Development and characterization of novel polymorphic microsatellite markers for the Korean freshwater snail Semisulcospira coreana and cross-species amplification using next-generation sequencing

Korean freshwater snails of the genus Semisulcospira are widely distributed across East Asia.It has been a very popular nutritional food in Korea,and is an ecologically important water quality indicator because it lives only in clean water.However,no microsatellite markers have been generated to study the population genetic diversity of this genus.In the present study,we developed and characterized 18 novel microsatellite loci from Semisulcospira coreana genomic DNA.The microsatellites were isolated using 454 GS-FLX titanium sequencing and 18 markers were used for genotyping in S.coreana.In addition,we also tested the cross-species transferability of the microsatellite markers in four additional Semisulcospira spp.We identified 18 polymorphic loci and the number of alleles per loci,and their polymorphism information content values ranged from 2 to 17 and 0.203 to 0.902,respectively.The observed and expected heterozygosities of the loci ranged from 0.063 to 0.924 and 0.226 to 0.924,respectively.According to the analysis of the cross-species transferability of these markers,four species,S.forticosta,S.gottschei,S.tegulata,and S.libertina,showed a very high transferability(80%–85%).These results show that this set of nuclear markers could be useful for population genetics studies of this species and closely related species.

氨氮和重金属Cu^(2+)对放逸短沟蜷的急性毒性及氧化胁迫效应

为了解放逸短沟蜷在环境胁迫下的生存能力,开展了氨氮和铜离子(Cu^(2+))对放逸短沟蜷的急性毒性试验。分别在氨氮和Cu^(2+)胁迫状态下,测定在放逸短沟蜷肝脏中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量的变化。结果表明,在氨氮胁迫下,放逸短沟蜷的安全浓度为3.51 mg/L;在Cu^(2+)的胁迫下,放逸短沟蜷的安全浓度为0.0835 mg/L。分别在低浓度和高浓度氨氮的胁迫下,随着胁迫时间的增加,放逸短沟蜷肝脏中的CAT和SOD活性均呈现先降低后升高的波浪式变化,而丙二醛(MDA)含量逐渐增加,且低、高浓度处理组均低于对照组并有显著的差异(P<0.05);分别在低浓度和高浓度Cu^(2+)胁迫下,随着胁迫时间的增加,放逸短沟蜷肝脏中的CAT和SOD活性均呈现先降低后升高的趋势,其肝脏中MDA含量增加,低、高浓度处理组均与对照组有显著差异(P<0.05)。指出,肝脏中MDA含量的增加,抑制了SOD和CAT的活性,导致放逸短沟蜷逐渐失去运动能力。

饲育条件下Semisulcospiens decipiens的生长

在饲育温度条件下研究了Ｓ．ｄｅｃｉｐｉｅｎｓ的生长和产仔数及与饲育水温的关系。结果表明水温在上升期和下降期，新生贝和稚贝的生长速度较快，产仔数也较多．成体贝在水温１１℃～２９℃时，都可产出新生贝，以１８℃～２４℃时产出较多．在高温饲育条件下，成体贝的生长速度缓慢。

广州北部山区并殖吸虫流行分布现状初步研究

目的调查广州北部山区并殖吸虫流行分布现状。方法采集并解剖调查点山溪中螺蛳、溪蟹,检查并殖吸虫尾蚴、囊蚴。用所获囊蚴人工感染猫、犬,解剖猫、犬查找并殖吸虫成虫。取成虫样本,进行COI基因I、TS2基因序列分析,与GenBank检索并殖吸虫,COI基因与ITS2基因序列相比较。结果良口螺蛳尾蚴感染率0.32%(4/1 210),螺种为放逸短沟蜷。溪蟹囊蚴感染率100%(35/35)。感染度:79.4个囊蚴/只蟹,11.12个囊蚴/g蟹,最高只蟹检出囊蚴1 050个,蟹种平和华溪蟹。南昆山螺蛳尾蚴感染率0.15%(3/2 000),螺种为放逸短沟蜷。溪蟹囊蚴感染率100%(59/59),感染度:105.66个/只蟹,7.87个/g蟹。蟹种为平和华溪蟹。吕田螺蛳尾蚴感染率0.03%(1/310),螺蛳种为拟钉螺。溪蟹囊蚴感染率36.73%(36/98),感染度4.55个囊蚴/只蟹,0.53个囊蚴/g蟹,蟹种为平远南海溪蟹。良口和南昆山成虫COII、TS2基因DNA序列与GenBank检索卫氏并殖吸虫COII、TS2基因序列相比较:同源性分别为99%、98%和98%、97%。结论广州北部山区新发现卫氏并殖吸虫超高度疫源地两处,两疫源地虫种无差异。斯氏狸殖吸虫中度疫源地一处。

