基于Sema3E/PlexinD1和Sema4D/PlexinB1途径探讨黄芪甲苷促进脑梗死大鼠血管新生及改善血脑屏障受损的机制

目的研究黄芪甲苷促进脑梗死后血管新生及改善血脑屏障受损的作用,并探讨其内在机制。方法采用线栓法制造大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,假手术组只穿线不结扎,将模型复制成功的大鼠随机分为模型组、依达拉奉组及黄芪甲苷低、中、高剂量组,依达拉奉组给予依达拉奉3.2 mg·kg^(-1),黄芪甲苷组分别灌胃给予黄芪甲苷20、40、100 mg·kg^(-1),连续用药2周。用改良大鼠神经功能缺损评分(mNSS)法评价行为学变化,氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法测定脑梗死体积;HE染色法观察病理变化;免疫组化法检测血管内皮生长因子(VEGF)、血管生成素-2(Ang-2)的表达及微血管计数(MVC);伊文思蓝法评估血脑屏障破坏水平;RT-PCR法检测Sema3E、PlexinD1、Sema4D、PlexinB1 mRNA的表达。结果黄芪甲苷中、高剂量可明显降低大脑中动脉闭塞大鼠神经功能缺损评分(P<0.05,P<0.01),减少脑梗死体积(P<0.01),改善脑组织病理改变,增加脑组织MVC及VEGF、Ang-2的表达(P<0.01),降低血脑屏障的通透性(P<0.01),降低脑组织Sema3E、PlexinD1、Sema4D、PlexinB1 mRNA表达(P<0.01)。结论黄芪甲苷可以明显促进大脑中动脉闭塞大鼠血管新生及改善血脑屏障受损,其可能是通过调控Sema3E/PlexinD1和Sema4D/PlexinB1途径相关基因表达实现的。

猫爪草总皂苷基于Sema4D/PlxnB1/c-Met通路对A549裸鼠移植瘤增殖的抑制作用及机制研究

目的:探讨猫爪草总皂苷(TSRT)基于Sema4D/PlxnB1/c-Met通路对人非小细胞肺癌A549裸鼠移植瘤增殖的抑制作用及机制。方法:成功构建A549裸鼠移植瘤模型后,随机分为空白组、阴性组、过表达组和药物组(1.73g/kg TSRT),记录成瘤情况并绘制肿瘤生长曲线,实验结束后剥离移植瘤并称重;RT-PCR和Western blot分别检测各组Sema4D、PlxnB1、c-Met mRNA和蛋白表达差异;免疫组化检测Sema4D阳性表达率。结果:与空白组相比,过表达组接种20d后的肿瘤体积显著增加,肿瘤重量明显增加,Sema4D、PlxnB1、c-Met mRNA和蛋白表达水平显著升高,Sema4D阳性表达率显著提高(P<0.01);与过表达组相比,药物组接种20d后肿瘤体积明显降低,瘤重显著降低,Sema4D、PlxnB1、c-Met mRNA和蛋白表达水平显著下降,Sema4D阳性表达率明显降低(P<0.05或P<0.01)。结论:TSRT能显著抑制人肺癌裸鼠移植瘤的生长,其作用机制可能与抑制Sema4D/PlxnB1/c-Met信号通路有关。

川崎病内皮细胞高表达IL-1β促进中性粒细胞活化和分泌Sema4D

目的探讨川崎病(KD)冠状动脉内皮细胞(HCAECs)条件培养基对中性粒细胞生物学功能的影响及机制。方法2022年12月在西安市儿童医院收集KD患儿和健康儿童混合血清,分别刺激HCAECs作为KD组和HC组,RT-PCR检测两组细胞IL-1β表达。HCAECs分为si-IL-1β组和si-NC组,分别转染IL-1βsiRNA和无效siRNA,然后加入KD血清刺激,RT-PCR检测HCAECs中IL-1βmRNA表达。收集si-IL-1β组和si-NC组细胞的培养上清液,经离心和滤菌后分别得到两组细胞的条件培养基,ELISA检测两组条件培养基中IL-1β浓度,Transwell实验检测条件培养基对中性粒细胞迁移能力的影响,流式细胞术检测条件培养基对中性粒细胞凋亡和Sema4D表达的影响。中性粒细胞分为TAPI-1预处理+si-NC条件培养基组、DMSO预处理+si-NC条件培养基组、TAPI-1预处理+si-IL-1β条件培养基组和DMSO预处理+si-IL-1β条件培养基组,用si-IL-1β组或si-NC组条件培养基分别刺激已用金属蛋白酶ADAM17的抑制剂TAPI-1或DMSO预处理的中性粒细胞,流式细胞术检测中性粒细胞Sema4D表达。结果RT-PCR显示,KD组较HC组HCAECs中IL-1β明显高表达(P<0.01);si-IL-1β组IL-1βmRNA表达较si-NC组明显降低(P<0.01)。与si-NC组比较,si-IL-1β组条件培养基IL-1β含量明显降低(P<0.01),条件培养基处理的中性粒细胞迁移能力明显下降(P<0.01),而中性粒细胞凋亡和Sema4D表达均增加(P<0.01)。与DMSO预处理+si-NC条件培养基组比较,TAPI-1预处理+si-NC条件培养基组Sema4D+中性粒细胞百分比明显升高(P<0.05),而TAPI-1预处理+si-IL-1β条件培养基组和DMSO预处理+si-IL-1β条件培养基组中性粒细胞Sema4D无明显差异(P>0.05)。结论川崎病内皮细胞高表达IL-1β促进中性粒细胞迁移并抑制中性粒细胞凋亡,而且可能通过激活ADAM17促进中性粒细胞分泌Sema4D。

