超声处理对菜籽蛋白酶解效果的影响

以双低菜籽饼粕蛋白为原料,以常规酶解为对照,以酶解产物的抑制活性为指标,分别考察了超声预处理蛋白酶、超声预处理蛋白原料和酶解过程前期施加超声3种超声处理方式对双低菜籽蛋白酶解制备ACEI活性肽效果的影响。结果表明,3种超声辅助方式都能有效地促进菜籽饼粕蛋白的酶解,提高产物的ACE抑制活性,其中超声预处理蛋白原料效果最为明显。这种方式的最佳参数为:超声频率20kHz、超声时间30min、超声功率1250W、作用时间4s、间歇时间2s,该条件下酶解产物对ACE的抑制率从对照组的70.83%提高到92.97%,肽得率从29.6%提高到41.4%,半抑制浓度IC50从3.57mg/mL降到2.48mg/mL。这表明脉冲超声辅助酶解法是一种高效制备双低菜籽ACEI肽的方法。

油菜籽饼粕中蛋白和肽的制取

选用碱提酸沉方法制备菜籽蛋白,通过对各种因素的分析得到菜籽蛋白的制备条件是在pH 12的条件下提取菜籽蛋白,物料比为1∶15,菜籽蛋白的沉淀分两步进行,首先在pH 6.0条件下进行沉淀,离心之后在pH 3.6条件下再进行沉淀,收集两次的沉淀干燥即可得到菜籽蛋白。按照此工艺生产菜籽蛋白,提取率为40.7%。以菜籽粕为原料,以水解度为衡量指标,对碱性蛋白酶、酸性蛋白酶、中性蛋白酶的酶解作用进行比较,即不同的水解时间、水解温度,不同pH的酶解液和不同底物浓度的作用进行比较,最终确定用碱性蛋白酶进行酶解,水解时间为7 h,温度为50℃,酶解液pH 8.0,底物浓度为3%时,其菜籽分离蛋白水解度达32.19%。

油菜籽脱皮冷榨制备菜籽多肽的研究

油菜籽经脱皮冷榨得到冷榨饼,再经低温浸出脱溶得到低温粕,对低温粕提取菜籽蛋白,然后用中性蛋白酶AS1.398水解菜籽蛋白得到菜籽多肽。通过正交实验得到的最佳酶解条件是:pH7.2、温度45℃、加酶量5%(酶与原料液的质量比)、酶解时间2 h,酶解后有75%左右的蛋白质转化为可溶性肽,所得到的菜籽多肽流动性好,黏度低,热稳定性较好。

菜籽生物活性肽的研究进展

介绍了菜籽蛋白的营养价值,阐述了近年来对菜籽肽生物活性的研究,并论述了其制备方法。

酶解法制备菜籽多肽的工艺研究

本文以菜籽粕为原料,酸处理将菜籽粕脱毒后,采用碱溶酸沉法提纯菜籽蛋白,再用碱性蛋白酶酶解菜籽蛋白制备菜籽多肽,采用单因素逐级优化试验设计,以酶解液中菜籽多肽的含量为指标优化酶解工艺参数。结果表明:酸处理后的硫甙含量下降了84.32%,碱溶酸沉后,蛋白的提取率为76.25%。单因素逐级优化试验的结果表明:碱性蛋白酶酶解的最适条件为底物浓度4%、加酶量7%(E/S)、温度50℃、p H 8.5、酶解时间120 min,该条件下多肽含量为(35.4±0.11)mg/m L。

富硒菜籽蛋白肽的制备工艺研究

以富硒菜籽脱皮脱脂粕为原料,用酸性水脱除植酸和硫甙后碱溶酸沉制备得到富硒菜籽分离蛋白。再以富硒菜籽分离蛋白为原料,用碱性蛋白酶进行酶解,水解时间为7小时,温度为50℃,酶解液的pH= 8．0,底物浓度为3％时,其菜籽分离蛋白水解度达32.51％,氮收率达91．28％,蛋白肽产品含硒量为6．02ppm。

风味蛋白酶水解菜籽蛋白中2S和12S条件的优化

通过单因素试验和正交试验,研究了风味蛋白酶对菜籽蛋白中2S(RP-2S)和12S(RP-12S)的水解条件。结果表明,水解RP-2S的最佳酶解条件为底物浓度1%,酶与底物浓度比(E/S)95LAPU/g,酶解温度50℃,pH 7.0,酶解时间3 h,此条件下RP-2S的水解度达33.64%;水解RP-12S的最佳酶解条件为底物浓度1%,酶与底物浓度比(E/S)85 LAPU/g,酶解温度50℃,pH 6.6,酶解时间3 h,此条件下RP-12S的水解度达19.97%。