粤北山区并殖吸虫流行分布现状初步研究

目的了解粤北地区并殖吸虫流行分布现状。方法采集并解剖每处调查点山溪中螺蛳及溪蟹,查找并殖吸虫尾蚴和囊蚴。以所获囊蚴人工感染猫、犬,解剖猫、犬查找并殖吸虫成虫。取成虫样本,与GenBank里并殖吸虫的COI基因与ITS2基因序列比对,进行基因序列分析。结果里东、叟里元、下洞河、太坪和小坑5处调查点溪蟹三平正并殖吸虫囊蚴感染率分别为74.54﹪(41/53)、68.91﹪(32/47)、77.77﹪(24/32)、76.92﹪(40/52)和81.5%(22/27),溪蟹物种均鉴定为平和华溪蟹。与GenBank三平正并殖吸虫基因序列比对,5处成虫样本COI基因同源性分别为99.5%、100%、99.5%、99.5%和100%,ITS2基因同源性为100%。大洞调查点的螺蛳检出并殖吸虫短尾尾蚴,感染率为0.058%(1/1,700),螺蛳物种鉴定为放逸短沟蜷,溪蟹检出卫氏并殖吸虫囊蚴,感染率为38.09%(32/84),溪蟹物种亦鉴定为平和华溪蟹。大洞成虫样本COI基因与卫氏并殖吸虫同源性100%,ITS2基因与卫氏并殖吸虫同源性99.5%。结论粤北地区新发现三平正并殖吸虫高度疫源地5处,第二中间宿主为平和华溪蟹。5处疫源地虫种间无差异。卫氏并殖吸虫高度疫源地1处,第一中间宿主为放逸短沟蜷,第二中间宿主为平和华溪蟹。

浙西山区水库小流域放逸短沟蜷的空间格局

放逸短沟蜷(Semisulcospira libertina)是浙西山区水库小流域底栖螺类的优势种,定量采集不同环境条件的9个样点的标本,分别采用Taylor幂法则、Iwao聚集格局回归分析法及Morisita指数公式计算和统计分析,结果显示,所调查流域的放逸短沟蜷种群密度差异极显著,其种群空间格局理论上属于聚集型负二项分布,主要是由环境污染和流域底质所致.

福建省屏南县并殖吸虫第一中间宿主及其尾蚴感染情况调查

目的调查屏南县并殖吸虫第一中间宿主及其尾蚴感染情况,为当地预防并殖吸虫病提供依据。方法以并殖吸虫病例为线索,前往患者捕食生溪蟹地——福建省屏南县代溪镇天峰村溪坑内采集螺蛳标本,考察其孳生环境,并根据螺的形态学特征定种。采用直接压片法检查螺蛳并殖吸虫尾蚴感染情况,计算感染率,并对尾蚴进行形态学鉴定。结果共采集到3种螺蛳,经形态学鉴定为建瓯拟小豆螺、拟沼螺和放逸短沟蜷。共检查建瓯拟小豆螺2341只,查出并殖吸虫尾蚴阳性螺6只,感染率0.26%;检查拟沼螺1276只和放逸短沟蜷2215只,均未查到尾蚴。查出尾蚴经形态学鉴定为斯氏并殖吸虫的尾蚴。结论福建屏南县代溪镇天峰村是新发现的斯氏并殖吸虫病自然疫源地,需引起警惕。应加强并殖吸虫病相关健康教育宣传工作,防止斯氏并殖吸虫病在局部地区流行。

