KDR基因和Sema3基因在再障和正常人骨髓基质细胞中的表达

目的 :了解激酶插入区域受体 (kinaseinsertdomainreceptor,KDR)基因和脑信号蛋白Ⅲ(Semaphorin3,Sema3)基因在再生障碍性贫血 (AA)和正常人的骨髓基质细胞 (BMSC)和骨髓造血细胞中的表达情况。方法 :收集 9例AA和 33例正常骨髓标本 ,分离单个核细胞 (MNC)后体外长期培养扩增BMSC ,并收集悬浮细胞 (骨髓细胞 )。RT -PCR -ELISA检测KDR基因和Sema3基因在BM SC和造血细胞中的表达 ,分析表达率 ,并以管家基因 β2 微球蛋白 (β2 M)为内参照进行半定量分析。结果 :KDR基因在正常对照BMSC中的表达率 (97 0 % )明显高于对应的骨髓细胞 (70 8% ,P =0 0 0 7)。KDR基因在AA的BMSC和骨髓细胞中的表达率和表达水平与正常对照比较均无显著差异。Sema3基因在正常BMSC中的表达水平明显低于其对应的骨髓细胞 (P =0 0 35 )。Sema3基因在AA的BMSC和骨髓细胞中的表达率和表达水平与正常对照组比较均无显著差异。KDR基因和Sema3基因的表达水平在正常造血细胞中呈显著正直线相关 (r =0 70 3,P =0 0 0 2 )。结论 :KDR基因在BMSC中的高表达提示其可能在维持造血微环境中有重要作用。Sema3基因在造血细胞中的高表达状态提示其可能具有维持造血细胞生存的作用。

SEMA3B、SEMA3F基因在鼻咽癌细胞中突变和表达的研究

背景与目的:鼻咽癌(nasopharyngealcarcinoma,NPC)致病的分子机理至今仍不清楚,但高频的杂合性缺失和功能学证据均表明染色体3p21.3区段中存在着与鼻咽癌相关的抑癌基因。SEMA3B和SEMA3F基因是定位于3p21.3的两个semaphorin家族成员,最近被鉴定为抑癌基因。本研究通过对SEMA3B和SEMA3F基因在鼻咽癌中的突变和表达检测,探讨SEMA3B和SEMA3F基因与鼻咽癌发病的关系。方法:采用PCR-直接测序方法,在21例散发性NPC组织和2例NPC细胞株(CNE2,SUNE1)中对SEMA3B和SEMA3F基因的编码区、拼接位点和部分调控区进行突变检测;利用半定量RT-PCR方法,检测SEMA3B和SEMA3F基因在鼻咽癌中的表达。结果:在鼻咽癌中未发现SEMA3B或SEMA3F基因具有体细胞突变,但在SEMA3B基因中发现两个导致氨基酸改变的单核苷酸多态性Thr415Ile和Ile242Met。在Thr415Ile多态位点中,可导致SEMA3B基因功能缺陷的Ile等位基因频率在鼻咽癌患者中占有较高比例(64%,27/42)。SEMA3BmRNA在6例鼻咽非癌组织中正常表达,但在76%(16/21)的鼻咽癌组织中表达下调或缺失;SEMA3FmRNA的表达水平在鼻咽癌和非癌组织中无明显差异。结论:SEMA3BmRNA在鼻咽癌中发生高频表达缺失说明该基因失活与鼻咽癌密切相关,SEMA3B基因可能是定位于染色体3p21.

