千里光热激蛋白90-3(Hsp90-3)的生物信息学与功能分析

Hsp90是真核细胞重要的一类分子伴侣,与植物的生长发育、抗逆性、信号转导及生物进化等功能密切相关。为了深入理解高等植物Hsp90结构与功能的关系,该研究从千里光(Senecio scandens)全长cDNA文库中分离到Hsp90-3基因。序列分析结果表明,该基因编码699个氨基酸的多肽,与拟南芥(Arabidopsis thaliana)AtHsp90-3(登录号:NP_200412.1)的同源性最高,为93.71%;预测蛋白质的分子量为79.78 kD,理论等电点为5.08。信号序列分析结果发现,该蛋白主要定位于细胞的细胞核、过氧化物酶体、叶绿体类囊体膜及叶绿体基质中,提示作为分子伴侣,高等植物Hsp90-3参与细胞内膜系统蛋白质的转运。结构与功能分析发现,该蛋白有3个结构域及1个连接区,推测Hsp90-3在真核细胞的信号转导、转录调控及胁迫表达等过程中发挥重要功能。

固相微萃取-气相色谱-质谱法测定千里光的挥发油成分

采用固相微萃取-气相色谱质谱法分离和鉴定千里光挥发油成分,用归一化法测定其相对含量。共分离出93个组分,鉴定出71种化学物,其含量占总挥发油组分峰面积的96.39%。主要挥发成分及其含量为十四烯(11.55%)、4乙烯基苯酚(10.99%)、δ-榄香烯(10.25%)、4-乙烯基-2甲氧基-苯酚(9.75%)、莰烯(8.7%)、(E,E)-α-金合欢烯(7.1%)和三环烯(4.6%)等。

基于标准汤剂的千里光配方颗粒中阿多尼弗林碱含量测定

目的对千里光饮片和标准汤剂中阿多尼弗林碱进行含量测定,基于转移率分析千里光饮片和标准汤剂中阿多尼弗林碱的含量,为配方颗粒质量评价提供参考。方法采用超高效液相色谱-质谱联用(UPLC-MS/MS)法进行检测。色谱柱为C_(18)(HypersiL GOLD,100 mm×2.1 mm,1.9μm),流动相为乙腈-0.5%甲酸溶液(7∶93);柱温30℃;流速0.3 ml/min;进样量2μl;采用三重四极杆质谱检测器,电喷雾离子化(ESI)正离子模式下,离子监测通道选择质荷比(m/z)为366(阿多尼弗林碱)和326(野百合碱)进行检测。结果15批次千里光饮片中阿多尼弗林碱含量范围0~31.6μg/g,均值16.7μg/g;标准汤剂出膏率范围10.2%~21.6%,均值为16.1%;15批饮片中有5批未检测出阿多尼弗林碱,剩余10批标准汤剂阿多尼弗林碱含量范围48.7~138.5μg/g,均值109.3μg/g,±30%范围76.5~142.1μg/g;阿多尼弗林碱转移率范围40.4%~97.3%,均值70.0%。结论千里光是常用中药材,而阿多尼弗林碱是千里光的有毒成分,本研究为千里光配方颗粒研究提供了一定参考,对千里光配方颗粒的含量限度控制具有重要意义。

千里光通过NLRP3/Caspase-1/IL-1β通路对过敏性结膜炎大鼠角结膜炎症的影响

目的探讨千里光提取物对急性过敏性结膜炎模型大鼠的抗炎作用及其机制。方法将SD雄性大鼠随机分为正常组,模型组,阳性药物组,千里光低剂量(2.65 g·kg^-1)、高剂量(10.60 g·kg^-1)组共5组,以鸡卵清蛋白(OVA)滴眼法建立急性过敏性结膜炎模型。成模后,连续灌胃给药10 d,处死动物,取血,ELISA法检测大鼠血清中白介素1β(IL-1β)水平;取大鼠角结膜行石蜡切片并做HE染色,观察组织病理改变;行冰冻切片并进行免疫组化检测核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)和IL-1β的表达;Western Blot法检测角结膜组织NLRP3、Caspase-1和IL-1β的表达。结果千里光能显著降低过敏性结膜炎大鼠血清中IL-1β的释放,且能很好地改善过敏性结膜炎大鼠角结膜的炎症病变,显著降低角结膜组织中NLRP3、Caspase-1和IL-1β炎症蛋白的表达(P<0.05)。结论千里光可通过NLRP3/Caspase-1/IL-1β通路有效改善过敏性结膜炎大鼠角结膜的炎症。

