A new dihydrobenzofuran lignanoside from Selaginella moellendorffii Hieron

新 lignanoside，(7R,8S )-7,8-dihydro-7-(4-hydroxy-3,5-dimethoxyphenyl)-1 ′ -formyl-3 ′ -methoxyl-8-hydroxymethylbenzofuran-4-O- β -d-glucopyranoside (moellenoside A ) ，从 Selaginella moellendorffii 神庙被孤立。它的结构被分光镜的证据决定。

基于网络药理学和分子对接技术及实验验证探讨江南卷柏治疗喉癌的分子机制

目的探讨江南卷柏治疗喉癌的分子机制。方法根据文献报道获取江南卷柏化学成分,SwissADME数据库筛选活性成分,PharmMapper数据库筛选作用靶点。检索OMIM等数据库收集喉癌相关靶点,Venny 2.1.0在线平台将二者取交集,STRNG平台进行蛋白相互作用分析。通过DAVID数据库进行GO和KEGG富集分析,使用Cytoscape 3.8.0软件构建可视化网络。通过SYBYL-X 2.0软件进行分子对接验证。利用MTT法、Hoechst 33258染色法、Western blot进行验证。结果在分子水平上,筛选出江南卷柏活性成分110个及药物靶点82个,喉癌相关靶点1642个,交集靶点34个。GO分析得到135个条目,KEGG分析共得到88条通路。分子对接结果显示,2″,3″-二氢金连木黄酮等11个关键活性成分和MAPK1等4个核心靶蛋白有95.5%有较好的对接活性。在细胞水平上,通过MTT法细胞活力测定筛选出SM-BFRE对喉癌细胞增殖的抑制作用最强,进一步通过Hoechst 33258染色表明SM-BFRE处理后的Hep-2细胞活力下降与细胞凋亡有关,最后通过Western blot验证SM-BFRE通过抑制PI3K/Akt/NF-κB/Cox-2通路来诱导喉癌细胞发生凋亡。结论充分体现了江南卷柏治疗喉癌多成分、多靶点、多通路协同作用的特点,为深入阐明江南卷柏治疗喉癌的作用机制提供理论参考。

石上柏外泌体样纳米囊泡对肝癌细胞增殖、形态、迁移、侵袭、凋亡的影响

目的:探讨石上柏外泌体样纳米囊泡对肝癌细胞的影响。方法:采取改良超高速离心法与蔗糖密度梯度离心法提取并纯化石上柏外泌体样纳米囊泡,应用透射电镜与纳米颗粒跟踪分析技术(NTA)进行鉴定。采用绿色荧光探针(DIO)标记石上柏外泌体样纳米囊泡并观察其被细胞摄取的情况。采用CCK-8法检测不同浓度的石上柏外泌体样纳米囊泡对肝癌细胞活力的影响,并计算对HepG2细胞的半数抑制浓度(IC50)值。观察石上柏外泌体样纳米囊泡对不同肝癌细胞形态变化的影响。采用克隆集落实验、划痕迁移实验、Transwell侵袭实验、流式细胞术探究石上柏外泌体样纳米囊泡对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响。结果:经证实提取物为外泌体样纳米囊泡,石上柏外泌体样纳米囊泡能明显抑制肝癌细胞活力,抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡(P<0.05)。结论:石上柏外泌体样纳米囊泡对肝癌细胞有一定抑制性,且可能与顺铂协同发挥抑制和促凋亡作用。

石上柏化学成分研究

目的研究石上柏Selaginella doederleinii Hieron.的化学成分。方法石上柏80%乙醇提取物采用大孔树脂、硅胶、Sephadex LH-20、半制备HPLC进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构。结果从中分离得到18个化合物,分别鉴定为对羟基苯甲酸(1)、间羟基苯甲酸(2)、3-(3-羟基-苯基)-丙酸甲酯(3)、丁香脂素(4)、肉桂酸(5)、邻苯二酚(6)、detetrahydroconidendrin(7)、5,7-二羟基色原酮(8)、indole-3-carbaldehyde(9)、对羟基苯甲醛(10)、N-benzoyl-L-phenylalaninol(11)、unciflavone D(12)、阿魏酸(13)、loddigesiinol D(14)、丁香醛(15)、对甲氧基苯甲酸(16)、unciflavone E(17)、芹菜素(18)。结论化合物1~3、5~11、13~16为首次从该植物中分离得到。

