鸡SIgA的纯化及兔抗鸡SIgA抗体的制备

采用改良硫酸铵盐析法从鸡胆汁中分离鸡分泌型免疫球蛋白A（SIgA）．Macro-prep High Q阴离子交换柱层析提纯，经二次过柱后获得的鸡SIgA浓度达22mg／mL。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测表明，重链分子质量为63～64ku，轻链为26～28ku，J链约16ku。用纯化的鸡SIgA免疫兔，所得的抗血清经双向琼脂扩散，证明兔抗鸡SIgA血清效价达1：128。

赛前强化训练对短跨项目运动员T淋巴细胞和唾液SIgA的影响

通过对广东省田径队参加“2 0 0 0年全国田径锦标赛”优秀短跨项目运动员 4周大强度训练和比赛的跟踪调查 ,观察大强度长时间训练和比赛对其机体免疫机能的影响。结果表明 :长时间大强度训练使T淋巴系统功能降低 ,整个训练期CD4+ /CD8+ 值低于正常值 ,呈非常显著性差异 (P <0 .0 1) ;CD4+ 百分含量显著下降 (P <0 .0 5 ) ,但CD8+ 百分含量变化不大。经过调整和比赛后 ,所有指标均有升高趋势 ,但没有统计学意义。整个训练和比赛中 ,分泌型免疫球蛋白SIgA呈现对抗原刺激后的增加 ,训练后有显著性差异 (P <0 .0 5 )。结果提示 :高水平田径短跨项目运动员赛前大强度长时间训练会导致机体T淋巴细胞免疫系统功能下降 ,但是粘膜免疫系统功能在外界抗原刺激下有所升高 ,且训练后SIgA的变化与CD4+ 及CD4+ /CD8+ 值显著相关。因此 。

不同运动方式对唾液sIgA的影响

目的:了解不同运动方式对唾液分泌型免疫球蛋白A(sIgA)的影响。方法:8名普通大学生进行95%最大摄氧量(VO2max)强度的功率自行车间歇运动和连续3天的30 min、75%VO2max强度持续运动,8名田径运动员进行3种急性运动(10 000 m跑、1节强化训练课和1次递增负荷力竭性跑台运动),观察各种运动前后的唾液sIgA变化情况。结果:95%VO2max强度间歇运动后即刻唾液sIgA分泌率降低,3天连续运动后即刻的唾液sIgA分泌率逐渐下降,运动员强化训练课后唾液sIgA浓度降低。结果提示,大强度运动会降低唾液sIgA水平,长期耐力训练对黏膜免疫系统有累积性抑制作用。

不同中医体质健康人群的唾液Cor及SIgA比较研究

目的:探讨不同体质健康人群中唾液Cor(salivary cortisol,SC)、分泌型免疫球蛋白A(secretory immunoglobulins A,SIgA)的含量分布及这两种生物指标间的关系。方法:纳入270例健康体检者。按照其体质特点分为9种体质,每组各30例,分别研究这9组人群中SC和SIgA的分布规律。结果:9组体质人群中各组的SC和SIgA含量分布均有一定区间范围,SC和SIgA呈正相关,r=0.65,P<0.05。结论:不同体质的健康人群中SC和SIgA分布有一定规律性,且SC和SIgA存在一定程度的相关,这两种指标具有作为体质评定和干预备选生物指标的潜能。

唾液SIgA、溶菌酶含量与牙周病关系的探讨

目的:探讨了牙周病患者唾液SIgA和溶菌酶含量的变化及临床意义。方法:应用放射免疫分析检测32例牙周病患者唾液SIgA含量、免疫扩散法检测溶菌酶含量,并与35名正常健康人作比较。结果:牙周病患者唾液SIgA和溶菌酶含量均非常显著地高于正常人组(P<0.01),经治疗1个月后与正常人组比较仍有显著性差异(P<0.05)。结论:检测牙周病患者唾液SIgA和溶菌酶含量的变化对临床观察预后有重要的临床价值。

鸡SIgA的提取鉴定及其抗体制备

实验采用饱和硫酸铵法从健康肉鸡胆囊收集的胆汁中粗提二聚体SIgA,继而透析粗提产物除盐,然后进行纤维素DEAE-52离子交换层析,使用紫外分光光度计测定收集液的蛋白浓度,对层析产物浓缩使其浓度≥2.0 mg/m l,最后使用SDS-PAGE进行鉴定,从电泳所得图像中可以看到清晰的两个条带,一个条带分子量在67～70 ku之间为重链,另一个条带在26～28 ku之间为轻链。进一步将纯化的鸡SIgA抗体免疫健康兔,制备得到兔抗鸡SIgA抗体。