浙江省6种短沟蜷足肌全蛋白SDS-PAGE图谱的比较研究

目的探讨短沟蜷属螺类生化特性和种间差异,以及对传播卫氏并殖吸虫病的意义。方法采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE),对浙江省6种短沟蜷(Semisulcospira)螺类的足肌全蛋白区带进行比较研究。结果各螺种出现率在50%以上的多肽区带为17～20条,分子量在27～162kDa之间。其中仅有2条强多肽区带完全一致,分子量为93kDa和52kDa。各种间特征性区带主要表现在其染色特性上,全蛋白种间相似系数(Sm)在0.74～0.85之间。结论结合短沟蜷属螺类形态学特点,两条多肽主带,可作为该属的生化分类指标,对传播人体并殖吸虫病可能具有意义。

浙江省开化县放逸短沟蜷螺带菌状态的调查研究

[目的]了解浙江省开化县放逸短沟蜷螺的带菌状态。[方法]从开化县龙山溪溪流中采集放逸短沟蜷螺样本,进行细菌培养及鉴定,观察放逸短沟蜷螺中并殖吸虫尾蚴的感染情况。[结果]放养过放逸短沟蜷螺的水标本中菌落数量大于2 000个/ml,呈密集状态,细菌呈长椭圆形或长杆状。未发现放逸短沟螺蛳活组织存在并殖吸虫尾蚴感染。[结论]开化放逸短沟蜷螺带菌状态严重,应注意防止饮用水污染。

Systematic relationships of Chinese freshwater semisulcospirids (Gastropoda, Cerithioidea) revealed by mitochondrial sequences

The systematics of Semisulcospiridae in China is revised here based on morphological characters and mitochondrial phylogenetics. Phylogenetic relationships within the Chinese semisulcospirids were assessed via DNA sequences from mitochondrial analysis (cytochrome c oxidase I and 16S rRNA). This research contains most morphospecies of semisulcospirids previously recorded in China. Based on these results, the family of Chinese Semisulcospiridae is represented by three genera: i.e., viviparous Semisulcospira B?ttger, 1886, oviparous Hua Chen, 1943 and Koreoleptoxis Burch and Jung, 1988. These genera can be distinguished from each other by reproductive anatomy, reproductive mode, and radula features. Species of Hua are mainly distributed in southwest China and Guangxi, whereas Koreoleptoxis and Semisulcospira are mainly distributed in south and northeast China.

福建省并殖吸虫第1中间宿主种类、分布及感染率的调查

[目的 ]调查福建省并殖吸虫第 1中间宿主淡水螺的种类、地理分布和感染率。[方法 ]捕捉各地淡水螺类 ,检查其所携带不同虫种的并殖吸虫尾蚴感染率。[结果 ]在 2 5个县中 ,发现全省有 6种淡水螺类可充当并殖吸虫第 1中间宿主 ,即放逸短沟蜷、湖北钉螺闽亚种、福建拟钉螺、建瓯洱海螺、小桥拟钉螺和新店拟钉螺 ,其感染率 ( % )分别为 0 2 6、0 5 3、0 15、0 49、0 15和 6 5 7;放逸短沟蜷分布较广。[结论

温度在饲育条件下对Semisulcopira decipiens的产仔数和稚贝生长的影响

在饲育条件下研究了S．decipiens的产仔数和稚贝生长及与水温的关系。结果表明:水温在上升期和下降期,新生贝和稚贝的生长速度较快,产仔数也较多,成体贝在水温17℃-31℃时,都可以产生新生贝,以21℃-25℃时产出较多,在高温条件下,成体贝的生长速度缓慢。

鄱阳湖流域五河水系放逸短沟蜷群体遗传结构初步分析

鄱阳湖流域位于长江中游末段南岸，由鄱阳湖、五河水系（赣江、抚河、信江、饶河、修河）及丘陵山地等构成独立完整的自然地理单元，是长江流域的重要组成部分。鄱阳湖流域淡水贝类资源特别丰富，共记录淡水贝类122种．约占长江水系淡水贝类总数的40．4％。