非小细胞肺癌组织与癌旁组织SEMA3B基因甲基化分析

目的分析非小细胞肺癌组织与癌旁组织SEMA3B基因启动子区甲基化状况。方法用甲基化特异PCR(MSP)法检测非小细胞肺癌(NSCLC)组织及癌旁组织标本23例,用克隆测序验证。结果非小细胞肺癌组织标本中SEMA3B基因启动子区有19例(82.6%,19/23)发生异常甲基化,相对应的癌旁组织标本中有18例(78.3%,18/23)发生异常甲基化,但与发病年龄、性别、病理分化无关。结论非小细胞肺癌组织与癌旁组织都表现出SEMA3B基因启动子区异常甲基化,癌旁组织细胞中发生SEMA3B基因启动子异常甲基化可能要早于细胞的恶性增生。

胃癌中SEMA3B基因表达与其启动子区甲基化的关系

背景:SEMA3B为一候选肿瘤抑制基因,在多种恶性肿瘤的发生、发展中起重要作用。目的:初步探讨DNA甲基化调控机制对胃癌中SEMA3B基因表达的影响。方法:以real-time PCR检测6株人胃癌细胞株(SGC7901、AGS、MGC803、BGC823、MKN45、HGC27)、正常人胃黏膜上皮细胞株GES-1和41例胃癌组织及其相应癌旁非癌组织中的SEMA3B mRNA表达。以甲基化特异性PCR检测SEMA3B基因启动子区甲基化状态,并分析其与胃癌临床病理特征的关系。以去甲基化药物5-Aza-dC(10μmol/L)处理上述细胞株72 h,观察SEMA3B基因甲基化状态和mRNA表达变化。结果:6株胃癌细胞和胃癌组织中的SEMA3B mRNA表达分别显著低于GES-1细胞(P<0.001)和相应癌旁非癌组织(P<0.01)。6株胃癌细胞SEMA3B基因启动子区均发生甲基化,GES-1细胞则未发生甲基化。胃癌组织SEMA3B基因甲基化率显著高于相应癌旁非癌组织(67.6%对32.4%,P<0.01),甲基化状态与胃癌分化程度和淋巴结转移相关(P<0.05)。经5-Aza-dC处理后,5株胃癌细胞SEMA3B基因甲基化程度下降,伴mRNA表达上调。结论:SEMA3B基因启动子区高甲基化可能是其在胃癌中表达下调的原因之一,并参与了胃癌的发生、发展。SEMA3B有望成为胃癌诊断和预后评估的分子标记物以及表观遗传学治疗靶点。

沉默SEMA3A基因对胶质瘤细胞U251增殖和转移的影响

探讨了SEMA3A基因在恶性胶质瘤细胞U251迁移和侵袭能力中的作用,及其用于胶质瘤临床治疗的可行性.用特异识别SEMA3A基因的短发卡RNA(short hairpin RNA,sh RNA)片段与真核表达载体p FH-GFP-L连接,再与辅助质粒联用来包装慢病毒.通过荧光显微镜观察感染胶质瘤细胞U251的感染效率.通过实时定量PCR技术和Western-blot技术验证了U251细胞中SEMA3A基因的沉默效果.通过MTT法、PI染色法和Transwell小室分别检测了U251细胞增殖、细胞周期和运动能力的变化.结果表明,SEMA3A-sh RNA慢病毒感染U251能有效下调SEMA3A基因的表达水平(P<0.01),使U251细胞的增殖能力、迁移和侵袭能力明显降低(P<0.05),细胞大量阻滞在G2/M期,并促进了细胞凋亡(P<0.05).

先天性巨结肠的SEMA3A基因单核苷酸多态性分析

目的探讨SEMA3A基因单核苷酸多态性（SNP）与先天性巨结肠发生的关系。方法应用PCR扩增后直接测序的方法．分析119例先天性巨结肠患者和93例正常人群中SEMA3Ars7804122、rs7978212个SNP位点基因型。结果SEMA3A基因rs797821位点的等位基因频率和基因型频率在先天性巨结肠组和正常对照组的分布差异无统计学意义（P〉0．05）。rs7804122位点的G等位基因（26．9％）和GG（5．0％），AG（43．7％）基因型在先天性巨结肠组中的频率明显高于正常对照组（12．9％、1．1％、23．7％，P〈0．05）。结论SEMA3A基因是先天性巨结肠重要的易感基因．其rs7804122位点G等位基因是先天性巨结肠发病的危险因素。