人参皂苷Rg1调控Sema4D/Plexin B1信号通路对老龄脑梗死大鼠神经功能的保护作用

目的研究人参皂苷Rg1调控轴突导向蛋白(Sema)4D/神经丛蛋白B1抗体(Plexin B1)信号通路对老龄脑梗死大鼠神经功能的保护作用。方法选取清洁、健康的雄性SD大鼠30只,随机选取6只为空白组,剩余24只建立脑梗死模型,成功将24只大鼠随机分为模型组、中、低、高剂量人参皂苷Rg1组。计算大鼠脑梗死面积,评定神经功能评分,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测神经元特异性烯醇化酶(NSE)水平表达,高效液相色谱法学进行谷氨酸(GLU)和天冬氨酸(ASP)含量测定,采用Western印迹检测Sema4D/Plexin B1信号通路相关蛋白Sema 4D、Plexin-B1表达。结果与空白组相比,模型组、中、低、高剂量人参皂苷Rg1组脑梗死面积、神经功能、GLU、NSE、ASP及Sema4D、Plexin-B1水平显著较高(P<0.05)。与模型组相比,中、低、高剂量人参皂苷Rg1组脑梗死面积、神经功能评分、GLU、NSE、ASP及Sema4D、Plexin-B1水平显著较低(P<0.05)。与低剂量人参皂苷Rg1组相比,中剂量人参皂苷Rg1组大鼠脑梗死面积、神经功能评分、GLU、NSE、ASP及Sema4D、Plexin-B1水平显著较低(P<0.05)。结论人参皂苷Rg1能有效降低脑梗死模型大鼠梗死面积,保护神经功能,其作用机制可能与Sema4D/Plexin B1信号通路相关蛋白有关,高剂量人参皂苷Rg1组更加明显。

Sema4D在肿瘤新生血管形成中的作用及其机制研究进展

Sema4D属于Semaphorin家族成员之一,最初被认为是影响神经发育的轴突导向因子。近年研究表明,Sema4D在人体肿瘤组织中高表达,并在肿瘤新生血管形成及肿瘤进展中发挥重要作用。Sema4D介导肿瘤新生血管形成的主要机制包括激活Plexin B1-RhoA与Met信号通路、与血管内皮细胞生长因子协同作用、与低氧诱导因子作用。在实体肿瘤中,Sema4D高表达提示血管新生效应更强、恶性程度更高及预后更差,可作为抗肿瘤及抗肿瘤血管治疗的新靶标。

轴突导向蛋白4D在肿瘤发病中的作用及对结直肠癌的意义

轴突导向蛋白4D(Semaphorin4D,Sema4D)是轴突导向蛋白Ⅳ亚族(SemasⅣ)的重要成员之一,包括游离型及膜结合型,研究表明,其在结直肠癌患者的肿瘤生长及转移等方面有重要的生物学功能。介绍Sema4D在结直肠癌中的研究进展。

胃癌组织中HIF-1α,CD68及Sema4D蛋白的表达及临床意义

目的比较低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)标记抗原CD68和轴突导向因子4D(Sema4D)在胃癌组织和癌旁组织中的表达,探讨三者之间的相关性及临床意义。方法采用免疫组织化学SP法检测86例胃癌组织和癌旁正常组织中HIF-1α,CD68和Sema4D的表达,并分析其与临床病理特征的关系。结果胃癌组织中HIF-1α,CD68及Sema4D蛋白阳性表达率显著高于正常组织(分别为58.1%%VS 23.3%,72.1%VS 23.3%,74.4%VS 29.1%;P均<0.01)。HIF-1α,CD68及Sema4D蛋白与胃癌组织分化类型、TNM分期和淋巴结转移明显有关(P<0.05),且三者表达均呈正相关(r HIF-1α/CD68=0.418,r HIF-1α/Sema4D=0.367,r CD68/Sema4D=0.467,P均<0.01)。结论胃癌组织中HIF-1α,CD68及Sema4D表达明显增高,且三者的表达均呈正相关,三者的联合检测可作为胃癌早期诊断的辅助指标。