娑罗子化学成分、药理活性及临床应用研究进展

娑罗子为我国传统中药,具有宽中、理气、和胃、止痛之功效,主要含三萜皂苷类、黄酮类、香豆素类、吲哚生物碱类及脂肪油等多种成分。现代药理研究表明,娑罗子具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤、神经保护等多种药理活性。随着对娑罗子的深入研究和开发,发现七叶皂苷钠作为其主要活性成分,在临床常用于治疗脑卒中、肺系疾病、胃肠病、甲状腺疾病、眼部疾病等。对娑罗子化学成分、药理活性及临床应用的相关研究进行综述,以期为其相关产品的研发提供参考。

高效液相色谱-电喷雾飞行时间质谱分析娑罗子中皂苷类成分

采用高效液相色谱/电喷雾飞行时间质谱联用技术(HPLC/ESI-TOF/MS),研究4种七叶皂苷的分子结构与裂解规律间的关系,并对娑罗子中的七叶皂苷类化合物进行鉴定。实验采用反相C18色谱柱,以乙腈-0.2%乙酸溶液为流动相,二元线性梯度洗脱,通过与电喷雾飞行时间质谱联用获得娑罗子中各皂苷成分的精确分子量和分子式;采用质谱碰撞诱导解离技术获得各化合物碎片裂解信息,结合文献对娑罗子中的14种皂苷类化合物进行了初步鉴定。研究表明,高效液相色谱-电喷雾飞行时间质谱联用技术是娑罗子中皂苷类化合物鉴别的有效工具。

HPLC法测定娑罗子中4种皂苷类成分的含量

目的:建立娑罗子药材中4种皂苷类成分的高效液相色谱测定方法。方法:色谱柱为Platinum EPS C18(4.6 mm×250mm,5μm),流动相为乙腈-水-冰醋酸(30:70:1),检测波长为210 nm,流速为1.0 mL·min-1。结果:七叶皂苷Ⅰa、七叶皂苷Ⅰb、异七叶皂苷Ⅰa和异七叶皂苷Ⅰb的线性范围分别为2.06-20.56μg,2.25-22.46μg,2.21-22.12μg,2.01-20.04μg;加样回收率分别为97.57%,96.74%,97.56%,97.50%,RSD分别为1.54%,1.18%,1.14%,1.26%(n=5)。结论:方法简便、准确,可用于娑罗子药材的质量控制。

娑罗子中三萜皂苷成分的HPLC定量分析

目的建立娑罗子中三萜皂苷成分的高效液相色谱测定方法,同时分析中华七叶树、天师栗和浙江七叶树等的种子及商品娑罗子药材中5种三萜皂苷成分(七叶树皂苷Ia、Ib和异七叶树皂苷Ia、Ib及七叶树皂苷A)的量。方法采用反相DiamonsilTM C18硅胶色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),以乙腈-水-磷酸(123∶277∶7)为流动相,检测波长为220nm。结果建立了同时测定娑罗子中5种皂苷七叶树皂苷Ia、Ib和异七叶树皂苷Ia、Ib及七叶树皂苷A的HPLC分析方法,线性范围内5个皂苷化合物的标准曲线呈良好的线性关系。结论该法简单、灵敏,可同时定量分析娑罗子中七叶树皂苷Ia、Ib和异七叶树皂苷Ia、Ib及七叶树皂苷A。

高效毛细管电泳—聚类分析法鉴别娑罗子品种

运用高效毛细管电泳法分离娑罗子中植物蛋白等成分 ,系统聚类法鉴定九个娑罗子样品 ,实验结果与原植物鉴定一致。

娑罗子提取物对实验小鼠胃肠道的保护作用研究

目的观察娑罗子提取物对实验小鼠胃肠道的影响。方法采用易蒙停建立小鼠便秘模型和肠蠕动抑制模型,通过鼠肠道炭末推进法测定小鼠排便和小肠推进,观察不同剂量组(3.5,7,14 mg/kg)娑罗子提取物对便秘小鼠的首次排便时间、粪便粒数、粪便重量和小肠内容物推进率的影响;采用无水乙醇造成小鼠急性胃粘膜损伤,观察娑罗子提取物各组溃疡指数、溃疡抑制率的变化。结果与模型组比较,娑罗子提取物各剂量组均能明显提高小肠推进率(P<0.05),显著减少溃疡指数(P<0.01),低,中,高各剂量组溃疡抑制率分别达到75.2%,77.0%,72.9%;低剂量组能显著增加小鼠粪便粒数(P<0.01)和粪便重量(P<0.05)。结论娑罗子提取物对实验小鼠胃肠道具有明显的保护作用。