结石性慢性胆系炎症患者胆汁sIgA的检测及意义

为观察结石性慢性胆系炎症患者手术前后胆汁。sIgA含量变化及意义，利用放射免疫法分别测定术中和术后14天胆总管胆汁sIgA含量。发现胆道术后残余结石患者胆汁中sIgA虽低于术前，但无显著性差异（P＞0．05），而无残余结石患者术后胆汁sIgA显著低于大前和有残余结石患者（P均＜0.01）。表明胆汁sIgA含量随局部炎症发生而增高．局部炎症减轻而降低。故胆汁sIgA的测定可作为胆道术后监测胆道炎症变化及有无残余结合的参考指标。

轮状病毒肠炎和鼠伤寒杆菌肠炎患儿粪便中SIgA含量测定

用放射免疫法(双抗体—PEG法)测定正常婴幼儿和轮状病毒肠炎及鼠伤菌肠炎各40例患儿粪便中SIgA的含量。结果表明轮状病毒肠炎及鼠伤寒杆菌肠炎之间粪便中SIgA含量无明显差异,而二者粪便中SIgA含量明显高于正常对照组。提示肠道SIgA在婴幼儿轮状病毒肠炎及鼠伤寒杆菌肠炎恢复中起重要作用。

鸡SIgA的纯化鉴定及免疫小鼠效果的观察

为了探索鸡分泌型免疫球蛋白A（SIgA）分离、纯化及鉴定方法,以新鲜的鸡胆汁为材料,采用硫酸铵盐析法从鸡胆汁中粗提纯鸡SIgA,应用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）鉴定和纯化SIgA重链,用纯化的鸡SIgA重链蛋白免疫Balb/C小鼠。结果表明,SIgA重链分子量为67-70kD,轻链为26-28kD。免疫Balb/C小鼠抗血清针对SIgA重链的间接ELISA效价可达1∶16000。为进一步研究SIgA生物学特性、单克隆抗体制备和黏膜免疫状况检测提供了技术支持。

鸡柔嫩艾美耳球虫EtMIC2和SO7蛋白的原核表达及SIgA抗体间接ELISA检测方法建立

【目的】建立检测鸡肠道黏膜柔嫩艾美耳球虫SIgA抗体的间接ELISA检测方法以期对鸡柔嫩艾美耳球虫特异性黏膜免疫水平进行评价。【方法】将鸡柔嫩艾美耳球虫EtMIC 2和SO 7基因克隆至pET-28a(+)原核表达载体,构建EtMIC2-SO7重组质粒。将重组质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达后,通过SDS-PAGE和Western blotting进行鉴定。采用镍柱亲和层析法对EtMIC2-SO7重组蛋白进行纯化,用Bradford法测定蛋白浓度。以纯化的重组蛋白作为包被抗原,通过方阵滴定法,确定ELISA检测抗原、待检黏膜的最佳工作浓度,通过单一变量法确定最佳待检黏膜孵育时间、封闭液种类、酶标二抗、显色液工作条件,参照ELISA抗体检测试剂盒阴阳性判定标准,以S/P≥0.4为阳性,S/P<0.4为阴性作为黏膜样品阴阳性判定标准,对ELISA检测方法的重复性、特异性、敏感性进行验证并与鸡柔嫩艾美耳球虫全蛋白包被ELISA板检测结果进行符合率比较。【结果】SDS-PAGE和Western blotting结果显示,获得大小约70 ku的EtMIC2-SO7重组蛋白,与预期结果相符。ELISA检测方法的最佳抗原包被浓度为2μg/mL,待检黏膜最适稀释度为1∶40,待检黏膜最适孵育时间为2 h,最适封闭液为5%脱脂奶粉,最适酶标二抗稀释度为1∶100000,最适反应时间为1 h,最适显色时间为15 min;批内、批间重复性试验变异系数均<10%;与新城疫病毒、禽流感病毒、传染性法氏囊病病毒特异性SIgA抗体无交叉反应性;随机选择2份阳性肠道黏膜样品进行敏感性试验,稀释浓度为1∶80时2份样品仍判定为阳性,说明该检测方法敏感性较好;将EtMIC2-SO7重组蛋白和鸡柔嫩艾美耳球虫全蛋白分别包被ELISA板,检测18份肠道黏膜样品,结果表明EtMIC2-SO7重组蛋白包被ELISA板与球虫全蛋白包被ELISA板符合率可达88.9%(16/18)。【结论】本研究采用原核表达系统成功表达并纯化EtMIC2-SO7重组蛋白,并将其作为ELISA包被抗原,成功建立重复性好、特异性强、敏感性高的鸡柔嫩艾美耳球虫SIgA抗体的间接ELISA检测方法,为球虫黏膜免疫疫苗评价提供了初步检测方法。