深绿卷柏的显微鉴别和高效液相色谱特征图谱研究

目的研究深绿卷柏的显微鉴别特征,并建立其HPLC特征图谱。方法采用茎横切片法和叶表面制片方法研究深绿卷柏的显微特征。色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18 Narraw-Bore(2.1 mm×150 mm,5μm),以乙腈-0.1%磷酸水为流动相进行梯度洗脱,流速为0.25 mL·min^(-1),检测波长为330 nm,柱温为30℃,记录15批深绿卷柏的色谱图,计算相似度,确认10个共有峰为特征峰,以穗花杉双黄酮色谱峰为参照,计算相对保留时间,建立特征图谱,对部分特征峰进行指认,且与3种混淆品特征图谱进行比较。用SPSS软件对深绿卷柏进行聚类分析。结果深绿卷柏的茎、叶显微特征明显。15批深绿卷柏样品的相似度为0.765~0.964,特征峰稳定,并且可以与混淆品中华卷柏、江南卷柏、卷柏相区别。指认了4种双黄酮类成分,分别为穗花杉双黄酮、罗波斯塔双黄酮、橡胶树双黄酮、穗花杉双黄酮-7,4',7'',4'''-四甲醚。聚类分析将深绿卷柏分为两类,与产地相关。结论所建立的方法简便、实用,可为深绿卷柏的鉴别提供依据。

深绿卷柏总黄酮的提取及其对痴呆小鼠行为的影响

目的:研究深绿卷柏总黄酮(SLJB⁃HT)的提取及其对痴呆小鼠行为的影响。方法:通过溶剂回流、大孔树脂柱色谱等现代提取分离技术,制备了深绿卷柏总黄酮部位,经改良的紫外分光光度法测定总黄酮的含量。构建D⁃半乳糖(D⁃gal)和氯化铝(AlCl_(3))诱导痴呆小鼠模型,将8周龄昆明雄性小鼠分为对照组(control)、痴呆模型组(D⁃gal,120 mg/kg,i.p+AlCl_(3),10 mg/kg,i.g,D⁃gal+Al)和处理组(SLJB⁃HT,80 mg/kg,i.g+D⁃gal+AlCl_(3))。模型组和处理组小鼠腹腔注射D⁃半乳糖(120 mg/kg),AlCl_(3)(10 mg/kg)灌胃,正常对照组腹腔注射生理盐水,双蒸水灌胃,每天一次。从第4周开始处理组小鼠每天SLJB⁃HT混悬液(80 mg/kg)灌胃,其余两组双蒸水灌胃,每天一次,连续4周。末次给药后利用旷场实验检测动物焦虑样行为,新物体识别和Y迷宫实验检测其识别记忆以及空间记忆能力。结果:(1)深绿卷柏总黄酮中的黄酮含量为43.3%(433 mg/g)。(2)D⁃gal和AlCl_(3)联合给药(D⁃gal+Al)可以诱导痴呆小鼠模型。统计分析结果显示:与对照组相比,模型组小鼠在旷场中间区的活动减少,而处理组(SLJB⁃HT)小鼠在旷场中间区的活动则明显多于痴呆小鼠,且处理组小鼠在旷场中间区移动距离的百分比明显高于模型组小鼠(P<0.05),表明处理组小鼠的焦虑程度较低。(3)与对照组和处理组相比,模型组小鼠与旧物体的互动更多。小鼠在新奇臂中的时间百分比(%),模型组的新异臂探索时间小于对照组(P<0.05),但与处理组相比差异不显著。对照组与处理组的交替正确率均高于模型组。与模型组相比,处理组的新物体识别指数明显升高,探索行为正确率也明显增加(P<0.01)。结论:SLJB⁃HT可以减轻痴呆小鼠模型脑的记忆和认知缺陷,并降低焦虑水平。