双低菜籽分离蛋白的酶解条件及活性肽抗氧化特性研究

以双低菜籽分离蛋白为原料,采用风味蛋白酶Flavourzyme酶解制备菜籽蛋白活性肽产品。结果表明,实验的最佳条件为:加酶量92000 U/g,酶解时间6 h,酶解温度50℃,酶解初始pH 6.0,底物质量分数1%。在最佳条件下双低菜籽分离蛋白水解度达32.09%,氮收率达16.12%。产品双低菜籽蛋白肽具有较强的抗氧化性和羟自由基清除能力,且随着水解度的增加而增大。

富硒菜籽蛋白肽的精制研究

对富硒菜籽分离蛋白酶水解得到的水解液粗肽产品进行精制,活性炭脱色脱苦,离子交换和透析脱盐处理。脱色工艺在单因素试验的基础上,通过正交试验优化条件为:活性炭用量1.25%,pH3.0,脱色时间60min,温度70℃。两种脱盐方法的脱盐率都很高,均达到85%以上。精制后的产品其平均分子量在1500D以下,是小分子多肽。

菜籽源锌螯合肽的制备、纯化和结构解析

采用碱性蛋白酶水解菜籽蛋白制备水解物,运用固定金属亲和层析(IMAC-Zn2+)和葡聚糖凝胶G25(Sephadex G25)层析分离纯化;利用反相高效液相色谱(RP-HPLC)和电喷雾电离质谱(ESI-MS)鉴定序列;采用EDTA络合滴定法(ECT)、双硫腙比色法(DCM)、原子吸收光谱(AAS)和电感耦合等离子体原子发射光谱法(ICP-AES)检测锌螯合率。试验表明:菜籽蛋白的4 h水解物锌螯合潜力最佳;分离该水解物获得3个肽组分(I,Ⅱ和Ⅲ),其中Ⅱ和Ⅲ具有锌螯合能力;进一步分离后分别获得3个(Ⅱ-1,Ⅱ-2,Ⅱ-3)和2个肽组分(Ⅲ-1和Ⅲ-2),组分Ⅱ-3的锌螯合率最高,高于同浓度的谷胱甘肽(GSH)(P<0.05);鉴定Ⅱ-3序列获得4条肽,即Ala-Arg(AR),Asn-Ser-Met(NSM),Gly-Lys-Arg(GKR)和Glu-Pro-SerHis(EPSH)。其中NSM的锌螯合率最高,来源于菜籽蛋白NADH-enoyl-ACP reductase Chain A序列中的296-298氨基酸残基。因此,菜籽蛋白可以作为微量元素螯合肽的优良来源。

富硒菜籽蛋白肽的物性研究

对由富硒菜籽脱脂粕制得的分离蛋白酶水解制备的肽产品进行溶解度、黏度、吸湿与保湿和热变性等物性研究。结果表明,富硒菜籽蛋白肽溶解度好,几乎不受pH值变化的影响;黏度低、浓度30%以上的肽液流动性好;该蛋白肽吸湿与保湿性强,受热不易变性。

油菜乙酰乳酸合酶基因BnALS3的亚细胞定位、原核表达及其酶活分析

为了研究油菜乙酰乳酸合酶基因BnALS3的亚细胞定位与酶学特性,以甘蓝型油菜(Brassica napus L.)品系N131为材料,采用RT-PCR法克隆到BnALS3的c DNA序列。该序列含有一个长度为1 959bp的开放阅读框,编码蛋白为652个氨基酸,在N端含有一个由49个氨基酸残基组成的叶绿体信号肽序列。将该信号肽序列构建至植物表达载体35S::BnALS3-GFP,利用拟南芥原生质体细胞进行瞬时表达,结果显示BnALS3蛋白定位在叶绿体中。构建去除叶绿体信号肽序列的BnALS3原核表达载体p Czn1-BnALS3,转入大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达。SDS-PAGE和Western Blot检测显示,在11℃条件下以终浓度为0.2mmol·L^(-1)的IPTG诱导8h后,p Czn1-BnALS3基因在大肠杆菌中成功表达,融合蛋白His-BnALS3呈部分可溶性,分子量约为67k D。酶活分析表明,原核表达的His-BnALS3最适反应p H值为7.0,最佳反应温度为37℃,酶学常数Km值和Vmax值分别为6.55mmol·L^(-1)和6.40μmol·mg^(-1)·h^(-1)。

酶法水解菜籽蛋白制备菜籽肽条件研究

以菜籽蛋白为原料,研究预处理和双酶水解条件对其水解度影响。结果表明,直接采用未经预处理菜籽蛋白和采用双酶分步水解法在不进行任何灭酶处理及先加入水解能力强的蛋白酶再加入其它蛋白酶条件下进行水解,所得菜籽蛋白水解效果较好。

菜籽蛋白活性肽研究

目前国内外研究表明,菜籽蛋白通过适当蛋白酶水解或经一定化学改性可得到大量具有生物活性和功能特性肽类,主要为抗氧化肽、降血压肽等;这些活性肽发现为今后充分利用菜籽蛋白资源提供新的途径。

三肽的锌螯合活性及定量构效关系分析

人工化学合成了51条三肽,测定了其锌螯合活性,形成待测数据库.分别采用18种氨基酸描述符对三肽序列进行表征,利用偏最小二乘法进行统计分析.结果表明,3种氨基酸描述符对应的定量构效关系(QSAR)模型的相关系数达到建模要求,描述符分别为FASGAI,Z和C,其中描述符FASGAI最优,R^2=0.8225,Q^2=0.5818,RMSEE=0.1628,Q^2ext=0.6760,RMSEP=0.2499.进一步分析描述符FASGAI所构建的模型发现,在三肽序列中,氨基酸位置对三肽锌螯合活性的影响力大小顺序为N_3>N_2>N_1,同时,多肽各位置上氨基酸残基的立体属性主要影响其螯合活性.

