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实验小鼠Sendai病毒抗体ELISA方法标准化的研究 被引量:4
1
作者 贺争鸣 卫礼 +2 位作者 吴惠英 刘佐民 张然 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 1992年第4期13-15,共3页
在建立Sendai病毒抗体ELISA检测方法的基础上,我们开展了对其敏感性、特异性、重复性等方面的研究,并应用于对不同等级实验小鼠群Sendai病毒抗体的检测中。通过对ELISA系统的测试和改进,使之达到标准化,提高了实验结果的准确性。
关键词 sendai病毒 elisa 标准化 抗体
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The Development and Application of an Indirect ELISA Test for the Detection of Chicken Anaemia Virus (CAV) by VP1 in Chicken Flock Serum
2
作者 Elham O. Mahgoub 《Open Journal of Genetics》 2014年第4期316-331,共16页
Chicken anaemia virus (CAV) causes a viral disease in chickens worldwide and thus has economic importance. The main aim of this study was to develop a rapid, sensitive and specific VP1-CAVI indirect ELISA for the dete... Chicken anaemia virus (CAV) causes a viral disease in chickens worldwide and thus has economic importance. The main aim of this study was to develop a rapid, sensitive and specific VP1-CAVI indirect ELISA for the detection of CAV infection. The CAV-VP1, was separately cloned and expressed in recombinant E. coli. The purified recombinant CAV-VP1 protein was then coated as an antigen on an ELISA plates to evaluate its reactivity against chicken sera. The resulting indirect ELISA was then compared with a commercial ELISA. The specificity and sensitivity of the indirect ELISA were measured as 93.3% and 100%, respectively. A t-test produced a t-value of 15.805 for the indirect ELISA and revealed a significant difference between CAV-positive serum and CAV-negative serum (p-value of 0.001). For the second variable (i.e., a commercial ELISA), the t-test yielded a t-value of 5.063, which revealed a significant difference between CAV-positive serum and CAV-negative serum (p-value of 0.015). This intervention produces statistically significant improvements in both variables (p-values < 0.05). The correlation coefficient for the indirect ELISA was r = 0.93. Therefore, this work can be considered as a new achievement in diagnosis for Chicken anaemia virus in chicken flocks. 展开更多
