朝鲜白头翁的三萜皂苷成分研究

目的 研究朝鲜白头翁 [Pulsatillacernua(Thunb .)Bercht.etOpiz.]根茎的化学成分。方法 朝鲜白头翁根茎的乙醇提取物经大孔树脂、硅胶、ODS柱以及HPLC分离得到 6个化合物 ,通过波谱 (1H ,13CNMR ,FAB MS等 )分析和化学方法进行结构鉴定。结果 6个化合物分别被鉴定为 pulsatillasaponinA(1) ,常春藤皂苷元 3 O β D 吡喃葡糖 (1→ 3) α L 吡喃鼠李糖 (1→ 2 ) α L 吡喃阿拉伯糖苷 (2 ) ,pulsatillasaponinD(3) ,dipsacosideB(4 ) ,3 O α L 吡喃鼠李糖 (1→ 2 ) [β D 吡喃葡糖 (1→ 4) ] α L 吡喃阿拉伯糖常春藤皂苷元 2 8 O β D 吡喃葡糖酯苷 (5 )和胡萝卜苷 (6 )。结论 5为新化合物 ,命名为朝鲜白头翁丙苷 (cernuosideC)。2 ,4和 6为首次从朝鲜白头翁中分离获得。

朝鲜白头翁总皂苷提取工艺的优化

目的：通过单因素和正交试验优化朝鲜白头翁中总皂苷的超声波提取工艺。方法：以白头翁皂苷B4为对照品,采用分光光度法进行含量测定。结果：确定皂苷的最大吸收波长为470 nm,皂苷含量在0-0.040 mg/mL范围内与吸光度呈良好线性关系。最佳提取工艺为：乙醇浓度80%,超声时间40 min,料液比1∶20,超声功率80W,提取1次。其中乙醇浓度对总皂苷提取影响最大,此工艺条件下朝鲜白头翁中总皂苷含量为4.32%。结论：该方法提取效率高、稳定、准确、重现性好。

朝鲜白头翁种子后熟调控和育苗关键技术研究

目的：以朝鲜白头翁种子为供试材料,筛选并确定调控朝鲜白头翁种胚快速发育和种子萌发的主要因素及水平。方法：通过多因子交叉重复试验对影响朝鲜白头翁种胚发育和种子萌发的主要因素及其水平进行探讨。结果：朝鲜白头翁种胚发育成熟和种子萌发的方法为：种子用2.40 mg/L KT、2.80 mg/L GA3和0.30~0.70mg/L 2,4-D混合溶液浸泡24 h,将种子与河砂（1∶2）混合,进行63~70 d的变温处理,变温幅度和时间：白天温度为（23±2）℃,处理14 h,夜间温度为（10±2）℃,处理10 h,子叶胚发生率95.1%,种子发芽率92.3%。结论：解决了朝鲜白头翁种胚发育调控和育苗技术,该技术适合于朝鲜白头翁种苗的工厂化生产。

朝鲜白头翁小孢子发育时期与花器形态的相关性研究

为了寻找朝鲜白头翁小孢子发育时期的鉴定方法以及探讨小孢子发育时期与花器形态的相关性,采用常规石蜡切片法,对朝鲜白头翁小孢子发育时期的细胞学以及小孢子不同发育时期与花蕾大小的关系进行了研究。结果表明:朝鲜白头翁每个花药具4个花粉囊,小孢子母细胞减数分裂属同时型,小孢子在四分体中的排列属四面体型。成熟花粉粒属2-细胞型,并有3个萌发沟。花粉囊壁由4层细胞构成,即表皮(1层)、药室内壁(1层)、中层(1～2层)、绒毡层(1层)。绒毡层发育属腺质型(或分泌型),出现多核现象。朝鲜白头翁小孢子发育时期与花蕾的外部形态特征、花药颜色有一定的相关性。小孢子处于单核期时花蕾长度在1.10～1.20cm,花萼外侧颜色为紫红色,花药的颜色为黄色,花丝的长度为0.4～0.5cm。朝鲜白头翁同一花蕾不同花药小孢子的发育存在一定程度的渐续性。

几种处理对两种白头翁种子萌发的影响

以白头翁和兴安白头翁种子为试材,研究了植物生长激素、温度、光照和浸种等处理方法对2种白头翁种子萌发的影响。结果表明:5mg/L NAA和100mg/L GA3处理的白头翁种子萌发率显著高于对照(P<0.05);10和50mg/L GA3处理的兴安白头翁其发芽率和发芽势均显著高于对照(P<0.05)。2种白头翁种子的萌发率和发芽势均随着温度的升高而明显增高,适宜的发芽温度为25～30℃。延长光照和浸种时间处理可以明显促进2种白头翁种子的萌发率和发芽势。

