利用指纹图谱和网络药理学预测牵牛子抗炎Q-marker

通过UPLC建立了牵牛子的指纹图谱,并测定了主要抗炎成分的含量.通过网络药理学方法,构建了“成分-靶点-通路”网络,分子对接验证了Q-marker的生物活性,并通过RAW264.7细胞实验验证了抗炎活性.建立了16批牵牛子的指纹图谱,指认出7个共有色谱峰:绿原酸、新绿原酸、咖啡酸、异槲皮苷和异绿原酸A、B、C;经网络药理学分析,筛选出7个成分的32个核心靶点和6条关键通路;分子对接配体与受体有较强结合能力;一氧化氮(NO)抑制率结果阐明了牵牛子提取物以及7个成分均有抗炎活性.结果表明:绿原酸、新绿原酸、咖啡酸、异槲皮苷和异绿原酸A、B、C可作为牵牛子的潜在抗炎Q-marker,为牵牛子的质量控制以及合理应用提供依据.

Comparative Study on the Effect of Mongolian Medicine Euphorbia pekinensis and Pharbitidis Semen(Black)

[Objectives]To explore the difference of purgative effect of Mongolian medicine Euphorbia pekinensis and Pharbitidis Semen(black)by animal experiment,taking Euphorbia pekinensis and Pharbitidis Semen(black)as the research object.[Methods]Sixty Kunming mice were randomly divided into blank group(n=20),Euphorbia pekinensis group(n=20)and Pharbitidis Semen(black)group(n=20).After fasted but provided with free acess to drinking water for 3 d,the mice were intragastrically administered with drinking water,Euphorbia pekinensis test solution and Pharbitidis Semen(black)test solution,respectively.The mice were then placed separately in a mouse cage covered with filter paper for purgation test and intestinal propulsion test.[Results]The time of the first purgation in the Euphorbia pekinensis group and the Pharbitidis Semen(black)group was longer than that in the blank group(P<0.05).The total times of purgation and defecation within 5 h in the Euphorbia pekinensis group and the Pharbitidis Semen(black)group were higher than those in the blank group(P<0.05);the purgation index and intestinal propulsion rate in the Euphorbia pekinensis group and the Pharbitidis Semen(black)group were higher than those in the blank group(P<0.05).[Conclusions]The Mongolian medicine Euphorbia pekinensis was similar to Pharbitidis Semen(black)in purgation test and intestinal propulsion test,and could play a substitute role.

牵牛子提取物对朱砂叶螨的生物活性

报道牵牛子提取物对朱砂叶螨的生物活性。牵牛子石油醚提取物质量浓度为2mg·mL-1时,对朱砂叶螨的雌成螨和卵24h后的校正死亡率分别达到93.7%和77.3%,LC50分别为0.6979和1.3037mg·mL-1;对雌成螨24h后的产卵抑制率和驱避率分别达到82.51%和94.54%。萃取物中石油醚相的活性明显高于甲醇相,质量浓度为2mg·mL-1时,石油醚萃取物对朱砂叶螨的雌成螨和卵24h后的校正死亡率分别达到96.2%和82.1%,LC50分别为0.5042和1.1016mg·mL-1;对石油醚萃取物的柱层析分离最终得到流分12个,其中以第8流分杀螨效果最好,质量浓度为2mg·mL-1时,24h对雌成螨的校正死亡率达96.4%,LC50是0.4477mg·mL-1。

牵牛子生品、炒品酚酸类成分的HPLC-MS分析

目的:采用高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS)技术对牵牛子生品、炒品中化学成分进行分析。方法:采用Agilent Eclipse XDB-C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为甲醇-0.1%甲酸梯度洗脱,质谱使用ESI离子源,在负离子模式下扫描,记录总离子流图。结果:从牵牛子生品和炒品中共分离鉴定了9个共有化合物,其中7个酚酸类,1个黄酮苷类,1个酯类。结论:牵牛子炒制前后化学成分发生变化。牵牛子生品、炒品化学成分种类未发现变化,但成分含量发生变化,酚酸类成分咖啡酸、新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸B和异绿原酸C等峰强度均发生变化。其中咖啡酸、绿原酸、异绿原酸B炒后含量降低,新绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸A及异绿原酸C炒后含量升高。

