分泌达到保护肠道健康的目的。

利用大孔树脂对低分子量灵芝多糖脱色的研究

比较了7种树脂对低分子量灵芝多糖脱色的效果,从中筛选出D354-FD、AB-8和HPD4003种树脂,并通过单因素实验和正交实验对脱色条件进行优化,结果表明:采用AB-8树脂,在pH=4.0,温度60℃时,对低分子量灵芝多糖脱色率可达到87.38%,多糖保留率为89.24%,蛋白质去除率为77.11%。

不同标准品对HPGPC法测定多糖相对分子质量的影响

目的 :考察不同标准品对高效凝胶渗透色谱法 (HPGPC)测定多糖相对分子质量的影响。方法 :分别采用葡聚糖和肝素为标准品测定低分子海洋硫酸多糖药物CCS的相对分子质量及其分布。结果 :以葡聚糖和肝素为标准品测定的CCS的重均相对分子质量分别为 2 0 2 78和 7990 ,分布宽度分别为 1.35和 1.4 4。结论 :不同标准品对HPGPC法测定多糖相对分子质量结果影响较大。

低分子量灰树花多糖的分离、纯化和抗肿瘤活性

目的:从灰树花菌丝体中分离纯化低分子量多糖并进行结构鉴定和抗肿瘤活性检测。方法:采用大孔吸附树脂和离子交换纤维素进行分离,SephadexG200柱层析纯化,HPGFC测定分子量,紫外光谱、红外光谱、薄层色谱和高效液相色谱和气相色谱等进行纯度和结构鉴定。用荷瘤小鼠检测抗肿瘤活性。结果:得到大、小两种多糖组分,其中低分子量多糖为白色粉末状,分子量约为2600,单糖组成为D葡萄糖,含α1,3,α1,6,α1,4糖苷键,对S180肉瘤、EAC腹水瘤、Heps实体瘤都有明显抑制作用。结论:分离得到一种灰树花菌丝体多糖,为低分子量的α葡聚糖,初步药效试验表明其具有抗肿瘤作用。

制备低分子量岩藻聚糖的研究

从我国福建省海域所产海带中提取的岩藻聚糖,经过酸和酶水解,使大分子量的岩藻聚糖降解为低分子量岩藻聚糖。分离水解产物并通过测定硫酸基团保留率,比较盐酸水解和果胶酶水解的优缺点,旨在寻找一种经济、高效、产物生理活性高的降解方法。

生物多糖超声波辅助提取研究进展

超声辅助提取技术具有提取条件温和、提取时间短和提取率高的优点,已广泛应用于多种生物多糖的提取。本文就超声辅助提取对多糖提取率、多糖结构、多糖加工特性及多糖生理活性的影响研究进行了综述,为生物多糖的超声辅助提取提供参考。

低分子量姬松茸多糖对HT-29细胞与内皮细胞迁移、黏附的影响

目的探讨低分子量姬松茸多糖(LMPAB)对肿瘤细胞与内皮细胞迁移和黏附的影响。方法采用MTT法检测LMPAB对人结肠癌细胞(HT-29)和HUVECs增生的影响。采用分光光度法检测LMPAB对HT-29细胞与HUVECs黏附的影响,采用transwell双层小室观察LPMPAB对HT-29迁移穿过单层HUVECs的影响。结果LMPAB对HT-29和HUVECs增生无显著性作用,LMPAB能够降低HT-29细胞与内皮细胞的黏附,并减少迁移和穿过单层内皮细胞的肿瘤细胞数目。结论低分子量姬松茸多糖通过抑制肿瘤细胞与内皮细胞的黏附以及肿瘤细胞迁移穿过内皮细胞而发挥其抗肿瘤转移作用。

低分子量姬松茸多糖的免疫活性研究

目的:探讨姬松茸中分离纯化的低分子量多糖对ICR小鼠免疫功能的影响。方法:采用碳粒廓清实验,比较经姬松茸多糖免疫的小鼠与未经免疫小鼠的巨噬细胞吞噬功能的影响;MTT法测定姬松茸多糖体内外刺激ICR小鼠的脾淋巴细胞体外培养60h的增殖能力。结果:姬松茸多糖可以增强小鼠巨噬细胞的吞噬功能;体外能刺激小鼠脾淋巴细胞的增殖;体内诱导脾淋巴细胞增殖的能力不明显。结论:初步证实了姬松茸多糖具有良好的免疫活性,该研究结果为姬松茸多糖的进一步实验研究奠定基础,而且也可为设计理想的免疫佐剂提供了有意义的基础研究数据资料。