朝鲜白头翁皂苷类化学成分研究

目的:研究朝鲜白头翁Pulsatilla cernua(Thunb.)Bercht.et Opiz.根中皂苷类化学成分。方法:采用硅胶柱色谱、D101大孔吸附树脂、循环制备高效液相色谱等方法进行分离纯化,并通过化学方法和波谱手段鉴定化合物的结构。结果:从朝鲜白头翁干燥根70%乙醇提取物中分离得到10个化合物,分别鉴定为常春藤皂苷元3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖苷(1),齐墩果酸3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖基-28-O-β-D-吡喃葡萄糖酯苷(2),齐墩果酸3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖苷(3),常春藤皂苷元3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→3)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖苷(4),齐墩果酸3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→3)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖苷(5),齐墩果酸3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖基-28-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖基(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖酯苷(6),常春藤皂苷元3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖基-28-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖基(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖酯苷(7),常春藤皂苷元3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-α-L-吡喃阿拉伯糖基-28-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖基(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖酯苷(8),常春藤皂苷元3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-[β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)]-α-L-吡喃阿拉伯糖基-28-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖酯苷(9),常春藤皂苷元3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→3)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖基-28-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖基(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖酯苷(10)。结论:化合物2为首次从该属植物中分离得到,化合物9为首次从该植物中分离得到。

鱼腥草叶片甲醇浸提液对瓜列当和向日葵列当种子萌发的诱导

列当属杂草对新疆地区的加工番茄、向日葵、西甜瓜等经济作物造成严重危害。为促进列当种子“自杀发芽”物质的化学合成,本研究探索了鱼腥草叶片甲醇浸提液对两种列当种子萌发的诱导效果。结果表明:鱼腥草对列当种子的萌发刺激作用表现为“低促高抑”效应。不同产地的鱼腥草对两种列当种子萌发的影响不同,广西产鱼腥草的甲醇提取物在浓度为3570.000μg·mL^(-1)时,瓜列当种子的发芽率最高(65.38%);四川产鱼腥草甲醇提取物则是在浓度为8.925μg·mL^(-1)时,瓜列当种子的发芽率最高(89.18%)。广西产鱼腥草在浓度为0.450μg·mL^(-1)时,向日葵列当种子的发芽率最高(85.39%);四川产鱼腥草在浓度为8.925μg·mL^(-1)时,向日葵列当种子的发芽率最高(77.57%)。综合分析表明鱼腥草可以作为诱捕植物诱导瓜列当和向日葵列当种子“自杀式萌发”。

氮、磷、钾配施对朝鲜白头翁产量、品质及养分吸收分配的影响

目的:研究氮、磷、钾及其配比对朝鲜白头翁生长、产量、总皂苷含量以及养分吸收的影响,以期为朝鲜白头翁规范化栽培技术的建立提供理论依据。方法:采用三因素二次饱和D-最优设计进行田间试验,定期取样,测定植株氮、磷、钾的含量、农艺性状、产量及其总皂苷含量。结果:朝鲜白头翁植株对氮的吸收最多,钾次之,磷最少,不同生育时期养分含量不同,同一生育时期不同器官养分含量也不相同,其地上部分养分含量总体高于地下部分,出苗到7月中旬植株对氮、磷、钾的吸收比例高于生长后期;施肥能显著提高朝鲜白头翁药材产量,氮、磷、钾元素对朝鲜白头翁药材产量影响依次为氮>钾>磷,氮、磷、钾元素对朝鲜白头翁总皂苷含量影响依次为氮>钾>磷。结论:朝鲜白头翁在大田栽培中应合理配比施肥,生长前期及时追施氮、磷、钾肥,并适当提高钾的比例。依据朝鲜白头翁总皂苷产量提出朝鲜白头翁优化施肥方案为氮(N)180 kg/hm2、磷(P2O5)79.74 kg/hm2、钾(K2O)225kg/hm2,氮、磷、钾的最佳配比为2.3∶1.0∶2.8。

朝鲜白头翁及其混淆品兴安白头翁的生药学研究

目的:研究毛茛科植物朝鲜白头翁及其混淆品兴安白头翁的植物来源、根及根茎的药材性状和生长过程中显微组织结构变化。方法:比较两味药材的基源、性状和横切面显微特征,找出两者区别点。结果和讨论:通过药材横切面显微特征研究,较好地反映了两者在生长发育过程中异同点,为朝鲜白头翁药材的鉴别和用药安全提供检验依据。