牵牛子化学拆分组分的性味药理学评价及药味归属研究

目的:依据牵牛子的性味临床主要功效与主治建立相应的性味药理学评价体系,对牵牛子化学拆分组分开展中药性味药理学研究,探索牵牛子的不同药味与不同化学拆分组分间的相关性,确定各化学拆分组分药味的归属,阐明牵牛子药味物质基础,并为验证"中药一味一性,一药X味Y性(Y≤X)"的中药性味理论新假说的客观性提供依据。方法:基于中药性(气)味科学内涵的新假说,采用与牵牛子性味功效相关的利尿、化痰、泻下通便、兴奋子宫、抗炎、免疫作用等复合药理学指标作为牵牛子性味药理学评价系统,对牵牛子性味拆分组分的生物学效应进行研究。探索牵牛子的不同药味与不同化学拆分组分间的相关性。根据药理学研究结果,采用文献研究,结合聚类分析,分别从传统中医药学研究方法和现代科学的角度对牵牛子拆分组分进行药味归属,阐明中药药味物质基础。结果:实验结果表明,牵牛子多糖组分、脂肪油组分具有明显增加尿量、化痰、增加大肠推进率作用,其中多糖组分作用极为显著。酚酸组分、树脂苷组分具有促进胃排空、增加小肠推进率、抗炎、免疫增强、兴奋子宫作用,其中酚酸组分大多作用极为明显。聚类分析结果表明,聚成2类进行分析,多糖组分、脂肪油组分为一类,主要与利尿、增加大鼠大肠推进率、化痰有关;酚酸组分、树脂苷组分为一类,主要对增加胃排空率、增加小肠推进率、抗炎、增强免疫、兴奋子宫有关。结论:分别从传统中医药学和现代科学的角度,对牵牛子的拆分组分进行了性味归属:牵牛子不是单药味中药,而是具有苦味和辛味的复合药味中药;牵牛子的苦味、辛味是可拆分的;牵牛子的利尿、增加大肠推进率、化痰作用可能是其苦味的功能体现,其物质基础是多糖组分、脂肪油组分;促进胃、小肠蠕动、抗炎、免疫增强作用、兴奋子宫的作用可能是其辛味的功能体现,其物质基础为酚酸组分、树脂苷组分。

牵牛子化学成分研究

目的 :研究牵牛子泻下的有效成分 ,为建立其质量标准奠定基础。方法 :采用硅胶柱层析和SephadexLH 2 0进行纯化 ,通过各种光谱数据进行结构鉴定。结果 :从牵牛子 70 %乙醇提取物的乙酸乙酯和正丁醇萃取物中分离得到大黄素甲醚 (Ⅰ ) ,大黄素 (Ⅱ ) ,大黄酚 (Ⅲ ) ,咖啡酸乙酯 (Ⅳ ) ,咖啡酸 (Ⅴ ) ,α 乙基 D 吡喃半乳糖苷 (Ⅵ ) ,β胡萝卜甙 (Ⅶ ) ,β谷甾醇 (Ⅷ )。 结论 :化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ为首次从牵牛属植物中分离得到。

黑豆和牵牛子红外光谱的分析与鉴定

种子类中药材黑豆和牵牛子都含有大量的油脂和蛋白质,因此两种药材的一维红外光谱极其相似,为了区别科属不同的两种药材,采用红外光谱三级鉴定法对黑豆和牵牛子进行分析鉴定。经典红外光谱中,黑豆和牵牛子均有1 745cm-1表征油脂类的特征吸收峰,以及1 656和1 547cm-1表征蛋白质酰胺Ⅰ带和酰胺Ⅱ带的特征吸收峰。其中油脂特征吸收峰与蛋白质特征吸收峰的相对高度不同,说明二者的相对含量不同。同时,一维红外光谱对两种中药材主体成分的分析结果,即含有大量的油脂和蛋白质,与文献所报道的一致。在二阶导数红外光谱中,牵牛子中存在1 712cm-1属于有机酸类的特征吸收峰,然而黑豆中却没有此吸收峰的存在。此外导数光谱中两种药材峰形和峰强度的差别更为明显。二维相关红外光谱中,黑豆和牵牛子自动峰的峰位置和峰强度等均具有显著差异。在1 500~1 700cm-1波数范围内,黑豆有2个明显自动峰,牵牛子有3个明显的自动峰。在2 800~3 000cm-1波数范围内,黑豆和牵牛子均有2个强自动峰,但最强自动峰的位置不同。运用红外光谱三级鉴定法,可以更直接快速简便的分辨出主体成分相同的两种种子类中药材,为今后的研究打下基础。