江南卷柏与混淆品旱生卷柏和兖州卷柏的鉴别研究

目的:研究江南卷柏药材与混淆品旱生卷柏、兖州卷柏的性状与HPLC特征图谱的区别,为江南卷柏和近缘种的鉴定寻找解决方案。方法:观察比较江南卷柏与混淆品的性状特征。采用HPLC法,利用相似度软件计算其HPLC谱图的相似度,选择具有鉴别意义的指纹区,以穗花杉双黄酮色谱峰为参照,计算色谱峰相对保留时间,建立特征图谱,采用HPLC-DAD-ESI-MS/MS指认江南卷柏特征图谱的化学成分,并与其近缘种图谱进行比较。结果:江南卷柏、旱生卷柏、兖州卷柏具有其专属的性状特征。HPLC特征图谱方法学考察良好,10批江南卷柏样品的相似度为0.871~0.985,具有稳定的共有峰。江南卷柏特征图谱中13种黄酮类化学成分得到指认,江南卷柏特征图谱与其分类关系最近的兖州卷柏、旱生卷柏的特征图谱有明显区别。罗布斯塔双黄酮、罗布斯塔双黄酮-4′-甲醚为首次从旱生卷柏中发现。结论:该方法简便,可靠,实用性强,能准确地鉴别江南卷柏以及近缘混淆品,为江南卷柏的鉴定提供了科学依据。

鱼藤、枫桦和石上柏的细胞毒及抗氧化活性初步研究

对中草药鱼藤、枫桦和石上柏的细胞毒及抗氧化活性进行了初步研究。用人乳腺癌细胞MCF-7、人肺癌细胞A549和大鼠嗜铬瘤细胞PC12检测了鱼藤、枫桦和石上柏提取物的抗细胞毒作用;并用1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl(DPPH)检测了提取物的抗氧化活性。结果发现,鱼藤、枫桦和石上柏的甲醇提取物均有细胞毒活性,其中鱼藤甲醇提取物具有很强的细胞毒活性;枫桦甲醇提取物有较强的清除自由基和抗氧化活性。鱼藤植物值得进行抗肿瘤药物应用研究。

岩柏草总黄酮抗大鼠肝纤维化的实验研究

目的:探讨岩柏草总黄酮对实验性肝纤维化大鼠的保护作用。方法:采用50%CCl4皮下注射8周,在造模同时分别灌胃15、30、60 mg/kg剂量岩柏草总黄酮混悬液,并以水飞蓟宾为实验对照。8周后处死大鼠,对大鼠肝脏纤维化评分,并检测血清和肝组织各指标。结果:CCl4造模结束后,大鼠肝组织病理结果显示其肝纤维化处于III-IV期;与模型组比较,岩柏草总黄酮能显著降低大鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和肝组织中丙二醛(MDA)水平,明显升高肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)水平,显著改善大鼠肝纤维化的病理形态。结论:岩柏草总黄酮对CCl4诱导的大鼠肝纤维化有较好的保护作用。

石上柏的化学成分研究

目的:研究石上柏的化学成分。方法:通过硅胶柱层析、Sephadex LH-20色谱等方法分离,经过理化常数测定及UV、IR、~1HNMR、^(13)CNMR、El-MS等波谱技术分析鉴定化合物结构。结果:分离得到3个双黄酮类化合物,2个甾醇类化合物和5个有机酸类化合物,分别鉴定为硬脂酸(I)、棕榈酸(Ⅱ)、豆甾醇(Ⅲ)、谷甾醇(IV)、扁柏双黄酮(V)、穗花杉双黄酮(Ⅵ)、7,4′-二甲氧基穗花杉双黄酮(VII)、莽草酸(VIII)、丁香酸(Ⅸ)、咖啡酸(Ⅹ)。结论:化合物Ⅸ、Ⅹ是首次从该植物中分离得到。

大孔树脂制备岩柏草总黄酮及其含量测定

目的:探索D-101大孔树脂分离纯化岩柏草总黄酮的最优工艺,并对有效成分穗花杉双黄酮进行含量测定。方法:紫外分光光度法测定总黄酮浓度,以黄酮收率、纯度等为指标,上样质量浓度、吸附流速和洗脱剂乙醇体积分数为影响因素,确定大孔树脂分离纯化岩柏草总黄酮工艺,并用高效液相色谱法测定总黄酮中穗花杉双黄酮。结果:大孔树脂对岩柏草总黄酮有较好的分离效果,其最优工艺条件为上样质量浓度8.5mg/mL,吸附流速为2mL/min,乙醇体积分数为70%,总黄酮得率为0.89%。流动相:乙腈-0.5%冰醋酸溶液,梯度洗脱;检测波长:338nm;流速:1mL/min,用HPLC法测得穗花杉双黄酮含量为56%。结论:用D-101大孔树脂分离纯化岩柏草总黄酮简单可行,精制效果好。用上述色谱条件可用于穗花杉双黄酮的质量控制。