江蓠低分子量多糖的提取以及抗氧化活性研究

采用正交实验研究热水浸提乙醇分级沉淀江蓠低分子量多糖的最佳工艺条件为:温度70℃、时间10h、固液比1:30;并和超声波预处理浸提法提取工艺进行了比较,结果表明,超声波预处理对提高多糖得率无影响,但可以加快浸提速率。采用邻苯三酚自氧化和邻二氮菲-Fe2+-Fenton测定多糖清除O2·-和·OH能力,最大清除率分别为51.06％和33.83％,结果表明,提取的多糖具有一定的抗氧化活性。

不同分子量水溶性大豆多糖铁(Ⅲ)配合物的合成及其抗氧化活性研究

研究了超声波协同过氧化氢氧化制备低分子量水溶性大豆多糖,得到了4种不同分子量的水溶性大豆多糖,其分子量分别为93.9、43.4、18.8、9.6ku,并结合超滤从水溶液大豆多糖原液分离出分子量为155、2.6ku的两种多糖。将6种多糖分别与Fe3+反应合成不同分子量的水溶性大豆多糖-Fe(Ⅲ)配合物[SSPS-Fe(Ⅲ)],在还原力、羟基自由基、脂质过氧化、亚硝酸盐自由基四种不同的体系下进行SSPS-Fe(Ⅲ)的体外抗氧化活性研究。结果表明,不同分子量SSPS-Fe(Ⅲ)均有抗氧化活性,其中分子量最大的SSPS-Fe(Ⅲ)的抗氧化活性较弱,而分子量为9.6ku的SSPS-Fe(Ⅲ)整体上具有较强的还原能力、清除羟基自由基和亚硝酸盐自由基和抑制脂质过氧化的能力,表明SSPS-Fe(Ⅲ)的抗氧化能力与其相对分子质量大小有关。

微波辅助H_(2)O_(2)/V_(C)降解制备低分子量浒苔多糖的研究

为制备抗氧化活性较强的低分子量多糖,以辽宁营口沿海地区的浒苔为原料,采用微波辅助H_(2)O_(2)/V_(C)降解法制备低分子量浒苔多糖,利用DEAE-52、Sephadex G-100进行层析分离,对比浒苔多糖降解前后的理化性质与抗氧化活性,通过红外光谱法对降解后的浒苔多糖进行结构表征,利用薄层层析、高效液相色谱对分离到的多糖LEPⅢa组分进行单糖组成分析。结果表明,利用微波辅助H_(2)O_(2)/V_(C)降解可在较短时间(15 min)降解得到低分子量的浒苔多糖,经层析分离后,得到3种低分子量浒苔多糖LEPⅠ、LEPⅡ、LEPⅢa,分子量Mw分别为(23.6±0.5)、(24.6±0.6)、(22.9±0.5)kDa。与未降解的浒苔多糖相比,微波辅助H_(2)O_(2)/V_(C)降解得到的低分子量多糖的分子量、粘度均显著降低(P<0.05);抗氧化活性显著增强(P<0.05)。降解产物的分子量均在30 kDa以下,粘度在2 mPa.s以下;8 mg/mL LEPⅢa的总抗氧化能力由降解前的(315.2±10.3)U/mL增加到(661.8±18.3)U/mL,铁离子还原能力由降解前的51.3%±1.0%增加到83.4%±2.2%。LEPⅢa的红外光谱结果表明其为一种硫酸多糖,硫酸基含量14.6%±0.5%;薄层层析结合高效液相色谱分析表明LEPⅢa是一种由葡萄糖、鼠李糖、糖醛酸等组成的含硫酸基团低分子量多糖,D-(+)-甘露糖、L-(+)-鼠李糖、D-葡糖醛酸、D-(+)-葡萄糖的摩尔比为0.97:4.43:3.13:24.8。本研究表明,利用微波辅助H_(2)O_(2)/V_(C)降解制备低分子量浒苔多糖,能够明显改善多糖的理化性质,显著提高其抗氧化能力,制备的多糖可以作为功能性成分用于抗氧化相关的功能食品和保健品的开发。