牵牛子对二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌的抑制作用

目的研究牵牛子在二乙基亚硝胺(NDEA)诱发大鼠肝癌中的抑制作用。方法将大鼠分为正常对照组、模型对照组和牵牛子组,采用0.01%NDEA诱发模型对照组和牵牛子组大鼠肝癌90 d,牵牛子组在诱发癌的同时,用含6%牵牛子饲料按40 g·kg-1·d-1剂量喂养。停止诱发,继续喂养30 d后处死大鼠,观察大鼠肝脏的病理改变、肝表面癌结节数、肝质量、肝/体质量比以及血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)、碱性磷酸酶(ALP)的变化。利用单因素方差分析LSD法检验进行统计分析。结果正常对照组大鼠肝表面癌结节数为(0.0±0.0)个,肝质量为(9.87±1.30)g,肝/体质量比为(2.62±0.24)%,血清ALT为(64.10±12.71)U·L-1,γ-GT为(0.80±0.42)U·L-1,ALP为(121.20±37.57)U·L-1。模型对照组大鼠肝表面癌结节数为(27.4±9.5)个,肝质量为(21.38±7.29)g,肝/体质量比为(5.82±2.31)%,血清ALT为(175.70±48.75)U·L-1,γ-GT为(41.80±15.38)U·L-1,ALP为(200.50±35.78)U·L-1。牵牛子组大鼠肝表面癌结节数为(8.6±5.3)个,肝质量为(13.91±3.55)g,肝/体质量比为(3.86±0.76)%,血清ALT为(113.10±45.35)U·L-1,γ-GT为(13.40±6.15)U·L-1,ALP为(155.80±30.26)U·L-1。结果显示,牵牛子组各项指标高于正常对照组,低于模型对照组,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。结论牵牛子能减轻NDEA对肝细胞的损伤,抑制NDEA诱发大鼠肝癌的过度生长。

牵牛子化学成分研究(Ⅱ)

采用硅胶柱层析和Sephadex LH-20凝胶柱层析从牵牛子70%(体积分数)乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物中分离得到8个化合物,经理化及光谱方法鉴定分别为肉桂酸(Ⅰ)、阿魏酸(Ⅱ)、绿原酸(Ⅲ)、氯原酸甲酯(Ⅳ)、氯原酸丙酯(Ⅴ)、大黄酸(Ⅵ)、12-羟基松香酸甲酯(Ⅶ)、12-羟基氢化松香酸甲酯(Ⅷ)。经检索,这些化合物均为首次从牵牛属植物中分离得到。

不同产地牵牛子生品及炒制品咖啡酸含量测定

目的通过测定不同产地牵牛子生品及炒制品中咖啡酸含量,探讨产地和炮制方法对牵牛子质量的影响。方法采用高效液相色谱法测定牵牛子生品及炒制品中咖啡酸的含量。色谱柱:Shim-pack ODS(4.6mm×150mm,5μm);柱温:30℃;流动相:乙腈-0.04%磷酸水溶液,梯度洗脱;检测波长为325nm。结果河南产牵牛子咖啡酸含量最高,山西产牵牛子咖啡酸含量最低,其他产地牵牛子咖啡酸含量居中,牵牛子炒制品较生品中咖啡酸含量均有不同程度的降低。结论不同产地牵牛子咖啡酸含量不同,炮制后,咖啡酸含量降低,咖啡酸可作为牵牛子的评价指标之一。

牵牛子(黑丑、白丑)生熟饮片的紫外谱线组法鉴别研究

目的：建立牵牛子（黑丑、白丑）生熟饮片的紫外谱线组，以鉴别黑丑与白丑，及其生熟饮片。方法：以水、甲醇、乙醇、三氯甲烷和石油醚（60～90℃）为溶剂，对黑丑、白丑生熟饮片进行超声提取，采用紫外分光光度法测定提取液的紫外吸收图谱（200～400hm），建立各样品的紫外谱线组。结果：除水提液外，其他溶剂提取液炒牵牛子比生品牵牛子紫外吸收有增加趋势，黑丑与白丑的水提取液吸收图谱差异明显。结论：牵牛子（黑丑、白丑）生熟饮片水提液的紫外谱线组有明显差异，用紫外谱线组法可以鉴别其生熟饮片。