江南卷柏炒制品HPLC指纹图谱的研究

目的建立江南卷柏炒制品的HPLC指纹图谱鉴别方法。方法利用RP-HPLC法,采用Zorbax C18(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱,流动相:0.5%醋酸∶乙腈,梯度洗脱。流速:1mL/min,检测波长为260nm、338nm。结果有12个特征峰共同构成江南卷柏炒制品的HPLC指纹图谱共有模式。结论该方法简便、准确、重复性好,可用于江南卷柏炒制品的质量控制。

基于网络药理学与分子对接技术探讨石上柏在治疗癌症中的作用机制

目的采用网络药理学和分子对接技术分析方法,建立石上柏治疗癌症的“化合物-靶标-疾病-通路”作用网络,探索石上柏抗肿瘤作用机制。方法通过中药系统药理学分析平台TCMSP数据库收集石上柏的所有活性成分;根据类药性(DL)及口服生物利用度(OB)相关条件筛选,获得活性成分;通过PubChem和swisstarget数据库寻找经筛选后活性成分的预测靶点,在疾病靶点数据库DisGeNET和Genecards、数据交集数据库Draw Venn Diagram搜索共同靶基因;通过String网络平台与Cytoscape软件结合,绘制蛋白相互作用网络,归纳总结石上柏的主要潜在靶点;通过KEGG通路进行富集和生物学分析、采用分子对接软件DISCOVERY STUDIO对潜在的作用靶点(靶点数目最多的活性成分和蛋白相互作用中自由度最大的蛋白质)进行验证。结果石上柏预测靶点与癌症靶点的交叉靶点共有78个,主要活性成分可能为芹菜素、(6-[5-(5,7-二羟基-4-酮-色烯-2-基)-2-甲氧基-苯基]-5,7-二羟基-2-(4-羟基苯基)色酮)和谷甾醇,核心靶点为血管内皮生长因子A(VEGFA)、蛋白激酶1(AKT1)、表皮生长因子受体(EGFR)、雌激素受体1(ESR1)、Src蛋白(SRC)、前列腺素内过氧化物合酶2(PTGS2)等;经通路分析发现共涉及通路42条,其中19条通路与癌症相关;分子对接显示石上柏中(6-[5-(5,7-二羟基-4-酮-色烯-2-基)-2-甲氧基-苯基]-5,7-二羟基-2-(4-羟基苯基)色酮)、芹菜素能与AKT1、VEFGA稳定结合,并分别通过HIS A56、GLY A24、LYS A41,GLN E112、GLN E39、GLN F39;LYS B43、GLN A39、GLU B166,GLU A60、LYS A41和PHE A23等氨基酸残基进行相互作用。结论该研究揭示了石上柏治疗癌症是基于潜在的多成分、多靶点、多通路的相互协作作用机制。

石上柏中双黄酮对DPPH自由基的清除作用研究

研究石上柏中双黄酮类化合物的抗氧化活性。采用乙醇回流提取,聚酰胺柱色谱和葡聚糖凝胶柱色谱纯化得到双黄酮类混合物结晶,利用液质联用法鉴定组成。采用DPPH自由基清除法测试其抗氧化活性,以抗坏血酸作为阳性对照。获得的石上柏双黄酮类混合物结晶由穗花杉双黄酮,罗波斯塔双黄酮,7-去甲基银杏双黄酮,罗波斯塔-4'-甲醚,罗汉松双黄酮A组成,在质量浓度52.3μg/mL时,总双黄酮对DPPH自由基的清除率为8.0%,而抗坏血酸为95.5%。石上柏中双黄酮类对DPPH自由基有一定的清除作用,相对于抗坏血酸较弱。

江南卷柏质量标准研究

目的:对江南卷柏药材进行生药鉴定研究,以制定其药材的质量标准。方法:观察江南卷柏药材的性状和显微鉴别特征;以穗花杉双黄酮为对照品进行TLC色谱研究;采用HPLC法建立江南卷柏药材的含量测定方法。结果:TLC法采用硅胶GF254板,以甲苯-甲酸乙酯-甲酸(5∶4∶0.5)为展开剂,FeCl3乙醇溶液为显色剂,可出现4个清晰的斑点;HPLC法以穗花杉双黄酮为对照品,以乙腈-水(含3%四氢呋喃和3%三氟醋酸)为流动相,检测波长330 nm,经对3批药材测定,药材中穗花杉双黄酮含量不少于0.4%。结论:江南卷柏药材的显微、TLC鉴别和穗花杉双黄酮的含量测定等方法准确可靠,可有效控制江南卷柏药材的质量。

