虎纹捕鸟蛛毒的生物学活性鉴定

本文报道了采集广西产虎纹捕鸟蛛(Selenocosmia huwena)毒液的方法,并对粗毒进行了部分生物学活性的测定。该粗毒对小鼠和蜚蠊的LD_(50)分别为1.16mg/kg和300μg/g。该粗毒具有透明质酸酶、碱性磷酸酶、蛋白水解酶和脱氧核糖核酸酶活性。未测到磷脂酶A和胆碱脂酶活性。通过电生理实验发现该粗毒含有阻断蟾蜍神经肌肉接头传递的毒素,并观察到当小鼠接受腹腔注射致死剂量(5mg/kg)粗毒后便迅速出现呼吸麻痹。

我国南方捕鸟蛛一新种的生物化学鉴定(蜘蛛目,捕鸟蛛科)

采用高效液相色谱（ＨＰＬＣ）、激光解析基质辅助电离飞行时间质谱（ＭＡＩＤＩ－ＴＯＦＭＳ）和蛋白质序列分析方法，对从我国海南通什地区发现的一种捕鸟蛛与广西虎纹捕鸟蛛（Ｓｅｌｅｎｏｃｏｓｍ ｉａｈｕｗ ｅｎａ）的毒液进行了比较分析． 虽然两种蜘蛛形态十分相似，但其毒液的化学组成和主要毒素的氨基酸序列存在明显的差异，说明两种蜘蛛在进化上有同源性但分化很早．应列为不同种，特将海南发现的蜘蛛新种定名为海南捕鸟蛛，新种Ｓｅｌｅｎｏｃｏｓｍ ｉａ ｈａｉｎａｎａ ｓｐ．ｎｏｖ．

我国南方捕鸟蛛一新种(蜘蛛目:捕鸟蛛科)

该种分布于云南省开远,勐海,广西省宁明;海南省.经研究确认为一新种.虎纹捕鸟蛛,新种Selenocosmia huwena sp .now.(量度单位:mm).

海南捕鸟蛛毒素-Ⅵ的分离纯化及鉴定

从分布于我国海南省的海南捕鸟蛛 (Selenocosmiahainana)粗毒中 ,应用阳离子交换色谱和反相高效液相色谱分离得到 1种多肽神经毒素 ,命名为海南捕鸟蛛毒素 -Ⅵ (Hainantoxin Ⅵ ,HNTX Ⅵ )。MALDI -TOF质谱分析及氨基酸序列分析表明该多肽毒素分子量为 3 9984 9kDa ,序列为NH2 ECKYLWGTCEKDE HCCEHLGCNKKHGWCGWDGTF COOH ,其中的 6个Cys形成 3对二硫键。HNTX Ⅵ能阻断小鼠膈神经膈肌标本神经肌肉接头传递 ,脑室及硬膜外注射毒素能使小鼠瘫软。同源性搜索表明该毒素与蜘蛛Grammostolaspatulata毒素HaTx和蜘蛛Scodragriseipes中的SGTx1毒素有很高的同源性 ,而后两种毒素均为K+

虎纹捕鸟蛛毒素提取的研究

为探索提取广西产虎纹捕鸟蛛(Selenocosmia huwena)毒素的新方法,选取雌性虎纹捕鸟蛛225只,根据提取方法(直接咬软管法、直接咬瓶法、激怒咬渐法激怒咬瓶冲洗法)分为4组,结果表明,采用直接咬软管法提取虎纹捕鸟蛛毒素,平均每只蜘蛛可以获得冻干毒素2.28 mg,与采用直接咬瓶法所获得的2.19 mg没有显著差异(P>0.05)。采用激怒咬瓶冲洗法提取虎纹捕鸟蛛毒素,平均每只蜘蛛可以获得冻干毒素重量明显高于激怒咬瓶法[(3.41±0.40)mg,(2.99±0.35)mg,P<0.05],亦明显高于直接咬软管法和直接咬瓶法。该试验结果表明,激怒咬瓶冲洗法是一种提取虎纹捕鸟蛛毒素的有效方法。

虎纹捕鸟蛛(蜘蛛目:狒蛛科:捕鸟蛛亚科)的分类研究

研究了狒蛛科 (Theraphosidae)虎纹捕鸟蛛SelenocosmiahuwenaWangetal.,1993的分类地位 ,认为该种应隶属于捕鸟蛛亚科OrnithoctoninaePocock,1895的捕鸟蛛属OrnithoctonusPocock,1892。对虎纹捕鸟蛛Ornithoctonushuwena(Wangetal.,1993)

