重组人TNFR-Fc基因水稻种子特异表达载体构建

重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白(TNFR-Fc)在治疗系统性自身免疫疾病中有很好的功效。目前TNFR-Fc主要通过动物细胞系生产,高昂的成本限制了其大规模应用。使用水稻种子作为生物反应器有望大幅度降低TNFR-Fc的生产成本,提供优质足量的目标产品。为使TNFR-Fc基因能够在水稻中高效表达,该研究拟构建经水稻偏好密码优化的TNFR-Fc基因的种子特异表达载体。通过对水稻和人全基因组密码子使用偏好性进行比较分析并按照水稻最优密码对TNFR-Fc氨基酸序列进行逐一优化,命名为Rf TNFRFc,通过全基因合成法制备该基因片段;同时采用PCR法扩增水稻种子特异表达启动子Glu-4,构建种子特异表达启动子驱动的Rf TNFR-Fc基因表达载体。结果表明:水稻与人多数氨基酸中密码子使用偏好性较为一致,但在L、S、P、R这4种氨基酸的密码子使用偏好性差异较大,优化时对这些密码子进行逐一替换,优化后30.8%的氨基酸密码子发生了变化;PCR扩增获得种子特异启动子,并连接至p CAMBIA1381载体,同时将全基因合成法制备的Rf TNFR-Fc基因连入该载体,PCR、双酶切验证及测序分析表明载体成功构建。该研究构建的Rf TNFR-Fc基因种子特异表达载体,为在水稻种子中大规模生产TNFR-Fc奠定了基础。

基于功能影像学探讨百会治疗失眠的中枢机制

百会为治疗失眠的效穴,临床使用频率高。功能影像学,广义上包括多种成像技术,狭义主要指功能性磁共振成像(fMRI),数据分析方法分为功能分离和功能整合两类,试验设计方案包括任务态(Tb-fMRI)与静息态(Rs-fMRI),静息态因操作简便且能直观反映针刺持续和累积效应而被广泛应用。多项fMRI研究表明,失眠患者在视觉区、感觉运动区、情绪相关脑区等存在局部功能异常,针刺百会单穴或组穴可引起特定脑区如顶叶、额叶、颞叶等的改变,从而改善睡眠。针刺单穴百会主要集中在Rs-fMRI局部一致性(ReHo)、比率低频振幅(fALFF)研究,而针刺百会组穴研究从Rs-fMRI局部一致性(ReHo)、度中心度(DC)、种子连接(FC),以及Tb-fMRI比率低频振幅(fALFF)等方面展开,研究发现不同研究方法和穴位组合下的脑区激活改变存在差异,且针刺百会组穴所调控脑区多于单穴针刺,体现了百会对失眠、认知和情绪的调节作用以及腧穴间的协同作用。然而,针刺百会引起的中枢信号改变复杂,功能影像作为评估失眠的中枢指标虽有潜力,但仍需更规范、深入的研究。