关键词 Indirect elisa Commercial elisa CHICKEN ANAEMIA virus Recombinant Protein VP1 Sensitivity Specificity Standard Curve for Indirect elisa
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牛病毒性腹泻病毒抗原捕获ELISA检测方法的标准化研究 被引量:6
3
作者 邓宇 王新华 +2 位作者 郭燕 钟发刚 沈敏 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期541-544,549,共5页
用纯化牛病毒性腹泻病毒免疫蛋鸡制备出的卵黄抗体作为包被抗体,采用自制的单抗为一抗,建立牛病毒性腹泻病毒抗原捕获ELISA方法。通过试验确定,抗牛病毒性腹泻病毒卵黄抗体最佳包被浓度为1:50;McAb最适稀释浓度为1:10,HRP-羊抗鼠IgG工... 用纯化牛病毒性腹泻病毒免疫蛋鸡制备出的卵黄抗体作为包被抗体,采用自制的单抗为一抗,建立牛病毒性腹泻病毒抗原捕获ELISA方法。通过试验确定,抗牛病毒性腹泻病毒卵黄抗体最佳包被浓度为1:50;McAb最适稀释浓度为1:10,HRP-羊抗鼠IgG工作浓度为1:800。通过引入牛病毒性腹泻病毒质控血清进行质控检验,该方法所得检测结果均在质量控制范围内,达到预定标准化要求。标准化的抗原捕获ELISA方法具有特异、灵敏、可靠、方便、快捷等特点,可广泛应用推广,为我国牛病毒性腹泻病毒监测提供了行之有效的技术手段。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 抗原捕获elisa 标准化
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小鼠仙台病毒ELISA抗体检测规范化试剂盒的研制与应用 被引量:3
4
作者 向志光 佟巍 +5 位作者 刘先菊 张丽芳 李雨函 王艳蓉 刘云波 魏强 《中国比较医学杂志》 CAS 2012年第11期41-45,共5页
目的按照实验动物国家标准和农业部对于兽医诊断制品的要求研制小鼠仙台病毒抗体检测试剂盒,并在临床检测中分析其适用性。方法建立仙台病毒的种子批和BHK-21细胞的细胞库;标化仙台病毒生产工艺、抗原蛋白纯化工艺;优化ELISA反应板体系... 目的按照实验动物国家标准和农业部对于兽医诊断制品的要求研制小鼠仙台病毒抗体检测试剂盒,并在临床检测中分析其适用性。方法建立仙台病毒的种子批和BHK-21细胞的细胞库;标化仙台病毒生产工艺、抗原蛋白纯化工艺;优化ELISA反应板体系;标化质控血清。使用规范化的ELISA试剂盒对我单位672份送检血清样品进行检测,使用IFA和Western blot方法进行复检。结果病毒的种子批检验表明在-80℃保存半年以上毒力稳定;病毒生产和抗原纯化工艺的标准化提高了抗原生产的稳定性;对照体系的设定降低了环境等变量对于结果判定的影响。在对临床样本的检测过程中发现3种方法的灵敏度ELISA高于Western blot高于IFA。结论规范化的小鼠仙台病毒ELISA抗体检测试剂盒能对小鼠仙台病毒感染状况作出准确判断,具有一定的稳定性和结果可重复性。 展开更多
关键词 小鼠 仙台病毒 elisa 规范化
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长爪沙鼠仙台病毒(SeV)抗体ELISA检测方法的建立与应用 被引量:2
5
作者 王吉 卫礼 +5 位作者 付瑞 李晓波 王淑菁 巩薇 岳秉飞 贺争鸣 《实验动物科学》 2015年第6期39-43,共5页