牵牛子化学成分及其生物活性研究进展

目的对牵牛子的化学成分及生物活性进行综述,为其质量标准研究和综合利用提供参考依据。方法对目前国内外报道的相关文献进行分析、分类和整理。结果牵牛子为临床常用中药,具有泻水通便、消痰涤饮和杀虫攻积等功效,现代药理研究表明其有抑菌抗炎、兴奋子宫平滑肌和抗肿瘤等多种作用。目前牵牛子报道的化学成分约有211个,主要有萜类、树脂糖苷类、酚酸类、脂肪酸类、生物碱类和挥发油类等化合物。结论目前针对牵牛子开拓出安全有效的药物相对较少,明确其药理活性和作用机制仍是牵牛子探究的主要任务。

牵牛子“利水”功效的临床应用研究概述

牵牛子具有泻水通便,消痰涤饮,杀虫攻积之功。临床用于治疗水肿胀满,二便不通,痰饮积聚,气逆喘咳,虫积腹痛等病。牵牛子为国家重点基础研究发展计划(973计划)课题——《基于利水功效的中药药性理论研究》中重点研究对象之一,本文将对牵牛子近年来利水功效临床应用作一概述。

牵牛子历代药性及功用变化及进展

中药药性理论包括性味理论、归经理论、升降浮沉理论及毒性理论等,但随着中医药理论体系的发展,中药药性及功用的描述和记载发生改变。本文查阅本草典籍,对牵牛子的性味、归经、毒性及功效等进行梳理,并与《中华人民共和国药典》及《中药大辞典》等进行对照,发现历代对牵牛子性味、归经的认知发生了较大变化,牵牛子的功效运用随中医学的发展逐渐完善,但对毒性的记载基本没变。

牵牛子的本草考证

通过查阅历代本草典籍,对牵牛子的名称、品种、炮制、症候禁忌等方面进行考证,结果发现牵牛子在历代本草中皆以牵牛或牵牛子为正名记录,但别名众多。其药用品种有两种,裂叶牵牛和圆叶牵牛,整理发现以裂叶牵牛记载更为普遍。牵牛子的炮制方法记载不一,普遍以炒制为主,在宋时就有其关于牵牛子证候禁忌的记载。

牵牛子水煎液对小鼠 H22肝癌皮下移植瘤的抗肿瘤作用和机制

[目的]观察牵牛子水煎液对小鼠H22肝癌皮下移植瘤的抗肿瘤作用,分析其可能的抗肿瘤作用机制。[方法]建立小鼠H22肝癌皮下移植肿瘤模型,于肿瘤接种后次日进行随机分组。给药组用牵牛子水煎液4 g/kg进行15 d灌胃治疗,1次/d;模型组用生理盐水灌胃。通过小鼠体质量、自主活动、肿瘤体积、血常规等指标评价牵牛子水煎液对H22肝癌皮下移植瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用,利用网络药理学分析牵牛子相关靶点和途径。[结果]模型组小鼠体质量显著上升,自主活动下降,中性粒细胞/淋巴细胞比值(NLR)、血小板/淋巴细胞比值(PLR)大;与模型组相比,给药组小鼠体质量增加减缓,自主活动增加,中性粒细胞/淋巴细胞比值(NLR)、血小板/淋巴细胞比值(PLR)小,肿瘤抑制率为33.69%(P<0.05)。网络药理学分析结果筛选出22个牵牛子有效活性成分,PPI网络鉴定了6个核心靶点,涉及30条KEGG通路和29个GO生物过程。[结论]牵牛子水煎液能够抑制小鼠H22肝癌皮下移植瘤的生长,其作用与22个牵牛子活性成分干预TNF信号通路、Toll样受体信号通路、FOXO信号通路、糖酵解或糖异生等途径相关。