麦冬多糖相对分子质量测定方法的研究

目的对麦冬多糖相对分子质量测定的方法进行研究。方法采用高效凝胶渗透色谱联用蒸发光散射检测法(HPGPC-ELSD)、基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱法(MALDI-TOF-MS)和分子排阻色谱联用小角度激光光散射检测、黏度检测法(SEC-LALLS)对麦冬多糖的相对分子质量及其分布进行测定。结果 HPGPC-ELSD法测得麦冬多糖的相对重均分子质量为2 376 g/mol,分散度为1.23;MALDI-TOF-MS法测得麦冬多糖的糖残基单元为己糖,其相对重均分子质量为721 g/mol,分散度为1.49;SEC-LALLS法测得麦冬多糖的相对重均分子质量为3 962 g/moL,分散度为1.49,其流体力学半径为1.3 nm,在水相的构象介于球状和无规卷曲之间。结论 MALDI-TOF-MS法更适用于多糖单元结构等信息的获取;HPGPC-ELSD法是相对测定法,其相对分子质量测定结果与多糖的空间结构有关;SECLALLS法不仅可用于测定多糖的相对分子质量,而且能够提供其结构相关信息,因此是一种较为理想的测定方法。

降解前后异枝麒麟菜硫酸多糖对草酸钙晶体生长的调控作用

采用过氧化氢法降解产于印尼的海藻异枝麒麟菜硫酸多糖(ESPS).降解前ESPS的平均分子量为1410000,硫酸基(OSO23-)含量为16.0%(w);而降解后其分子量显著下降至4819,硫酸基含量则略微下降至15.2%.采用体外模拟方法研究了降解前后ESPS对草酸钙晶体生长的抑制作用.扫描电子显微镜(SEM)和X射线衍射(XRD)结果表明,降解后ESPS能使一水草酸钙(COM)晶体数量进一步减少,晶粒尺寸进一步减小.当降解ESPS浓度从0.006g·L-1分别增加到0.010和0.050g·L-1时,COM晶体平均尺寸由11.5"m×2.9"m分别减小到9.2"m×2.9"m和6.0"m×2.5"m,晶体数量由3357mm-2分别减少到2298和1532mm-2,COM的(101)面衍射峰强度I(101)与(010)面对应的(020)衍射峰强度I(020)之比(I(101)/I(020))由5.54分别增加到16.2和20.0.结果显示,具有小分子量的降解ESPS对草酸钙晶体成核与生长的抑制效果明显优于大分子量的未降解ESPS.

甘蔗渣生物降解制备可溶性糖的研究

以生物降解剂对甘蔗渣进行降解处理,制备低分子量可溶性糖,考察降解条件对水溶性、酸溶性和碱溶性低聚糖含量的影响,并采用硫酸-苯酚法测定总糖含量。结果表明,N源用量、水分含量、菌液用量及发酵时间均对低聚糖产量存在影响,在发酵后的甘蔗渣中,碱溶性低聚糖含量最多,可达2.96%;水溶性低聚糖含量最高,为1.21%;酸溶性低聚糖的含量相对偏少,最高可达0.42%。

胡芦巴胶降解工艺研究

目的优选胡芦巴胶的降解方法及工艺,获得质量稳定可控的低分子量多糖。方法以总糖和还原糖含量以及黏度为评价指标,比较酸水解、超声辅助、酶解等工艺,优选最佳条件。并依据紫外、红外及差示扫描热图谱对产物进行初步评价。结果不同降解工艺所得还原糖得率分别为酶解52.41%、超声辅助42.19%、酸解24.59%;以纤维素酶用量10 U·mg-1、50℃处理150 min时,降解效果最佳。重复实验表明该工艺稳定可控,紫外、红外及DSC图谱无明显差异,峰位基本不变。结论酶法降解胡芦巴制备低分子量多糖,方法简便、高效、易于控制。