目的建立长爪沙鼠仙台病毒(Se V)抗体ELISA检测方法,用于长爪沙鼠体内仙台病毒抗体的检测。方法孵育鸡胚,接种Se V,制备鸡胚尿囊液正常抗原和Se V特异抗原,滴定酶结合物和抗原最佳工作浓度,并进行特异性、敏感性、精密性、稳定性实验。... 目的建立长爪沙鼠仙台病毒(Se V)抗体ELISA检测方法,用于长爪沙鼠体内仙台病毒抗体的检测。方法孵育鸡胚,接种Se V,制备鸡胚尿囊液正常抗原和Se V特异抗原,滴定酶结合物和抗原最佳工作浓度,并进行特异性、敏感性、精密性、稳定性实验。结果正常抗原、特异抗原和酶结合物最佳工作浓度分别为0.1μg/m L、2μg/m L和1∶5 000;正常抗原、特异抗原批内变异系数分别为9.6%和8.4%,批间平均变异系数分别为9.0%和5.9%;检测灵敏度为1∶10 240;与沙鼠小鼠肝炎病毒(MHV)、小鼠肺炎(PVM)、呼肠孤病毒3型(Reo3)均无交叉反应。稳定性试验相对偏差小于25%。结论建立的ELISA方法特异性、敏感性强,重复性、稳定性好,检测结果,准确、可靠。可用于长爪沙鼠体内Se V抗体的检测。 展开更多
关键词 仙台病毒 elisa 长爪沙鼠
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五种国产与进口小鼠病毒ELISA抗体检测试剂盒的比较研究 被引量:1
6
作者 王吉 卫礼 +3 位作者 付瑞 李晓波 岳秉飞 贺争鸣 《中国比较医学杂志》 CAS 2012年第12期4-7,共4页
目的评价国产小鼠病毒抗体ELISA检测试剂盒。方法选择国产与进口小鼠淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)、肝炎病毒(MHV)、仙台病毒(SV)、腺病毒(MAV)、细小病毒(MPV)ELISA抗体检测试剂盒,进行敏感性、特异性、精密性、稳定性、可信度试验... 目的评价国产小鼠病毒抗体ELISA检测试剂盒。方法选择国产与进口小鼠淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)、肝炎病毒(MHV)、仙台病毒(SV)、腺病毒(MAV)、细小病毒(MPV)ELISA抗体检测试剂盒,进行敏感性、特异性、精密性、稳定性、可信度试验比较。结果国产与进口试剂盒:同种试剂盒之间灵敏度相差最低为2倍,差异显著(P<0.05),最高为16倍,差异极显著(P<0.01);特异性试验显示每种试剂盒,与其他4种病毒均无交叉反应;精密性试验显示5种试剂盒批内平均变异系数均小于10%;稳定性试验显示5种试剂盒相对偏差均小于25%;分别选择已知36份小鼠血清进行检测,国产和进口LCMV、MHV、SV、MPV符合率均为100%;国产MAV符合率为86.1%,进口MAV符合率均为100%,二者之间差异极显著(P<0.01)。结论除国产MAV试剂盒敏感性、可信度低于进口外,国产LCMV、MHV、SV、MPV试剂盒与进口同种试剂盒相比,在敏感性、特异性、精密性、稳定性和可信度方面均良好。 展开更多
关键词 elisa检测试剂盒 比较研究 淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒 小鼠肝炎病毒 仙台病毒 腺病毒 小鼠细小病毒
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ELISA 法用于马抗狂犬病毒抗体的检测 被引量:2
7
作者 陈孝婷 王盟 +1 位作者 马筱玲 刘哈霆 《微生物学免疫学进展》 1997年第2期42-45,共4页
本文建立了ELISA间接法,用以检测精制(马)抗狂犬病血清(或血浆)制造过程中的中和抗体效价,并与传统的小鼠脑内中和法比较。结果表明(1)两种检测方法对不同水平抗体的检出是一致的。它们之间有很好的线性关系(y=2.1... 本文建立了ELISA间接法,用以检测精制(马)抗狂犬病血清(或血浆)制造过程中的中和抗体效价,并与传统的小鼠脑内中和法比较。结果表明(1)两种检测方法对不同水平抗体的检出是一致的。它们之间有很好的线性关系(y=2.17x+21,r=0.99,p<0.01)。(2)应用ELISA间接法测定马抗狂犬病血清效价简便、快速、特异性及重复性好,可代替小鼠脑内中和法。 展开更多
关键词 狂犬病 抗血清 elisa 中和抗体 研制
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小鼠脑脊髓炎病毒标准血清制备及间接ELISA检测方法的应用 被引量:1
8
作者 谢军芳 佟巍 +5 位作者 侯丽波 乔红伟 丛喆 王卫 蒋虹 魏强 《中国比较医学杂志》 CAS 2009年第12期5-9,共5页