基于网络药理学和分子对接的牵牛子抗肿瘤作用机制研究

目的借助网络药理学联合分子对接技术,探究牵牛子抗肿瘤作用的潜在药效物质基础、作用靶点以及作用机制。方法利用TCMSP平台获得牵牛子活性成分及其对应的靶点;整合与肿瘤相关的疾病靶点,与药物靶点取交集获得药物作用于肿瘤的靶点;使用STRING数据库得到PPI网络图;使用Metascape数据库对交集靶点进行GO富集分析以及KEGG富集分析;应用Cytoscape 3.8.2软件构建牵牛子活性成分-肿瘤靶点-作用通路网络图;应用AutoDock vina 1.1.2脚本对预测结果进行对接验证。结果脱水淫羊藿素、β-谷甾醇、8-异戊烯基山柰酚等可能为牵牛子发挥抗肿瘤作用的核心药效成分;PPI网络显示CASP3、JUN、ESR1等为关键作用靶点;通路分析显示肿瘤靶点主要富集于雌激素信号通路、甲状腺激素信号通路、p53信号通路等;分子对接结果显示:牵牛子的核心药效成分与关键肿瘤靶点具有较好的结合能力。结论初步探究了牵牛子抗肿瘤作用的潜在药效物质基础、作用靶点及作用机制,为牵牛子治疗肿瘤的临床应用以及抗肿瘤药物研发提供科学依据。

牵牛子的本草考证

通过查阅历代文献古籍,结合现代文献资料对牵牛子的名称、基原、规格等级和药效等方面进行考证。牵牛子入药常记作“黑丑、白丑”,历代本草中记载的黑丑以裂叶牵牛为主;白丑存在争议,圆叶牵牛或丁香茄儿。一般认为黑丑力速,白丑效迟。药性以苦寒为正,而辛热可能在于皮,可通过去皮、炒黄或蜜炙来降毒。

牵牛子蛋白的提取及抗肿瘤活性评价

利用响应面法对牵牛子黑丑的总蛋白提取进行工艺优化并观察其抗肿瘤活性。采用单因素及响应面法,以牵牛子蛋白提取量为指标,考察料液比、温度和pH三个因素对蛋白质提取量的影响。在经过双酶解法、SephadexG-15凝胶层析后,利用MTT(噻唑蓝)实验观察多肽组分的抗肿瘤活性。响应面优化结果发现影响牵牛子总蛋白质提取的各因素主次顺序为料液比>温度>pH,且最佳提取工艺为:pH 8.0,料液比为1∶50,温度为57℃,牵牛子蛋白提取量为544.608±1.13 mg(n=3),与理论预测相对误差较小。MTT实验结果显示多肽组分GA和GB对人鳞状上皮舌癌细胞SCC9和SCC25活性有显著抑制作用,但对人乳腺癌细胞和肺癌人肺泡基底上皮细胞则没有明显抑制效果。研究结果显示:牵牛子蛋白提取工艺条件合理,其抗肿瘤活性的研究为后期治疗舌鳞状细胞癌临床药物的研发提供科学依据。

经典名方中牵牛子的本草考证

该文通过查阅古代本草、医籍、方书并结合近现代文献资料,对牵牛子药材的名称、基原、产地分布、品质、采收加工与炮制、性味功效及配伍禁忌等进行了系统的本草考证,为相关经典名方的开发与利用提供参考依据。经考证可知,牵牛子始载于《名医别录》,历代皆以“牵牛子”为正名,主流来源为旋花科植物裂叶牵牛Pharbitis nil干燥成熟种子,古今一致;明代《本草纲目》中最早记载的“白牵牛”与今圆叶牵牛P.purpurea相似;古代最早著录的产地为今湖北襄阳一带,其后著录中产地增至全国各地;以颗粒饱满,无杂质者为佳;采收时间古代多为九月,今则多在秋季果实成熟采收,晒干除去杂质备用;古代炮制方法以“酒蒸法、蒸炒至半生半熟、研取头末”为主,近代以来多简化为“清炒法”;性味、归经及功效也随着实践的不断深入而变化和补充,明代前均为“苦、寒,有毒”,明代出现了“辛、热,小毒”之性,功效历经“主下气,治脚满水肿,除风毒,利小便”至“利水通便,祛痰逐饮,消积杀虫”的演变;临床禁忌主要为脾肾虚弱者禁用、脾胃虚弱者禁用、孕妇禁用、不宜同巴豆、巴豆霜同用。基于考证结论,建议开发以牵牛子为主要原料的经典名方时,明确其来源应为旋花科植物裂叶牵牛Pharbitis nil的干燥成熟种子(黑丑系其黑褐色种子,白丑系其米黄色种子),原方中注明炮制要求者皆按要求炮制,未注明要求建议生品入药。