虎纹捕鸟蛛毒素的提取及毒力的测定

报道了提取广西产虎纹捕鸟蛛 (Selenocosm ia huw ena) 毒素的方法。用冻干蛛毒对小鼠进行腹腔注射, 测定出虎纹捕鸟蛛毒素的LD50 为0.77 m g/kg, LD50的95% 可信限为0.72～0.82 m g/kg, 表明该毒素有很强的毒力。并观察到当用0.30 m g/kg 冻干蛛毒注射小鼠颅内时, 小鼠迅速抽搐5

一种天然纳米纤维捕鸟蛛丝的物理化学结构表征

蜘蛛丝作为功能性结构材料, 其独特的纤维成型方法与优良的结构和性能引起许多人的关注. 从20世纪80年代开始有关蜘蛛丝的研究报道日益增加[1]. 与高温高压下或由溶剂纺丝成型的合成纤维相比, 蜘蛛丝在空气中凝固成型, 丝纤维成型安全、无害, 从腹部若干不同吐丝器产生不同种类的丝具有不同的用途[2]. 蜘蛛拖曳丝(dragline silk)的比强度大于钢丝, 且具有较大的断裂伸长率(9%～30%)[3,4], 抗张强度1.1～1.4 GPa. 在相对湿度50%和应变速率100%/min的条件下, 模量值可达10～50 GPa. 在所有已知纤维品种中, 蜘蛛丝的断裂能是最高的. 此外, 蜘蛛丝在许多方面的综合性能优于最优良的人造纤维. 另外, 蜘蛛丝的细度为已知纤度最小的天然有机纤维, 这种高性能丝具有捕捉昆虫甚至鸟类的功能, 因此蜘蛛丝是具有特异功能的天然纤维材料. 目前, 蜘蛛丝结构和性能的研究主要包括其化学组成[5]、结晶结构[6,7]、结构模型[8,9]以及其NMR表征[10]等, 这些研究揭示了蜘蛛丝的氨基酸组成、分子量及其分布、结晶度、晶胞尺寸、链构象以及结构模型等. 这些研究主要集中在少数几种蜘蛛品种上, 如金色圆网织网蛛(Nephila clavipes)、十字圆蛛(A.diadematus)和大腹圆蛛(A.ventrocosus)等. 目前, 已知的蜘蛛种类大于30 000种[11], 以蜘蛛丝为例的生物大分子材料研究是一个挑战性的课题. 国内蜘蛛丝的研究仅有大腹圆蛛拖曳丝蛋白一级结构的研究报道[12,13]. 本文报道了广西捕鸟蛛丝的红外光谱、形貌结构和原子力显微镜的初步研究结果.

雌性和雄性虎纹捕鸟蛛粗毒蛋白质含量比较分析

自然界虎纹捕鸟蛛雌蛛数量远多于雄蛛数量,为了探究雌、雄蛛粗毒的差异,用不同方法比较了单个虎纹捕鸟蛛雌、雄蛛粗毒的特征.雌蛛单次螫毒量为(26.5±2.47)μL,冻干后粗毒质量为(5.01±0.78)mg,明显高于雄蛛单次螫毒量(10.83±1.35)μL,冻干后粗毒质量(2.05±0.17)mg;用Lowry法和Bradford法测定雌蛛和雄蛛粗毒的蛋白质含量,两种方法均表明雄蛛粗毒中蛋白含量高于雌蛛.用反相高效液相色谱分离雌蛛和雄蛛粗毒蛋白,并215 nm检测色谱图,发现大部分洗脱峰重叠,而雄蛛色谱图中多两个主峰.Tricine SDS-PAGE电泳分析表明雌蛛粗毒相对分子质量小于10 kD的蛋白质含量较高;而Tris SDS-PAGE电泳分析表明雌蛛粗毒相对分子质量大于10 kD的蛋白质含量较低,基于雌蛛和雄蛛粗毒蛋白含量的差异,有必要对虎纹捕鸟蛛雌、雄蛛粗毒进行独立研究.