放逸短沟蜷断顶现象成因初探

在安徽省黟县洪星乡河流中的放逸短沟蜷断顶现象严重。本文对此断顶现象提出了河流流速和流段两个假说。通过比较在不同流速和流段的样方中取得之样本的螺体长和螺口宽的比值,证明放逸短沟蜷的断顶现象自上游至下游而愈发严重,而流速对其影响却很小。表明流段是影响放逸短沟蜷断顶的关键因素,而流速对于放逸短沟蜷断顶没有显著影响。

广西地区3种螺的含肉率及营养成分分析

采用国标法测定了广西地区的中国圆田螺、方格短沟蜷和环棱螺的含肉率及营养成分。结果表明:中国圆田螺、方格短沟蜷、环棱螺的含肉率分别为21.37%、14.45%和11.21%,中国圆田螺的含肉率分别比方格短沟蜷和环棱螺高47.89%(p<0.05)和90.63%(p<0.01)。3种螺肉水分、粗蛋白质及粗脂肪含量的差异均不明显。但钙、磷、铁、锌含量的差异显著,环棱螺的钙、锌含量均高于中国圆田螺(p<0.05)和方格短沟蜷(p<0.05),方格短沟蜷的磷含量高于中国圆田螺和环棱螺(p<0.05),中国圆田螺的铁含量高于方格短沟蜷(p<0.05)。

放逸短沟蜷体内并殖吸虫尾蚴、子雷蚴与类似吸虫幼虫的比较

本文报告在福建省可分别充当卫氏并殖、三平正并殖第一中间宿主的放逸短沟蜷体内发现的二倍体型卫氏并殖吸虫的尾蚴、子雷蚴同类似吸虫幼虫的比较研究。总共检查捕自邵武等县（市）１３０２５只螺蛳，发现并殖吸虫与类似者的尾蚴、子雷蚴分别为３３只（０．２５％）与８３只（０．６３％），各地的标本检查结果见表１。两者的尾蚴、子雷蚴检测结果的比较见表２、３。这些结果显示：两者的子雷蚴在形态及大小上非常近似，而尾蚴则有差别，同并殖吸虫尾比较，类似者个体小（约１８０μｍ），组织结构模糊，腹吸盘下方凹陷呈“Ｙ”字型（并殖吸虫尾蚴为倒三角形），感染率高且可在非并殖吸虫疫区发现，实验感染溪蟹或狗、猫不能获得并殖吸虫囊蚴或成、幼虫。

广东省部分地区卫氏并殖吸虫分布与DNA序列分析

目的调查广东省卫氏并殖吸虫分布现状。方法解剖采集自广东省从化市良口、龙门县南昆山、乐昌市大洞和平远县木溪与郭屋等5个调查点山溪的螺蛳及溪蟹,检查卫氏并殖吸虫尾蚴、囊蚴。以所获囊蚴人工感染家猫、犬,解剖查找并殖吸虫成虫。取成虫样本,进行线粒体细胞色素C氧化酶亚单位I基因(COI基因)和核糖体基因第二间隔区(ITS2基因)基因序列分析,并与GenBank中现存并殖吸虫的COI、ITS2基因序列进行比对。结果良口、南昆山、大洞、木溪和郭屋5处疫源地的第一中间宿主螺蛳鉴定均为放逸短沟蜷,其尾蚴感染率分别为0.33%、0.15%、0.058%、0.10%和0.05%;第二中间宿主溪蟹鉴定均为平和华溪蟹,其囊蚴感染率分别为100%、100%、38.09%、55.36%和65.26%。良口、南昆山、大洞、木溪和郭屋平均每只蟹检出囊蚴数量分别为79.4、105.66、9.16、16.18个和15.6个,平均每克蟹含囊蚴数量分别为11.12、7.87、0.58、0.69个及0.85个,囊蚴鉴定均为卫氏并殖吸虫。人工感染家猫、犬体内检获卫氏并殖吸虫成虫与虫卵。良口、南昆山、大洞、木溪和郭屋5处调查点卫氏并殖吸虫成虫样本COI基因序列与GenBank中的AF219379.21、AF540958.1号基因序列同源性分别为99%、99%、99%、98%、99%,ITS2基因序列与DQ836243.1、DQ351845.1、AB354217.1号同种基因同源性分别为98%、99%、98%、98%、98%。结论广东省新发现2处卫氏并殖吸虫超高度疫源地和3处卫氏并殖吸虫高度疫源地,5地虫种间无明显差异。