阴离子交换色谱法一步分离牛初乳中的sIgA

利用强碱3#树脂阴离子交换色谱法从牛初乳中分离获得分泌型免疫球蛋白A。考察了缓冲液pH和离子强度对所获免疫球蛋白A产品纯度的影响,获得从牛初乳中分离免疫球蛋白A的最优条件为pH7.0,离子强度为0.03mol/L的磷酸盐缓冲液,最终可获得纯度为91.24%的免疫球蛋白A,回收率达到47%。因此,利用以强碱3#树脂为基质的阴离子交换色谱分离牛初乳中的免疫球蛋白A具有很好的发展潜力。

高温环境下咖啡因对耐力大学生运动员运动中唾液sIgA、溶菌酶的影响

探讨高温环境下运动中,口服咖啡因对男大学生运动员运动中唾液分泌型免疫球蛋白A(s Ig A)和溶菌酶(lysozyme,LZM)的影响。采用实验研究方法,以13名男性耐力性项目大学生运动员为研究对象。每名研究对象在温度为33℃、相对湿度为65%的实验室完成两次实验(咖啡因运动实验和对照运动实验)。每次实验中,采集运动前60 min、运动前即刻、运动20 min、运动结束即刻的唾液样本,测定唾液s Ig A、LZM的浓度。实验结果显示,口服咖啡因对高温环境下耐力大学生运动员运动中唾液s Ig A无影响,但会降低唾液LZM水平,高温环境、中等强度运动使男耐力大学生运动员唾液s Ig A和LZM的水平升高。

血清IL-6,IL-8与宫颈sIgA联合检测对女性慢性盆腔炎的诊断价值研究

目的探究血清白介素(interleukin,IL)-6、IL-8与宫颈分泌型免疫球蛋白A(secretory immunoglobulin A,sIgA)联合检测对女性慢性盆腔炎的诊断价值。方法收取2014年5月—2017年12月在鄂州市中心医院经腹腔镜确诊为慢性盆腔炎的女性患者130例为病例组,与同期在该院行体检的健康女性150例为对照组,比较2组女性的血清IL-6、IL-8与宫颈sIgA水平,分析3者表达水平与慢性盆腔炎患者临床病例特征之间的关系。采用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic,ROC)分析血清IL-6、IL-8与宫颈sIgA对女性慢性盆腔炎的诊断价值,多元Logistic回归计算3者预测女性慢性盆腔炎发病的风险比(oddsratio,OR)及95%置信区间(confidence interval,CI)。结果与对照组比较,病例组女性的血清IL-6、IL-8与宫颈sIgA水平升高,差异比较具有统计学意义(t=3.967,P=0.003;t=4.013,P<0.001;t=2.986,P=0.002)。血清IL-6、IL-8在输卵管炎中增高最为显著,而宫颈sIgA在子宫体炎中增高最为显著。ROC结果表明,血清IL-6、IL-8与宫颈sIgA鉴别诊断女性慢性盆腔炎的灵敏度/特异性分别为84.9%/73.7%、77.5%/81.3%和38.9%/92.3%;诊断界值分别为:94.6pg/mL、88.6pg/mL和70.2μg/mL;联合3项指标的灵敏度为82.8%,特异度为93.6%。多元Logistic回归分析表明,高IL-6、IL-8、sIgA水平均是女性慢性盆腔炎发病的独立危险因素。结论联合血清IL-6,IL-8与宫颈sIgA3项指标可协助女性慢性盆腔炎的诊断,同时,3者对女性慢性盆腔炎发病风险的预测也具有潜在价值。

唾液SIgA、溶菌酶含量与慢性支气管炎关系的探讨

目的:探讨了慢性支气管炎患者唾液SIgA和溶菌酶含量的变化及临床意义。方法:应用放射免疫分析检测38例慢性支气管炎患者唾液SIgA含量,免疫扩散法测定溶菌酶含量,并与35名正常人作比较。结果:慢性支气管炎患者唾液SIgA和溶菌酶含量非常显著地高于正常人组(P<0.01),经2周治疗后仍有显著性差异(P<0.05)。结论:检测慢性支气管炎患者唾液SIgA和溶菌酶含量的变化对临床观察预后有重要的临床价值。