马来西亚卷柏属植物新资料

该文报道了马来西亚卷柏属2个新记录种——布朗卷柏(Selaginella braunii)、泰国卷柏(S.siamensis)。凭证标本均馆藏于新加坡植物园标本馆。

江南卷柏及同属植物的HPLC指纹图谱鉴别及穗花杉双黄酮测定研究

目的建立江南卷柏及同属植物的HPLC指纹图谱并同步进行穗花杉双黄酮的含量测定。方法色谱柱:ZORBAXSB-C18(4.6mm×250mm,5μm);流动相:乙腈(A)-0.5%冰醋酸水溶液(B)梯度洗脱;检测波长:270nm;流速:1.0mL·min-1;穗花杉双黄酮含量测定与指纹图谱同步进行。结果以穗花杉双黄酮为主的18个特征峰共同构成江南卷柏的HPLC特征指纹图谱概貌;穗花杉双黄酮含量为0.8%～1%。结论13批江南卷柏具有高度的相似性,相似度大于0.98。5种卷柏属植物全草的色谱与江南卷柏的指纹图谱接近,结合主成分分析可与江南卷柏归为一类,推测有类似的生理活性。另3种(黑顶卷柏、薄叶卷柏、翠云草)指纹图谱有明显差异,不宜与江南卷柏混用。

不同产地石上柏抗氧化和抗肿瘤活性比较

目的:比较不同产地的石上柏抗氧化和抗肿瘤活性的差异。方法:将采集于广西、贵州、重庆和四川的十批石上柏样品用乙醇提取后再以石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取。采用DHHP自由基清除、ABTS自由基清除和FRAP法测定三种萃取物的抗氧化活性;以肺癌A549和肝癌SMMC-7721细胞的增殖活性测定三种萃取物的抗肿瘤活性。结果:10批样品中,贵州产地的石上柏的抗氧化活性最高,广西产地的石上柏抗肿瘤活性最高;乙酸乙酯萃取物的2种生物活性均高于其他2种萃取物(P<0.05)。结论:石上柏的乙酸乙酯萃取物具有良好的抗氧化和抗肿瘤活性,不同产地的石上柏生物活性有一定差异。

A new norlignan lignanoside from Selaginella moellendorffii Hieron

This study reports an investigation into the chemical constituents of the whole plant of Selaginella moellendorffii Hieron.Ten compounds,isolated and purified by column chromatography,were identified on the basis of spectral analysis and their physicochemical properties to be:(8R)-3,5-dimethoxy-4-hydroxyphenylpropylalcohol-8-(1-acetyl-3-methoxy-4-hydroxyphenyl)-9-O-b-D-glucopyranoside(moellenoside B)(1),amentoflavone(2),hinokiflavone(3),apigenin-7-O-bneohesperidoside(4),apigenin-8-C-b-D-glucopyranoside(5),adenosine(6),uridine(7),2,3,4,9-tetrahydro-1H-pyrido[3,4-b]indole-3-carboxylic acid(8),vanillic acid(9),and lariciresinol(10).Compound 1 is a new norlignan lignanoside and compounds 4–10 were isolated from this plant for the first time.

岩柏草总黄酮对大鼠肝损伤保护作用的研究

目的:探讨卷柏对实验性肝损伤大鼠保护作用机理。方法:采用四氯化碳(CCl4)腹腔注射导致大鼠急性肝损伤的动物模型,用岩柏草总黄酮混悬液灌胃给药,并以水飞蓟宾葡甲胺组为实验对照。结果:岩柏草总黄酮能显著地降低CCl4所致大鼠血清中ALT、AST、NO、PGE2和肝组织中MDA的含量;并可使CCl4所致大鼠肝组织中降低的SOD活性升高,改善肝脏组织的病理损伤。结论:岩柏草对CCl4所致大鼠肝损伤具有保护作用,其作用机理可能与降酶、抗脂质过氧化反应、清除自由基、抑制NO过量成生,降低PGE2含量等有关。