采用高效液相色谱-质谱考察家福捕鸟蛛粗毒中多肽和蛋白质的多样性

家福捕鸟蛛（Selenocosmia jiafu）是一种生活在中国广西、云南等边远山区、中等个体、产毒量较大和毒性较强的蜘蛛新种。为了对家福捕鸟蛛粗毒成分进行初步探索,采用反相高效液相色谱、基质辅助激光解吸离子化飞行时间质谱和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳方法对粗毒多肽和蛋白质的多样性进行了分析。结果表明：家福捕鸟蛛粗毒经色谱分离后得到40多个色谱峰,经质谱鉴定得到238个多肽,且多肽的相对分子质量呈现出双峰分布,其中62.5%的多肽的相对分子质量分布在3 000-4 500之间,33.2%的多肽的相对分子质量分布在1 000-3 000之间。这种相对分子质量的分布模式不同于其他已经报道的蜘蛛粗毒中多肽的分布模式。电泳分析结果表明：除了相对分子质量在10 000以下的多肽分子,粗毒在50、72和90 kD附近有3条明显的条带,粗毒电泳条带经液相色谱-电喷雾四极杆飞行时间质谱鉴定,主要是一些血蓝蛋白、钾离子通道蛋白、钙蛋白酶等。说明家福捕鸟蛛粗毒中多肽和蛋白质种类丰富。

病态虎纹捕鸟蛛器官元素特点分析

采用火焰原子吸收分光光度计,对不同病症的虎纹捕鸟蛛Selenocosmiahuwena(Wangetal.,1993)的4种器官组织中的6种元素(铁(Fe)、铜(Cu)、锌(Zn)、锰(Mn)、镁(Mg)、钙(Ca))的含量进行了测定。结果表明:这6种元素在病症蜘蛛中的含量与正常蜘蛛相比均有很大差异。本文首次从元素的缺乏或过多积累方面分析了蜘蛛的致病原因。为其人工繁育、开发利用和资源保护提供基础资料。

虎纹捕鸟蛛毒素的抗菌活性探讨

从虎纹捕鸟蛛粗毒中分离得到 2种多肽毒素 ,huwentoxin -Ⅰ和huwentoxin -Ⅱ。抗菌实验结果表明 ,这 2种多肽毒素能抑制革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌及啤酒酵母菌的生长 。

虎纹捕鸟蛛卵巢发育的组织学

根据卵巢的组织学和形态特征分析,虎纹捕鸟蛛的卵巢为若干由生殖上皮向卵巢腔内突起的卵巢小体构成.在卵细胞发育过程中,一直有滋养细胞形成的托柄向其供应养分.卵巢发育可分为5个时期:形成期、生长期、成熟期、排卵期和恢复期.在生殖季节里可多次产卵,为多次产卵类型.卵巢的大小重量与蛛体重量成正相关,而成熟的蜘蛛性腺指数仅随卵细胞的发育而变化,不随蛛体大小改变.

虎纹捕鸟蛛毒液中透明质酸酶的纯化和部分性质的研究

用分子筛（岛津ＤＩＯＬ－１５０柱）和阳离子交换（岛津ＷＣＸ－１柱）高效液相色谱从虎纹捕鸟蛛（Ｓｅｌｅｎｏｃｏｓｍｉａｈｕｗｅｎａ）毒液中分离提纯透明质酸酶（Ｈｙａｌｕｒｏｎｉｄａｓｅ，ＥＣ３．２．１．３５）．经等电聚焦电泳为一条带，ｐＩ＝７．２．经ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳测得分子量为４０ｋＤ，经凝胶过滤测得分子量为４０．７ｋＤ。以透明质酸为底物时在ｐＨ３．５─５．５范围内有较大活性，最适ｐＨ值为４．０；在ｐＨ４．５─６．０范围内稳定，在反应温度为３０─６０℃时有较大活性，最适温度为５０℃；对热稳定，０．１５ｍｏｌ／Ｌ的ＮａＣｌ对酶活性有一定的稳定作用．３％的肝素、５００μｍｏｌ／Ｌ的Ｈｇ^（２＋）、Ｆｅ^（２＋）、Ｃｕ^（２＋）对酶活性有明显的抑制作用。

虎纹捕鸟蛛雄蛛的修订(蜘蛛目:捕鸟蛛科)