朝鲜白头翁的HPLC特征图谱研究

目的:建立朝鲜白头翁的特征图谱,为科学有效评价和控制其质量提供可靠依据。方法:采用高效液相色谱法,Thermo Hypersil BDS C_(18)色谱柱(4.6×250 mm,5μm),以乙腈-水作为流动相进行梯度洗脱,流速0.8 mL·min^(-1),柱温35℃,检测波长201 nm。结果:初步建立了朝鲜白头翁的特征图谱,标定了20个共有峰,并指认出2个。结论:采用HPLC法建立朝鲜白头翁的特征图谱,操作简单,选择性高,分离效果好,可用于朝鲜白头翁及其混淆品的鉴别和质量控制。

朝鲜白头翁RAPD反应体系的优化

采用改进的CTAB法提取朝鲜白头翁的基因组总DNA,建立朝鲜白头翁RAPD分析的PCR反应体系,成功进行RAPD扩增.筛选出的最佳PCR反应体系为:25μL反应体系中包括模板DNA 20ng,dNTP 200μmol/L,引物0.4μmol/L,Mg2+1.5 mmol/L,Taq酶1 U,10×Buffer 2.5μL,其余部分为无菌重蒸馏水.

HPLC测定朝鲜白头翁中常春藤皂苷C的含量

目的:建立高效液相色谱法测定朝鲜白头翁中专属性成分常春藤皂苷C的定量分析方法。方法:采用Thermo Hypersil BDS C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-水(28∶72)作为流动相进行洗脱,流速:0.8 m L·min^(-1),柱温:35℃,检测波长:201 nm。结果:常春藤皂苷C在0.220~2.203μg(r=0.999 9)线性关系良好,回收率为97.25%。结论:该方法专属性强,结果准确可靠,重现性好,可用于朝鲜白头翁的质量控制。

基于DNA条形码的向日葵田弯管列当种群遗传多样性研究

弯管列当是危害我国向日葵最严重的寄生杂草。为了明确我国向日葵田弯管列当种群的遗传多样性,本试验利用rbcL、matK、ITS2条形码序列对采自我国向日葵主产区的58份弯管列当样品进行PCR扩增及测序,采用Vector NTI软件对测序结果进行剪切比对,利用MEGA 6.0软件计算种内遗传距离并构建系统发育树。利用扫描电镜观察其种子的显微形态特征。结果表明,3个DNA条形码序列中仅ITS2片段扩增测序结果理想并表现出较好的聚类结果。各样品ITS2序列剪切比对后长度为453 bp,种内遗传距离为0.002~0.007,通过比较各样品ITS2序列的碱基组成和差异位点,能将不同弯管列当种群区分开。ITS2聚类结果表明58份弯管列当样品聚为3类,分别为Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型。形态分类结果表明,不同类型弯管列当在植株形态、种子形状及微观形态结构等方面存在差别。由于不同弯管列当种群的生境、寄主(向日葵栽培品种)不同,其种群遗传进化差异显著。基于ITS2条形码和扫描电镜形态学观察相结合的方法可用于弯管列当种群遗传多样性研究。

白头翁种子休眠机制及破眠技术研究

通过研究白头翁种子吸水特性、种皮透性、种胚成熟度、种子萌发抑制物以及种子破眠方法等,分析白头翁种子休眠机制,确定种子休眠类型,寻找有效打破白头翁种子休眠的方法。结果表明,白头翁种子浸泡10 h左右吸水饱和;不同浓度的过氧化氢处理种子,同一时间下,种子百粒重差异不显著;白头翁种子种皮透性较好,不会阻止种子吸收水分;种子成熟时胚多处于球形胚、心形胚阶段,发育不完全;不同浓度的种子浸提液对白菜种子发芽有抑制作用,白头翁种子含有萌发抑制物;150 mg/L GA_(3)能够促进白头翁种子萌发,发芽率、发芽指数较高;暖层积+较低温暖层积的处理方法可以缩短种子萌发时间,种子萌发相对较集中,整个萌发周期缩短。综合分析表明,白头翁种子成熟时胚发育不完全,萌发抑制物是导致其休眠的主要原因;GA_(3)可以促进白头翁种子萌发,变温层积可以促进种子萌发;初步判断白头翁种子休眠类型为中度简单形态生理休眠。