娑罗子中总皂甙的比色测定

采用比色法 ,以三氯化铁 -冰醋酸 -浓硫酸的混合溶液为显色剂 ,测定娑罗子总皂甙含量 ,r=0 .9993,线性范围为 2 4～ 4 70μg。

娑罗子提取物对阿司匹林致胃溃疡作用的研究

目的研究娑罗子提取物(SAE)对阿司匹林所致胃溃疡的保护作用,为阿司匹林安全用药提供依据。方法用阿司匹林制备溃疡模型,小鼠连续5天灌胃给予SAE(3.5、7、14mg/kg)或在制备溃疡模型前、后不同时间点灌胃给予SAE(7mg/kg),于显微镜下观察胃溃疡指数。结果与模型组比较,SAE(7、14mg/kg)显著降低溃疡指数(P<0.05)。制备溃疡模型同时给予SAE(7mg/kg)可以明显降低溃疡指数。结论娑罗子提取物对阿司匹林所致胃溃疡有预防作用。

娑罗子中七叶皂苷乙醇提取工艺研究

目的优选娑罗子中七叶皂苷乙醇提取工艺。方法以七叶皂苷含量和出膏率为考察指标,通过L_9(3~4)正交试验对影响乙醇提取效果的因素进行优选。结果乙醇提取工艺最佳条件为10倍80%乙醇回流提取2次,每次1 h。结论该提取工艺稳定可靠、简单可行、重现性好,为工业生产提供了参考。

娑罗子中有效成分的药理学及临床应用

通过收集整理近年来有关娑罗子中有效成分的药理研究及临床文献报道,系统总结娑罗子所含有效成分的具体药理作用机制。目前对娑罗子主要活性成分七叶皂苷钠的研究比较充分,临床疗效稳定,药理作用机制明确。经常被用来治疗软组织水肿渗出等疾病。但娑罗子中活性成分繁多,药理及临床研究尚不完善,应进一步加强对娑罗子其他活性成分,包括黄酮类、香豆素类、甾醇类的研究,为本品新剂型的研发及进一步拓展临床应用提供新思路。

天师栗无公害规范化种植的探讨

目的:建立天师栗无公害精细栽培体系,保障规范化生产的娑罗子质量符合临床用药需求。方法:本规范依托推广单位自有基地多年来天师栗生产数据为主,兼顾其它单位生产和科研情况,适用于天师栗无公害基地生产。结果:本文从精准选地、品种繁育、合理施肥、病虫害防治、采收期确立、质量标准的建立等多方面,建立了天师栗的无公害规范化精细栽培技术体系。结论:天师栗无公害规范化种植体系的建立对天师栗的种植具有一定的科学性和重要性,为天师栗的引种栽培以及合理规划生产布局提供了参考依据,并建立了无公害娑罗子质量标准和树立了种植规范。

浙江七叶树种子中七叶皂苷的分离纯化

目的对浙江七叶树种子娑罗子中七叶皂苷的纯化工艺进行研究,以获得最佳纯化工艺和高纯度的七叶皂苷。方法采用超声波法提取七叶皂苷,以D101大孔吸附树脂分离纯化七叶皂苷,并以吸附率和洗脱率为指标优化纯化工艺,D101大孔吸附树脂最佳工艺再配合硅胶柱层析精制七叶皂苷。应用紫外分光光度法跟踪检测七叶皂苷含量,评价纯化效果。结果 D101大孔吸附树脂纯化七叶皂苷的最佳工艺为:静置吸附24h,上样液浓度为30mg/mL,上样速度为2BV/h(树脂床体积),洗脱剂为70%乙醇,洗脱体积为2.5BV,洗脱速度为1.5BV/h。D101大孔吸附树脂最佳工艺联合硅胶柱层析,七叶皂苷纯度可达90%以上。结论此纯化工艺稳定可行,可有效用于浙江七叶树种子娑罗子中七叶皂苷的分离纯化和制备。

HPLC法同时测定14个产地娑罗子中4种七叶皂苷

目的建立HPLC法同时测定14个产地娑罗子Aesculi Semen中七叶皂苷A、B、C、D的含有量。方法娑罗子甲醇提取液的分析采用Waters Xbridge C18柱(4. 6 mm×250 mm,5μm);流动相乙腈-水(含0. 2%磷酸);体积流量1. 0 mL/min;检测波长220 nm;柱温25℃。用DPS、EXCEL软件进行数据分析。结果七叶皂苷A、B、C、D分别在1. 0～10μg/mL (R^2=0. 999 4)、1. 0～10μg/mL (R^2=0. 999 5)、1. 0～10μg/mL (R^2=0. 999 6)、0. 2～2. 0μg/mL(R^2=0. 999 6)范围内线性关系良好,平均加样回收率分别为100. 01%、101. 49%、100. 73%、99. 65%,RSD分别为2. 11%、0. 68%、0. 69%、1. 54%。14个产地间娑罗子中七叶皂苷类成分含有量存在显著(P <0. 05)或极显著(P <0. 01)差异,七叶皂苷A含有量均满足2015年版《中国药典》规定标准,其中陕西、山西、河南产娑罗子中七叶皂苷类成分含有量较高,浙江产娑罗子含有量较低;七叶皂苷含有量与纬度、海拔呈正相关关系,与经度、种子纵径、种子横径呈负相关关系。结论该方法准确稳定,重复性好,可用于娑罗子的质量控制。