修订了王家福等所订虎纹捕鸟蛛Selenocosmia huwena Wang et al., 1993的雄蛛,并将近期所采得的该种雄蛛作了重新描述。

家福捕鸟蛛粗毒对美洲蜚蠊和小鼠半致死剂量的测定

家福捕鸟蛛是一种生活在中国广西、云南等省山区,中等个体,产毒量较大蜘蛛新种.研究发现它的毒液中含有许多不同活性的成分.为了更好地开发利用该种生物资源,评估其毒性大小,测定了家福捕鸟蛛粗毒对美洲蜚蠊和小鼠的半致死剂量.家福捕鸟蛛粗毒对美洲蜚蠊具有较强的毒性,低剂量的粗毒对美洲蜚蠊具有一定的毒性,高剂量的粗毒能够使美洲蜚蠊在几分钟内致死.家福捕鸟蛛粗毒对美洲蜚蠊的半致死剂量为85.90μg/g.但家福捕鸟蛛粗毒对小鼠的毒性较弱,当注射剂量达到10 mg/kg体重时小鼠未见明显的中毒症状.当注射的粗毒剂量达到46.30 mg/kg时小鼠在24 min内死亡.家福捕鸟蛛粗毒可能主要是一类选择性作用于昆虫的蜘蛛毒素.

家福捕鸟蛛粗毒对DRG细胞上电压门控离子通道的影响

采用全细胞膜片钳分析,测定了家福捕鸟蛛粗毒对DRG细胞上电压门控钠、钾和钙离子通道的影响.结果表明:粗毒对大鼠背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)细胞上河豚毒素敏感型钠通道、河豚毒素不敏感型钠通道、电压门控钾通道、高电压激活钙通道和低电压激活钙通道都具有抑制作用.100μg/m L的粗毒分别能够抑制64.0%河豚毒素敏感型钠电流、46.5%河豚毒素不敏感型钠电流、44.2%电压门控钾电流和77.7%低电压激活的钙电流.50μg/m L的粗毒能够抑制大约74.9%高电压激活的钙电流.结果表明家福捕鸟蛛粗毒中可能存在开发为新型药物和离子通道工具试剂的毒素分子.

虎纹捕鸟蛛凝集素-I(SHL-I)的核磁共振氢谱谱峰的完全归属

描述了从虎纹捕鸟蛛毒液分离的凝集素ＳＨＬ－Ｉ的核磁共振氢谱谱峰的完全归属。通过分析二维ＤＱＦ－ＣＯＳＹ，ＣＯＳＹ，ＴＯＣＳＹ和ＮＯＥＳＹ谱，鉴别出全部３２个氨基酸残基自旋体系。然后由ＣＯＳＹ，ＮＯＥＳＹ谱指纹区的ｄαＮ连系推测出序列专一归属，并得到了ＴＯＣＳＹ和ＮＯＥＳＹ谱中ｄαＮ，ｄＮＮ的验证。从而明确分辨了除Ｃｙｓ２外所有主链质子和大于９６％的侧链质子。这一结果为最终确定ＳＨＬ－Ｉ的溶液构象奠定了基础。

虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅵ的分离纯化与鉴定

通过离子交换及反相HPLC ,从虎纹捕鸟蛛毒液中分离得到 1种新的哺乳类神经毒素 ,命名为虎纹捕鸟蛛毒素 -Ⅵ (Huwentoxin Ⅵ ,HWTX Ⅵ )。MALDI TOF质谱仪分析及氨基酸序列分析表明该多肽毒素分子量为 4 44 0 18kDa。序列为H2 N CIGEGVPCDENDPRCCSGLVVLKKTLHGIWIKSSYCYKCK COOH。其中 6个Cys形成 3对二硫键。小鼠脑内注射实验表明 ,HWTX Ⅵ对神经系统具有明显的致瘫作用 ,这种致瘫作用又具有可逆性。

广西虎纹捕鸟蛛毒成分的氨基酸测定及红外光谱定性分析

目的通过质量分析的方法初步鉴定蛛毒的毒素化学成分。方法采用氨基酸自动分析仪对蛛毒的多种氨基酸成分进行定性及定量的研究,并且辅以红外光谱法进行定性研究。结果通过氨基酸测定法从虎纹捕鸟蛛中鉴定到谷氨酸、胱氨酸、赖氨酸含量较多,分别为8.15%、7.86%、7.64%,氨基酸总量为55.93%;从样品粉末的红外光谱可知:该化合物可能含-C-H,-OH,NH,-CO-N-H,苯环等主要氨基酸基团。结论结果表明该鉴别方法操作简便、专属性强,可用于蛛毒的定性鉴别和含量测定,初步建立了虎纹蛛毒成分的定性鉴定研究方法。