朝鲜白头翁抗炎有效部位化学成分研究

目的 筛选朝鲜白头翁Pulsatilla cernua的抗炎有效部位并研究其化学成分。方法 将朝鲜白头翁干燥根以70%乙醇回流提取，提取物经大孔吸附树脂柱色谱洗脱，依次得到水及30%、50%、95%乙醇洗脱组分，通过二甲苯致小鼠耳廓肿胀实验以确定其抗炎有效部位；采用各种柱色谱分离纯化抗炎有效部位中的化合物，根据理化特征并结合波谱学数据分析鉴定化合物的结构。结果 朝鲜白头翁根经大孔吸附树脂柱色谱，50%乙醇洗脱组分具有较强的抗炎活性，对其进行系统的化学成分研究，共分离得到12个化合物，分别鉴定为 （＋）-8-羟基松脂素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（1）、3, 4：3′, 4′-bis （methylenedioxy）- 9′-hydroxyl-lignane-9-methyl-O-β-D-glucopyranoside（2）、prinsepiol-4-O-β-D-glucopyranoside（3）、（＋）-环合橄榄树脂素-6-O-β-D-葡萄吡喃糖苷（4）、6-O-（E）-feruloyl-β-glucopyranoside（5）、6-O-（E）-feruloyl-α-glucopyranoside（6）、齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖-（1→2）-β-D-吡喃葡萄糖-（1→3）-β-D-吡喃葡萄糖（7）、常春藤苷基-3-O-β-D-吡喃葡萄糖-（1→2）-β-D-吡喃葡萄糖- （1→3）-β-D-吡喃葡萄糖-（1→3）-β-D-吡喃葡萄糖（8）和常春藤苷基-3-O-β-D-吡喃葡萄糖-（1→2）-β-D-吡喃葡萄糖-（1→3）-β-D-吡喃葡萄糖（9）、齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖-（1→2）-α-L-吡喃阿拉伯糖苷（10）、刺囊酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖-（1→2）-α-L-吡喃阿拉伯糖苷（11）和羽扇豆醇（12）。结论 朝鲜白头翁50%乙醇洗脱组分为其抗炎有效部位，该部位中得到的化合物2～4、6、8和9为首次从白头翁属植物中分离得到。

土壤中寄生性杂草弯管列当种子检测体系的建立及应用

弯管列当是一种根寄生性杂草,其种子微小,在土壤中极难检测。为了建立土壤中弯管列当种子定量检测体系,本研究扩增了弯管列当的ITS基因,以含ITS基因的阳性质粒为参考构建了标准曲线,并对该标准曲线进行验证。结果表明该方法具有高效、灵敏的特点,为弯管列当的检测检疫提供高效方法。同时我们从不同地块采集了土壤,通过该方法检测了土壤中弯管列当的种子数量,为弯管列当的发生预测预报提供了依据。

朝鲜白头翁非皂苷类化学成分研究

目的对朝鲜白头翁Pulsatilla cernua根中非皂苷类成分进行研究。方法采用开放硅胶柱色谱、凝胶柱色谱、循环制备高效液相色谱等进行分离纯化,通过核磁共振、质谱等波谱手段对化合物进行结构鉴定。结果从朝鲜白头翁干燥根75%乙醇提取物中分离得到15个化合物,分别鉴定为5-羟基-2,2-二甲基-苯并二氢吡喃-6-醛(1)、白头翁醌(2)、橙黄胡椒酰胺乙酸酯(3)、豆甾醇(4)、棕榈酸(5)、橙黄胡椒酰胺(6)、松脂素(7)、4″-甲氧基罗汉松脂素(8)、新海胆灵A(9)、(2S,3S,4R,8E)-2-[(2′R)-2′-羟基十六烷酸酰胺]-8-十八烯-1,3,4-三醇(10)、5R-5-羟甲基-2(3H)-呋喃酮(11)、咖啡酸(12)、6-去羟基迷迭香酸甲酯(13)、常春藤酮酸(14)、5-羟基-6,8-二甲氧基香豆素(15)。结论化合物1为首次分离得到的天然产物,化合物3、6、8～10、13、15为首次从本属植物中分离得到,化合物7为首次从该植物中分离得到。

Triterpenoid Saponins from Pulsatilla cernua （Thunb.） Bercht. et Opiz.

To investigate saponins from the roots of Pulsatilla cernua （Thunb.） Bercht. et Opiz., two new compounds together with five known trlterpenold saponins were isolated. The structures of the two new trlterpenoid saponins, named cernuasides A and B, were elucidated as 3-O-[β-D-xylopyranosyl（1-）2）]-[α-L-rhamnopyranosyl（1-）4）]-α-L- arablnopyranosyl hederagenin 28-O-β-D-glucopyranosyl ester （compound 1） and 3-O-[α-L-arabinopyranosyl（1→）3）]- [α-L-rhamnopyranosyl （1→）2）]-α-L-arabinopyranosyl hederagenin 28-O-β-D-glucopyranosyl ester （compound 2） by 1D, 2D-NMR techniques, ESIMS analysis, as well as chemical methods.