千里光β-葡萄糖苷酶基因(ScBG1)的序列特征与表达分析

目的:探讨千里光β-葡萄糖苷酶(β-glucosidase,BG)基因(ScBG1)的序列特征及表达与抗菌性状的关系。方法:利用生物信息学软件分析千里光BG蛋白的序列特征、结构域,通过实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测ScBG1基因在不同抗菌性状的亲本及其杂交F1代的转录累积水平。结果:千里光BG蛋白一级结构由459个氨基酸残基构成,C端保守基元序列是该蛋白的功能结构域;亚细胞定位分析结果显示BG蛋白分布于细胞质膜、线粒体膜和线粒体膜间腔;ScBG1基因转录累积水平与抗菌性状呈正相关。结论:千里光β-葡萄糖苷酶催化产物参与抗菌性状的次生代谢信号传导网络,其抗菌生理功能表现为核基因组与线粒体基因组共同控制的数量性状。

基于生物信息学和网络药理学的千里光调控肝癌的分子机制研究

目的采用生物信息学和网络药理学的技术与方法探究中药千里光调控肝癌的分子机制。方法从中药系统药理学数据库和分析平台、中国台湾中医药数据库和中药分子机制生物信息学数据库获取千里光活性成分及作用靶点;从基因表达公共数据库下载GSE57957、GSE60502和GSE84402三个数据集,运用在线分析工具GEO2R分析差异表达基因(DEGs)并取交集,利用DAVID数据库进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集。借助STRING数据库和Cytoscape3.7版软件构建蛋白互作和“活性成分-靶点-疾病”网络筛选关键基因,利用GEPIA数据库分析表达差异及预后,获得候选靶点并在此基础上用AutoDock4.6版软件对接验证。结果获得2-呋喃甲酸、6-羟基-2-(2-苯乙基)色酮、菊黄素、菊酸、毛茛黄质、1,4-苯二酚、4-羟基苯乙酮和千里光菲灵碱共8个活性成分,作用靶点321个。GSE57957、GSE60502和GSE84402三个数据集分析出245个共同DEGs。“活性成分-靶点-疾病”网络中参与调控肝癌的成分有6个,共同靶点有17个。GO生物学过程涉及乙醇氧化、氧化还原反应、环氧化酶P450途径和脂肪酸长链代谢等,KEGG通路涉及参与脂肪酸降解通路、化学致癌、代谢通路、视黄醇代谢通路和细胞色素P450对外来物质的代谢通路等。蛋白互作网络关键靶点分别为CYP1A1、PTGS2、ESR1和NQO1,其中ESR1和NQO1同时具备显著性差异,并与不良预后有关。分子对接验证显示,NQO1与活性成分结合较为紧密。结论千里光可能通过调控肝癌细胞物质代谢途径,发挥辅助抗肝癌作用。

千里光配方颗粒的制备工艺及薄层色谱鉴别研究

为开发与利用千里光资源,对千里光配方颗粒的制备工艺以及鉴别方法进行了研究.研究方法参考《中药配方颗粒质量控制与标准制定技术要求》,在单因素实验的基础上,以出膏率、浸出物含量为考察指标,以加水量为考察因素,确定千里光配方颗粒的制备工艺;以对照药材作为对照进行薄层色谱法定性鉴别.结果表明,千里光配方颗粒的制备工艺为煎煮前浸泡30 min,连续煎煮2次,第一次煎煮30 min,第二次25 min;加水量为第一次1200 mL、第二次1000 mL;薄层色谱中可检出特征斑点.以上数据表明千里光配方颗粒制备工艺稳定,薄层鉴别方法操作简单,重复性好,为千里光配方颗粒的开发与利用提供了参考.

千里光总黄酮的抗炎作用研究

目的探讨千里光总黄酮的抗炎作用。方法通过二甲苯致小鼠耳廓肿胀实验、腹腔注射醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增高实验以及小鼠棉球肉芽肿实验,观察千里光总黄酮的抗炎作用;制作小鼠气囊滑膜炎模型,测定炎症渗出物中白细胞数(WBC)和前列腺素E2(PGE2)含量。结果千里光总黄酮对二甲苯致小鼠耳廓肿胀、醋酸致小鼠毛细血管通透性的增加以及小鼠棉球肉芽肿的形成均有明显的抑制作用;千里光总黄酮高中低剂量组炎症渗出液中白细胞数和PGE2含量明显低于空白对照组。结论千里光总黄酮对多种炎症模型均有明显的对抗作用,为千里光抗炎作用的主要有效部位之一,且此作用部分是与炎症因子PGE2的产生和释放受抑制有关。

千里光抗菌作用的数量性状分析

应用倍比稀释法检测18份千里光(Senecio scandens Buch-Ham)水煎剂对7种细菌的抗菌效果。最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)检测结果表明,千里光对金黄色葡萄球菌的抗菌作用最强,对铜绿假单胞菌的抗菌效果最差。比较不同细菌的MIC值发现,温和气单胞菌共检测出4个不同的MIC值,金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、甲型副伤寒杆菌、福氏痢疾杆菌和迟钝爱德华菌的MIC值为5个,迟钝爱德华菌的MIC值最多,表现出6个MIC梯度值。本研究结果提示千里光个体有效抗菌组分的多样性,也意味着千里光抗菌药理学性状为多基因控制的数量性状。