乐昌市新发现一处卫氏并殖吸虫疫源地报告

目的了解粤北乐昌市并殖吸虫流行分布现状。方法采集大洞村调查点山溪中螺蛳1 700余只、溪蟹88只,检查并殖吸虫尾蚴、囊蚴。应用检出的并殖吸虫囊蚴人工感染家猫1只,收集猫粪便,检查并殖吸虫虫卵,解剖粪检虫卵阳性猫,查找并殖吸虫成虫。结果大洞村螺蛳中短尾尾蚴感染率为0.58‰(1/1 700),螺蛳鉴定为放逸短沟蜷。蟹体卫氏并殖吸虫囊蚴感染率为38.09%(32/84),溪蟹鉴定为平和华溪蟹。解剖人工感染虫卵的阳性猫,检获P.w成虫4条。结论乐昌市乐城镇大洞村为一新发现的卫氏并殖吸虫高度(II级)自然疫源地,疾病预防控制中心与医疗卫部门及政府应高度重视。

福建省政和县东部并殖吸虫病疫源地调查

目的对福建省政和县东部并殖吸虫虫种、宿主种类及其感染率进行调查,以确定当地并殖吸虫病疫源地。方法采集政和县当地淡水螺、蟹及野猫粪便,检查螺体内并殖吸虫尾蚴、蟹体内囊蚴和野猫粪便中的虫卵。结果共检查1 035只放逸短沟蜷和4 890只建瓯拟小豆螺;仅在建瓯拟小豆螺体内发现并殖吸虫尾蚴,其感染率为0.10%(5/4 890)。检查政和博特溪蟹34只,其中29只感染斯氏并殖吸虫囊蚴,感染率为85.29%,每只蟹及每克蟹组织平均囊蚴数分别为3.85个和0.62个;检查福建华溪蟹36只,其中14只感染卫氏并殖吸虫囊蚴,感染率为38.89%,每只蟹及每克蟹组织平均囊蚴数分别为6.43个和0.03个。2份野猫粪便中有1份检获并殖吸虫虫卵。结论福建省政和县东部存在由斯氏并殖吸虫和卫氏并殖吸虫引发的中、高度疫源地。

政和县并殖吸虫病病原学调查

目的调查福建省政和县并殖吸虫病病原虫种、宿主及其感染率。方法收集全县每个乡镇各1~2个村的螺、蟹及野猫粪便标本,做并殖吸虫尾蚴、囊蚴的感染率、感染度及虫卵检查。结果卫氏并殖吸虫和斯氏并殖吸虫两种成虫取自溪蟹中的囊蚴感染猫。放逸短沟蜷为卫氏并殖吸虫第一中间宿主,感染率为0.05%(2/3 674),建瓯拟小豆螺为斯氏并殖吸虫第一中间宿主,感染率为0.29%(16/5 641);小桥拟钉螺无阳性发现。检查福建华溪蟹、中华绒螯蟹、浙江华溪蟹闽东亚种、政和博特溪蟹新种和福建博特溪蟹共387只,发现囊蚴者74只,阳性率为19.12%;其中福建博特溪蟹、中华绒螯蟹和浙江华溪蟹闽东亚种均无阳性发现。4份野猫粪便中的1份检出并殖吸虫虫卵。结论政和县为卫氏并殖吸虫病和斯氏并殖吸虫病的疫源地,放逸短沟蜷、建瓯拟小豆螺为主要第一中间宿主;福建华溪蟹和政和博特溪蟹为主要第二中间宿主,野猫为保虫宿主。