低分子量姬松茸多糖抑制Lovo细胞与内皮细胞黏附的作用及机制

目的观察低分子量姬松茸多糖(LMPAB)对人结肠癌Lovo细胞与内皮细胞黏黏附能力的影响及机制。方法免疫荧光法检测Lovo细胞与人脐静脉内皮细胞(HUVECs)黏附,流式细胞术检测Lovo细胞表面唾液酸化Lewisx(sLeX)表达。实时定量PCR检测Lovo细胞FUTⅦmRNA表达。结果 LMPAB减少Lovo细胞与内皮细胞的黏附,下调Lovo细胞FUTⅦmRNA表达,减少了sLeX的合成。结论 LMPAB具有抑制肿瘤细胞与内皮细胞黏附的作用,其机制可能与下调FUTⅦmRNA表达,减少sLeX合成有关。

不同基源、产地对党参总多糖中低分子量果聚糖的影响

目的分析不同基源、产地对党参总多糖中低分子量果聚糖的影响。方法通过高效凝胶渗透色谱(HPGPC)和高效液相色谱(HPLC),对潞党参、纹党参、白条党参、板桥党参总多糖及其单糖组成进行分析。结果潞党参、纹党参、白条党参、板桥党参总多糖主要分布于4.41×10^5~5.92×10^6、1.59×10^3、3.78×10^3 Da,其中潞党参中1.59×10^3、3.78×10^3 Da果聚糖峰面积没有显著差异;纹党参、白条党参中1.59×10^3、3.78×10^3 Da果聚糖峰面积有显著性差异,且1.59×10^3 Da高于3.78×10^3 Da;板桥党参中1.59×10^3、3.78×10^3 Da果聚糖峰面积有显著性差异,且3.78×10^3 Da高于1.59×10^3 Da果聚糖面积。各品种党参总多糖的主要单糖组成均为果糖和葡萄糖,以果糖含有量最高。结论潞党参、纹党参、白条党参、板桥党参总多糖主要为低分子量果聚糖,并且其分布与产地有关,而与基源无关。

低分子量硫酸化多糖的体积排阻色谱法分离及其组成定量分析

建立了用于分离并定量测定低分子量硫酸化多糖中不同糖链数的各个组分分布比例的体积排阻色谱方法。系统考察了流动相的组成、离子强度和pH值、流速、柱温等因素对分离的影响。最佳分离条件:两支TSK-GELG2000 SWxl色谱柱(300 mm×7.8 mm)串联,流动相100 mmol/L Na2 HPO4-NaH2 PO4(pH 7.0),流速0.5 mL/min,柱温35℃,进样量5μL,样品质量浓度10 g/L。在最佳的分离条件下,可以将低分子量硫酸化多糖样品中不同糖链数的各个组分分离并对各个组分的分布进行了定量分析。用该方法对美国药典标准品(USP)、商品和实验室制备的低分子量硫酸化多糖糖链数分布进行了定量化比较,证明该方法可用于低分子量硫酸化多糖类药物的组成成分的质量控制。

色谱技术在肝素结构分析中的研究进展

肝素(heparin,Hp)是目前临床应用最为广泛的抗凝剂,是由重复二糖单元组成的多硫酸化酸性直链多糖。低分子量肝素(LMWHs)是以肝素为原料,经过化学或酶降解获得的相对分子质量相对较小的肝素衍生物,相对肝素,它们的出血副作用和免疫原性更小,皮下注射时生物利用度更高。肝素及低分子量肝素具有一系列结构特点,如相对分子质量偏大且有一定分布,多种糖残基同时存在,硫酸酯位置和数量呈现多样化,以及不同工艺产生的特殊残基的种类和含量不一等。该类药物结构的复杂性对分析方法提出了巨大的挑战,也限制了其质量控制提升、工艺优化、临床用药安全和新适应证拓展等。该文以色谱分析方法为中心,从结构分析的不同角度,包括单糖、二糖、寡糖、多糖的识别、组成分析和不同层次,系统地梳理和阐述近年来肝素类药物在色谱分析方法上的进展,并对这些方法的应用范畴、创新性、局限性等进行总结。该文将为肝素类药物的结构分析、质量控制提供较系统的方法学参考,为更多新方法开发提供思路,为更深入地研究肝素类药物结构、拓展其应用提供有力支撑。