目的制备小鼠脑脊髓炎病毒(TMEV)标准血清,建立ELISA检测方法,实现一种病毒多种检测方法的比对研究。方法用TMEV感染3周龄SPF级BALB/c小鼠,制备免疫用抗原。分别在0、7、14d以腹腔注射的方式免疫SPF级6-8周龄BALB/c小鼠,免疫血... 目的制备小鼠脑脊髓炎病毒(TMEV)标准血清,建立ELISA检测方法,实现一种病毒多种检测方法的比对研究。方法用TMEV感染3周龄SPF级BALB/c小鼠,制备免疫用抗原。分别在0、7、14d以腹腔注射的方式免疫SPF级6-8周龄BALB/c小鼠,免疫血清用IFA、IEA法进行鉴定;TMEV感染BHK-21细胞,制备EHSA抗原,确定酶结合物、抗原和标准阳性血清的最佳工作浓度,建立TMEVEHSA检测方法,进行敏感性、特异性、重复性和稳定性实验。结果制备TMEV免疫血清,以IFA、IEA测定血清效价分别为1:640和1:320,与痘苗病毒、小鼠肺炎病毒、小鼠肝炎病毒、仙台病毒和呼肠孤病毒-Ⅲ型均无交叉反应;建立了ELISA检测方法,确立了各种试剂的最佳工作浓度,其中酶结合物最佳工作浓度为1:10000,抗原为2.5μg/mL,阳性参考血清为1:200;EHSA检测灵敏度为1:3200。板内特异抗原、正常抗原平均变异系数为4.67%和5.7%,板间为4.39%和7.61%。稳定性实验相对偏差均小于20%。结论本研究制备的TMEV免疫血清可作为血清学检测方法中的标准质控血清;建立的ELISA方法重复性、稳定性好,敏感性和特异性强,可用于小鼠脑脊髓炎病毒血清抗体检测。 展开更多
关键词 小鼠脑脊髓炎病毒(TMEV) 标准血清 elisa
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大鼠仙台病毒ELISA、间接免疫荧光和免疫印迹三种检测方法比较 被引量:7
9
作者 向志光 佟巍 +4 位作者 李雨函 刘先菊 张丽芳 王艳蓉 魏强 《中国比较医学杂志》 CAS 2013年第1期23-26,共4页
目的比较ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay)、IFA(immuno-fluorescence assay)和WB(Western blot)三种方法在大鼠仙台病毒血清学检测中的差异。方法仙台病毒蛋白抗原经凝胶电泳分离转移后用于血清学检测的WB方法;使用IFA、ELIS... 目的比较ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay)、IFA(immuno-fluorescence assay)和WB(Western blot)三种方法在大鼠仙台病毒血清学检测中的差异。方法仙台病毒蛋白抗原经凝胶电泳分离转移后用于血清学检测的WB方法;使用IFA、ELISA方法对20份无菌大鼠、227份SPF大鼠以及63份清洁级大鼠送检血清样品进行检测,阳性及可疑样品用WB方法进行了验证。结果 20份无菌大鼠血清样品被3种方法检测为仙台病毒抗体阴性;SPF级大鼠样品被IFA方法判定为阴性,1.32%(3/227)被ELISA方法判定为阳性,其中有2/3被WB确认为阳性;ELISA、IFA和WB在清洁级大鼠样品中检出仙台病毒的阳性率分别为为18.12%、11.34%和15.87%。结论三种检测方法灵敏度从高到低依次为ELISA、WB和IFA。WB方法可作为IFA和ELISA难以确定结果的替代方法。 展开更多
关键词 仙台病毒 elisa IFA Westernblot
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实验大鼠仙台病毒抗体检测能力验证结果评价 被引量:8
10
作者 李晓波 付瑞 +9 位作者 王洪 王吉 卫礼 王淑菁 邢进 冯育芳 李威 王莎莎 贺争鸣 岳秉飞 《实验动物科学》 2017年第1期1-6,共6页
目的了解全国实验动物检测相关实验室在大鼠仙台病毒抗体检测项目上的技术水平,发现并解决检验中存在的问题,促进各实验室加强质量管理,提高检测水平。方法制备标准实验大鼠血清样品,经过标定后分装,按照CNAS的要求进行均一性和稳定性验... 目的了解全国实验动物检测相关实验室在大鼠仙台病毒抗体检测项目上的技术水平,发现并解决检验中存在的问题,促进各实验室加强质量管理,提高检测水平。方法制备标准实验大鼠血清样品,经过标定后分装,按照CNAS的要求进行均一性和稳定性验证,标定好的样品随机编号并随机发放给各参加实验室,每个实验室3个样本,在规定时间内反馈结果,结果以阳性或阴性表示,与预期结果均一致者判为满意结果,不完全一致或逾期未反馈结果者判为不满意。结果来自18个省市自治区的28家单位报名参加本次比对实验,均在规定时间反馈了结果,其中25家单位获得满意结果,占参加比对实验室的89.3%;结果不满意的3家单位,其中1家有1个样品与预期结果不符,另外2家均有2个样品与结果不符。28家单位中有27家采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测,另外1家用免疫荧光法(IFA)检测。反馈的原始记录总体真实可信,个别参加单位存在检测试剂来源不清、操作过程不详及阳性结果未进行复检等问题。结论各实验动物检测机构大鼠仙台病毒总体检测能力较高,本次能力验证计划的实施能够反映实验室的检测水平。 展开更多