娑罗子中抗炎活性成分的计算机虚拟筛选

利用计算机辅助药物设计探究了植物娑罗子中抗炎的活性成分。在TCMSP数据库中利用里宾斯基五规则筛选出娑罗子的化学成分,用SYBYL软件对小分子与抗炎作用相关的16个蛋白靶点进行分子对接,通过对接打分函数(Total Score≥7)筛选出活性成分;采用Discovery Studio软件分析了蛋白复合体的相互作用;利用admetSAR软件分析了对接结果较好的几个化合物的ADMET预测。结果表明:七叶皂苷苷元A与JINK3结合最好,山奈酚与iNOS结合最好,槲皮素和七叶苷与JAK1结合最好,秦皮苷ERK1、JNK3、MIF结合都好;蛋白复合体的分析结果显示疏水作用力和氢键在对接中发挥重要作用。5个化合物的ADMET存在一定的不足,成药时应该稍加修饰使其具有更好的ADMET。此研究为中药娑罗子化学成分的抗炎研究提供了参考,也为新药研发提供了理论基础。

基于SSR标记与化学成分构建十堰地区天师栗核心种质库

目的利用筛选出十堰的天师栗中高多态性SSR位点评价天师栗种质资源的遗传多样性,结合有效药用成分含量,构建十堰地区天师栗核心种质库。方法收集十堰地区114份天师栗种质资源,以七叶树基因组为参考,采用荧光毛细管电泳筛选出高多态性SSR位点,对天师栗种质资源进行遗传多样性分析。利用HPLC测定不同种质干燥娑罗子中七叶皂苷的含量。采用最小距离逐步聚类取样策略(LDSS),根据遗传多样性保留程度初步筛选出核心种质,并对该核心种质与原始种质的遗传多样性参数进行T检验,选择与原种质差异不显著的核心种质为最佳核心种质。结果筛选出13对高多态性SSR分子标记,遗传多样性评价结果表明十堰地区天师栗种质资源遗传多样性较高,遗传分化较小,存在着较大的基因流,114份种质资源未分为不同的亚群,周家坝和辽叶居群间具有较近的遗传亲缘关系,且周家坝居群娑罗子中的七叶皂苷A及七叶皂苷B含量普遍较高。最终筛选出的核心种质共23份,占总种质资源的20.17%,其中周家坝12份样本、辽叶6份样本、普龄5份样本。结论将SSR分子标记与主要有效药用成分结合,采用LDSS取样策略构建十堰地区天师栗种质资源核心种质库的方法具有可行性,能够有效的保存与管理天师栗种质资源,也为当地天师栗品种改良、新品种选育研究等提供了研究基础。

娑罗子中主要活性物质的检测方法

建立娑罗子中主要活性物质的快速检测方法。娑罗子中的主要活性成分为皂苷类中的七叶皂苷,七叶皂苷的主要存在形式为七叶皂苷A、B、C、D。将样品用乙醚回流提取后,离心取上清定容后过滤备用。采用高效液相色谱分析法测定七叶皂苷A、B、C、D含量,色谱条件:柱温30℃,流速1mL/min,流动相为0.1%磷酸水溶液和乙腈(V/V=36:64),等梯度洗脱,检测波长220 nm。七叶皂苷A、B、C、D在检测范围内有良好的线性,相关系数均在0.9995以上,检测限在0.05~0.2μg/mL之间,定量限在0.2~0.8μg/mL之间,加标回收率在86.27%~97.21%之间。此方法适用于天然产物娑罗子中七叶皂苷的含量测定。