牙周炎龈沟液SIgA与β_2-m放免分析的临床意义

本文报道了32例成人牙周炎(AP)、13例快速进展性牙周炎(RPP)和6例青少年牙周炎(JP)的龈沟液(GCF)中SIgA与β_2-m放免分析结果,其检测值与正常对照组均显著增高。SIgA临床敏感性、特异性、阳性似然比、Kappa值、选择指数均优于β_2-m。两者联检,敏感性68.63％,特异性90％,阳性似然比6.863,K值0.558,选择指数0.618,联检临床价值增高。

分泌型免疫球蛋白A的研究进展

大部分感染都起源于黏膜表面,而黏膜免疫的主要抗体是分泌型免疫球蛋白A(SIgA),它能有效地阻断病原体的感染和侵入。SIgA是由1个IgA二聚体、1条J链和1个分泌片(SC)共价结合构成的异源十聚体。IgA和J链由活化B细胞产生,SC则由黏膜上皮细胞合成。SIgA分子具有极高的稳定性和极强的抗微生物活性。我们就SIgA合成的相关机制、IgA单体和SIgA的结构与功能,以及重组SIgA的研究进展简要综述。

舞厅环境对从业人员健康的影响

[目的 ]探讨舞厅环境对从业人员健康的影响。 [方法 ]以宾馆服务员 2 8人为对照 ,分别对地面和地下舞厅的场内工作人员 5 6人的某些神经行为功能、血压及唾液中的分泌型免疫球蛋白 A (SIg A)指标进行调查、测试 ,同时测定舞厅的环境质量。 [结果 ]舞厅与宾馆相比 ,CO及 CO2 浓度、噪声、湿度明显升高 ,而照度、温度较低。舞厅内的工作人员目标跟踪正确率下降 ,视觉运动反应时延长 ,收缩压上升 ,脉压差增大 ,唾液中 SIg A含量减低。 [结论 ]舞厅环境可导致从业人员神经行为功能、血压和免疫功能的损害。

鸡和猪分泌型免疫球蛋白A结构蛋白的比较

通过SephadexG 2 0 0凝胶过滤和DEAE纤维素柱 ,分别从胆汁和初乳中提纯鸡和猪的分泌型免疫球蛋白A (SIgA)。SDS PAGE结果显示 ,鸡SIgA的轻链分子量约为 2 6 0 0 0～ 2 80 0 0 ,与鸡IgG的轻链分子量相似 ,而重链分子量约为 670 0 0～ 70 0 0 0 ,比鸡IgG的分子量要大。猪的SIgA与猪IgG的轻链和重链的分子量均相同。轻链的分子量约为 2 6 0 0 0～ 2 80 0 0 ;重链的分子量约为 53 0 0 0～ 570 0 0。猪SIgA中J链的分子量为 1 6 0 0 0～ 1 70 0 0。本实验证明鸡SIgA轻链的分子量与猪的SIgA的轻链相似 。

SC结构、功能及其临床研究进展

分泌型免疫球蛋白A(SIgA)被认为是免疫防御中的第一道防线在黏膜免疫中发挥至关重要的作用,由2个单体IgA、1分子J链和1分子分泌成分(SC)组成.SC是多聚免疫球蛋白受体(pIgR)的胞外段部分,作为SIgA的重要组成部分,不仅在SIgA的转运、形成中发挥重要作用,而且可以保护SIgA的铰链区及增强其抗感染活性.因此关于SC的研究日益受到学者们的青睐,近年来有关SC的结构、功能及其在临床中的研究已经取得较大进展.

赛前强化训练对优秀田径运动员B淋巴细胞免疫功能的影响

通过对广东省田径队参加“2000年全国田径锦标赛”优秀短跨项目运动员四周大强度训练和比赛的跟踪调查,观察大强度长时间训练和比赛对其机体B淋巴细胞免疫系统功能的影响。结果显示:长时间大强度训练对高水平田径运动员免疫球蛋白IgA、IgG、IgM影响不大,但IgG始终低于正常水平,呈显著性差异(P<0.05);整个训练和比赛中,唾液分泌型免疫球蛋白(SIgA)呈现对抗原刺激后的增加,训练后与正常值比较有显著性差异(P<0.05),比赛后与正常值比较,有非常显著性差异(P<0.01)。结果提示:高水平田径短跨项目运动员赛前大强度长时间训练不会对血清免疫球蛋白含量产生太大影响,但唾液SIgA则会显著性升高,表明黏膜免疫系统功能良好,不存在“开窗现象”。以上结果可能与训练水平或良好的心理应激状态有关。