关键词 大鼠仙台病毒 能力验证 酶联免疫吸附试验 免疫荧光实验
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甲肝IgM抗体诊断试剂盒在甲肝病毒抗原检测中的应用 被引量:6
11
作者 龙润乡 熊秋霞 +5 位作者 李华 宋霞 洪超 李文忠 崔萍芳 谢忠平 《标记免疫分析与临床》 CAS 2004年第3期173-176,共4页
将HAVIgM -Ab诊断试剂盒用HAV -Ag标准品调控灵敏度后 ,用于检测HAV -Ag ,并比较快速检测法和常规过夜法两种检测方法的测定效果 ,以选择在甲肝疫苗生产中 ,抗原检测的合适方法。经过调控灵敏度后 ,抗HAVIgM诊断试剂盒完全可以用来检测H... 将HAVIgM -Ab诊断试剂盒用HAV -Ag标准品调控灵敏度后 ,用于检测HAV -Ag ,并比较快速检测法和常规过夜法两种检测方法的测定效果 ,以选择在甲肝疫苗生产中 ,抗原检测的合适方法。经过调控灵敏度后 ,抗HAVIgM诊断试剂盒完全可以用来检测HAV -Ag。并可以正确评价HAV -Ag滴度 ,HAV感染性滴度。适用于甲肝疫苗的检定工作。 展开更多
关键词 HAV 诊断试剂盒 滴度 甲肝病毒 抗原检测 IGM抗体 甲肝疫苗 正确评价 常规 方法
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仙台病毒核蛋白的原核表达及鉴定 被引量:1
12
作者 魏晓锋 胡建华 高诚 《中国动物传染病学报》 CAS 2010年第4期32-36,共5页
本研究从一株鼠仙台病毒(Sendai virus,SeV)中扩增获得核蛋白(nucleocapsid protein,NP)基因,将其克隆入pET32a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达。将原核表达产物作为免疫原,免疫BALB/C小鼠,制备获得抗NP的特异性多抗,经间接免疫... 本研究从一株鼠仙台病毒(Sendai virus,SeV)中扩增获得核蛋白(nucleocapsid protein,NP)基因,将其克隆入pET32a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达。将原核表达产物作为免疫原,免疫BALB/C小鼠,制备获得抗NP的特异性多抗,经间接免疫荧光法和Western blot法检测,该表达产物原具有良好的免疫原性。将该产物纯化作为包被抗原,建立了一种检测SeV感染的间接ELISA方法。通过H1N1流感病毒、H9N2流感病毒、新城疫病毒阳性血清进行交叉试验表明:该间接ELISA方法有很好的特异性。这为实验动物仙台病毒抗体的检测提供了一种快速、简便的血清学诊断方法。 展开更多
关键词 仙台病毒 核蛋白 原核表达 elisa
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仙台病毒抗原的制备及初步应用 被引量:2
13
作者 刘先菊 佟巍 +4 位作者 向志光 张丽芳 李雨函 王艳蓉 魏强 《实验动物科学》 2013年第1期1-5,共5页
目的纯化和制备仙台病毒(Sendai Virus,SeV)抗原,初步应用于间接酶联免疫吸附试验(ELISA)及免疫印迹(Western-blot)试验对SeV抗体进行检测。方法通过鸡胚尿囊腔及BHK-21细胞增殖法培养增殖SeV,低温冻融去除细胞碎片后,用差速离心及超声... 目的纯化和制备仙台病毒(Sendai Virus,SeV)抗原,初步应用于间接酶联免疫吸附试验(ELISA)及免疫印迹(Western-blot)试验对SeV抗体进行检测。方法通过鸡胚尿囊腔及BHK-21细胞增殖法培养增殖SeV,低温冻融去除细胞碎片后,用差速离心及超声破碎法纯化并制备SeV抗原,以SDS-PAGE电泳进行纯度鉴定;优化确定间接SeV-ELISA抗原的最佳包被浓度,对比检测间接免疫荧光试验(IFA)初筛小鼠SeV阳性血清,同时用Western-blot检测法进行特异性验证。结果用BHK-21细胞培养增殖的SeV,病毒滴度HA为1∶128,SeV抗原的电泳纯度达80%;确定SeV-ELISA抗原最佳包被浓度为2.5μg/mL时,测得小鼠SeV抗体ELISA与IFA的阳性符合率为100%,并由Western-blot检测法得到了证实。结论通过BHK-21细胞增殖和差速离心及超声破碎法制备的SeV抗原,可用于ELISA及Western-blot法对小鼠SeV抗体的检测,进而验证了SeV具有较强的抗原特异性及蛋白活性。 展开更多