七叶皂苷钠通过阻断TGF-β介导的信号通路对急性肺损伤大鼠肺纤维化和炎症因子的影响

目的:观察七叶皂苷钠通过阻断转化生长因子-β(TGF-β)介导的信号通路对急性肺损伤大鼠肺纤维化和炎症因子的影响。方法:采用60只SPF级健康Wistar大鼠,随机分为空白组、模型组、阳性对照组、实验组(七叶皂苷钠组),每组各15只。造模成功后实验组经尾静脉注射七叶皂苷钠注射液(4 mg/kg),空白组、模型组注射生理盐水(4 mL/kg),阳性对照组按照3.6 mg/kg的剂量给予强的松,每天给药1次,连续14 d,于给药后第14天处死各组大鼠,并按设计要求留取标本。结果:模型组大鼠的肺系数、炎症程度、纤维化程度均高于其他3组(P<0.05);阳性对照组与实验组大鼠的肺系数、炎症程度、纤维化程度均高于空白组,但差异无统计学意义(P>0.05);阳性对照组与实验组大鼠的的肺系数、炎症程度、纤维化程度对比,差异均无统计学意义(P>0.05)。阳性对照组与实验组大鼠的炎症程度相较于模型组明显减轻,与空白组则无明显差异;模型组大鼠双肺丧失了绝大部分肺泡结构,其纤维化程度相较于阳性对照组和实验组大鼠明显增加(P<0.05);阳性对照组与实验组大鼠肺泡间隔的胶原沉积情况较轻,其纤维化程度与空白组相比无明显差异阳性对照组、实验组大鼠肺泡灌洗液中炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10均低于模型组(P<0.05);实验组大鼠泡灌洗液中IL-6明显低于阳性对照组(P<0.05)。模型组大鼠肺组织TGF-β、Smad2、Smad3、α-sma表达均高于空白组(P<0.05),而实验组大鼠肺组织TGF-β、Smad2、Smad3、α-sma表达均低于模型组。结论:七叶皂苷钠能明显改善大鼠肺纤维化的生理指标,降低肺纤维化模型大鼠肺泡灌洗液中炎性因子水平,能明显抑制TGF-β/Smad信号通路,为临床治疗急性肺损伤提供了新的选择和研究途径。

娑罗子生长期成分分析研究

目的对中药材娑罗子生长过程中的成分进行分析,以利于寻找娑罗子的最佳采摘时间,指导娑罗子提取物的生产过程控制。方法参照《中国药典》2010年版(一部)娑罗子的高效液相色谱成分检测法,结合娑罗子提取物有效成分的检测方法,建立可行的高效液相色谱法检测。结果娑罗子在开花结果后的生长过程中,随着含量的不断增加,其成分比例也是在不断变化的,成熟期后成分A含量高于成分B。结论可通过该方法确定娑罗子的最佳收获时间,以减少药材批与批间的差异,使药材提取过程的参数更加可控。

基于网络药理学和分子对接探讨娑罗子治疗脑水肿的作用机制

目的:运用网络药理学和分子对接技术分析探讨中药娑罗子治疗脑水肿的潜在靶点及作用机制。方法:基于HERB数据库收集娑罗子化学成分及其靶标基因;通过OMIM、GeneCards、Drug Bank等数据库获取脑水肿疾病靶标基因;将成分靶标、疾病靶标交集部分上传至STRING数据库,构建中药成分靶标-疾病靶标蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络,并计算网络特征值,筛选出关键靶标。借助Metascape分析平台对关键靶标进行基因本体(GO)功能和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,并使用AutoDock软件进行分子对接验证。结果:共获取娑罗子有效活性成分24个,治疗脑水肿交集靶标108个,GO功能富集分析得到2634条生物过程(BP)条目、183条分子功能(MF)条目、72条细胞组分(CC)条目。KEGG通路富集分析结果显示,娑罗子治疗脑水肿涉及的通路包括癌症通路、脂质动脉粥样硬化、磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路、血管内皮生长因子(VEGF)信号通路、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路等。分子对接结果验证了有效成分和关键靶点的相互作用,其中七叶皂苷苷元A、七叶皂苷苷元C与脑水肿相关通路的关键蛋白有较强的对接活性。结论:中药娑罗子治疗脑水肿的效应机制可能与炎症反应、抗氧化应激等相关。

娑罗子肠溶微丸胶囊的制备及质量评价

采用流化床底喷包衣法,对蔗糖丸芯依次包药物层、隔离层和肠溶衣层,制备娑罗子总皂苷提取物肠溶微丸。以微丸上药率、收率、工艺可行性、七叶总皂苷含量及2 h酸中释放量为评价指标,采用单因素试验结合多指标综合评价法优化肠溶微丸处方。照所得优化处方平行制备3批样品,并测得肠溶微丸的平均粒径为665.26μm,堆密度约为0.92 g/mL,脆碎度低于2.5%,总皂苷含量为(101.30±0.79)%。将所得肠溶微丸装入胶囊后进行体外释放度试验。结果显示,该肠溶微丸胶囊的2 h酸中释放量为(5.26±2.25)%,在磷酸盐缓冲液(pH 6.8)介质中45 min时基本释放完全。