不同预处理方法对菜籽蛋白酶解效果的影响

以不同加热温度、超声波功率、三磷酸钠和琥珀酰酐对浓度为40 mg.mL-1菜籽蛋白液进行预处理,将处理后的菜籽蛋白液用碱性蛋白酶酶解3 h,通过比较酶解液中肽的质量分数和DPPH自由基清除率,得出结论为:在4种酶前预处理中,酶解效果最佳条件为温度60℃、超声功率500 W、三磷酸钠添加量为蛋白质量3倍和琥珀酰酐添加量为蛋白质量0.05倍,其肽质量分数分别为(35.00±0.18)%,(41.48±0.66)%,(39.27±0.74)%和(40.39±0.34)%;4种改性菜籽蛋白酶解液的DPPH自由基清除率效果均比对照组的高。

两步法制备菜粕肽及提高蛋白溶解度工艺

该实验主要通过固态发酵结合酶解两步法处理菜粕,在此新工艺条件下考察小肽含量及蛋白溶解度的变化.菜粕经黑曲霉固态发酵后小肽质量分数和蛋白溶解度显著提高,分别为7.86%和25.23%,相比于空白对照分别增长了148.08%和174.83%.之后将发酵后的菜粕置于45℃下酶解30 h,小肽质量分数和蛋白溶解度进一步提高,分别为14.12%和44.95%.相比于单步固态发酵和空白对照,小肽含量分别提高了79.64%和393.71%,蛋白溶解度分别提高了78.16%和341.99%.与此同时,酶解结束后,采用Tricine-SDS-PAGE测定菜粕中蛋白质分子质量,电泳结果显示,大分子蛋白质被分解为小分子蛋白质,其分子质量<4.6 kDa.以上结果表明,经发酵、酶解两步法处理菜粕后,相比于传统单步固态发酵,菜粕的营养价值得到进一步提高,可为菜籽粕生物肽制备提供科学依据.

菜籽肽的酶法制备、分离纯化及生物功能特性研究进展

生物活性肽具有多种良好的功能活性及营养价值,以其为基础开发的功能食品及营养保健品已成为大健康产业领域趋势之一。菜籽饼粕作为油菜籽榨油后的副产物,其蛋白质含量丰富、氨基酸组成均衡,是优质植物蛋白资源之一,且菜籽蛋白已被欧盟及美国食品和药物管理局批准为新食品原料,应用前景广阔。以菜籽饼粕或菜籽蛋白为原料经酶解或微生物发酵制备成菜籽肽或水解物已被证明具有抗氧化、降血压及螯合金属离子等多种活性功能,菜籽活性肽的挖掘及相关产品的开发将有助于菜籽的高值化利用。主要综述了菜籽肽的酶法制备、潜在功能活性及相关机制,并对研究趋势进行了概述,旨在为后续菜籽生物活性肽的深入开发利用提供理论支撑。

菜籽分离蛋白的研究与应用进展

菜籽蛋白是一种来源丰富、价格低廉、氨基酸组成均衡的优质植物蛋白资源。虽然其功能特性还不够突出,但近年来,随着对菜籽分离蛋白改性的报道越来越多,改性后的蛋白的功能特性得到了改善,分别发展为载体、膜、活性肽等,并被用于食品和生物医学行业。从菜籽粕中提取的菜籽分离蛋白因其营养价值高而被广泛应用于各种饲料中。文章对前人在菜籽分离蛋白功能特性、生物医学材料应用、菜籽肽、发酵菜籽粕等方面的研究进行了总结,以期为今后菜籽分离蛋白的研究和应用提供参考。

菜籽凝血酶抑制肽的酶法制备研究

以菜籽蛋白为原料,比较多种蛋白酶(碱性蛋白酶2709、Alcalase 2.4L、Protex 6L、Protex 7L和Neturase 1.5MG)对菜籽蛋白水解特性的影响,以及不同水解产物的凝血酶抑制活性,确定Alcalace 2.4L为制备菜籽抗凝血肽的最佳用酶,并获得其最优制备工艺条件为:底物浓度3.0g/100 mL、温度60℃、pH 8.5、加酶量7 000 U/g、酶解时间2.0 h,在此条件下菜籽蛋白的水解度为18.1%,酶解液的凝血酶抑制率达到98.8%.