关键词 仙台病毒抗原 酶联免疫吸附试验 免疫印迹试验 间接免疫荧光试验
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酶联免疫吸附试验测定乙型肝炎病毒血清标志物的具体要求和注意事项 被引量:2
14
作者 张海军 《内蒙古医学杂志》 2012年第S1期1-3,共3页
目的:探讨酶联免疫吸附试验测定乙型肝炎病毒血清标志物的具体要求和注意事项。方法:根据有关资料及笔者的切身实践经验、体会,进行归纳和总结。结果:归纳出乙型肝炎病毒血清标志物酶联免疫吸附试验测定时的具体要求和注意事项。结论:... 目的:探讨酶联免疫吸附试验测定乙型肝炎病毒血清标志物的具体要求和注意事项。方法:根据有关资料及笔者的切身实践经验、体会,进行归纳和总结。结果:归纳出乙型肝炎病毒血清标志物酶联免疫吸附试验测定时的具体要求和注意事项。结论:规范乙型肝炎病毒血清标志物酶联免疫吸附试验检测的具体要求和注意事项,有助于上述标志物测定的标准化,提高检测结果的准确性和特异性,有益于结果的报告和解释。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 血清标志物 酶联免疫吸附试验 标准化测定
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仙台病毒假病毒装甲RNA标准质控品的制备及其应用
15
作者 齐欣尧 李明 +3 位作者 费东亮 孙莉 马跃宇 马鸣潇 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2024年第9期1085-1089,1095,共6页
目的基于Ms2噬菌体制备内含仙台病毒(Sendai virus,SeV)RNA的假病毒装甲RNA标准质控品,以期应用于SeV感染的诊断及该病毒的分子生物学安全检测。方法将SeV的L基因片段插入质粒pET-28b-Ms2中,构建重组质粒pET-28b-Ms2-L(SeV)。将重组质... 目的基于Ms2噬菌体制备内含仙台病毒(Sendai virus,SeV)RNA的假病毒装甲RNA标准质控品,以期应用于SeV感染的诊断及该病毒的分子生物学安全检测。方法将SeV的L基因片段插入质粒pET-28b-Ms2中,构建重组质粒pET-28b-Ms2-L(SeV)。将重组质粒转化感受态E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达重组蛋白,即SeV假病毒装甲RNA标准质控品。将标准质控品置电镜下观察其形态,并进行10%SDS-PAGE分析、抗DNaseⅠ及抗RNsaeA试验、稳定性分析。采用重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)技术对SeV、小鼠肝炎病毒(mouse hepatitis virus,MHV)、小鼠肺炎病毒(pneumonia virus of mice,PVM)、汉坦病毒(Hantaan virus,HV)、呼肠弧病毒Ⅲ型(reovirus typeⅢ,ReoⅢ)、小鼠细小病毒(minute virus of mice,MVM)进行检测,验证标准质控品的效果。结果标准质控品于电镜下呈Ms2噬菌体假病毒颗粒结构,相对分子质量约为14000,可有效抵抗DNaseⅠ及RNsaeA的降解。标准质控品于-80℃保存6个月、-20℃保存6个月、28℃保存5、10、15 d后仍具有良好的稳定性。仅SeV可见RPA特异性扩增曲线,其他病毒均未出现扩增曲线。结论本研究构建的SeV假病毒装甲RNA标准质控品具有良好的稳定性及特异性,可作为SeV的各项分子生物学安全检测的阳性对照。 展开更多
关键词 仙台病毒 MS2噬菌体 假病毒 装甲RNA 标准质控品
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