中草药千里光研究进展

中草药千里光具有清热解毒、明目退翳、杀虫止痒、散瘀消肿等功效,被用于广谱抗菌药物在临床上广泛使用。千里光含有肝毒性成分吡咯里西啶类生物碱,其存在的潜在风险受到普遍关注。文章对千里光的理化性质、化学成分、药理作用、毒理及实际应用等方面的最新研究进展进行了综述。

千里光的化学成分鉴定及体外抗菌试验

用分项试管预试法和圆形滤纸层析法对千里光的化学成分进行了检验；进行了千里光全草水煎剂及黄酮提取物的体外抗菌试验。结果表明，千里光全草含有黄酮及其甙类、酚性物质、鞣质、挥发油及生物碱等化学成分；千里光全草及其黄酮提取物对金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、肠炎沙门氏菌、炭疽杆菌、溶血性链球菌均有明显的抗菌作用。

千里光提取物的镇痛作用及致突变性分析

将千里光全草粉用体积分数70%乙醇浸泡,经超声波-微波处理,用乙醚萃取脱色,冷冻真空干燥,制备千里光提取物冻干粉(SCE)。以对乙酰氨基酚为对照,采用醋酸扭体法和热板法研究不同剂量SCE的镇痛作用;采用骨髓微核试验研究不同剂量SCE的致突变作用。结果发现,122.72 m g/kg SCE具有显著的镇痛作用,而130.90 m g/kg SCE对雌雄小白鼠均不具有致突变作用。说明122.72-130.90 m g/kg SCE能同时满足无致突变作用和显著镇痛作用的双重条件。

千里光致小鼠肝损伤的基因表达谱分析

目的在基因表达层次上探讨中药千里光对小鼠肝脏的毒性机制。方法实验小鼠分别灌胃千里光提取物15和30d后,以cDNA微阵列技术研究千里光对小鼠肝脏基因表达谱的影响,根据差异表达基因的生物学功能,探讨千里光对小鼠肝脏的毒性机制。结果千里光给药15d组小鼠相对正常对照组差异表达基因有39条,其中上调基因8条,下调基因31条,功能已知基因23条,功能未知基因16条。给药30d组小鼠差异表达基因有655条,其中上调基因337条,下调基因318条,已知功能基因213条,未知功能基因442条。两给药组共同的差异表达基因有21条,其中上调基因2条,下调基因19条。结论千里光可导致小鼠肝脏基因表达谱显著变化,且差异表达基因与其肝损伤间有高度关联性,这对阐明千里光属植物的肝损伤机制具有十分重要的作用。

千里光多酚提取物的体外抗氧化研究

研究了千里光中酚类物质的抗氧化能力.方法:利用Fenton反应产生羟自由基.OH法来研究千里光多酚、茶多酚对.OH的清除能力;利用.OH诱发卵磷脂脂质过氧化损伤来研究千里光多酚、茶多酚对脂质过氧化的抑制能力;利用.OH引发DNA损伤来研究千里光多酚、茶多酚对DNA的抑制能力.研究表明:千里光多酚、茶多酚对.OH的IC50分别为:1.120mg/mL、0.410 mg/mL;对脂质过氧化的IC50分别为0.980 mg/mL、0.950 mg/mL;对DNA损伤的IC50分别为:0.690 mg/mL、0.140 mg/mL,这表明千里光是一种优良的天然抗氧化剂和自由基清除剂.

千里光水浸液对大肠埃希菌R质粒的消除作用

目的探讨千里光对大肠埃希菌R质粒消除作用。方法对尿路感染患者尿液中分离的大肠埃希菌R质粒进行检测,并选用中药千里光水浸液对该质粒进行了体外、体内消除实验。体外实验:千里光水浸液亚抑菌浓度分别作用大肠埃希菌24,48,72 h后,影印培养,计数消除子数;体内实验:建立肠道去污染小鼠动物模型后,经口感染大肠埃希菌,同时给千里光水浸液,灌胃给药,每只2 mg/d,分别于给药后24,48,72 h后处死小鼠,分离培养细菌,计数消除子数。消除子经质粒抽提琼脂糖凝胶电泳鉴定。结果体外药物作用24,48,72 h后,R质较消除率分别为:0.2%,2.2%,3.8%;SDS对照组分别为12.1%,14.9%,23.7%,体内药物作用24,48,72 h R质粒消除率分别为0%,3.1%,14.4%,对照组分别为0%,0.1%,0.1%。结论中药千里光水浸液对大肠埃希菌R质粒于体内、体外均具有消除作用,体内消除作用强于体外。

千里光中几种黄酮和酚酸类成分的分离与鉴定

对千里光(Senecio scandens Buch.-Ham.)全草的乙酸乙酯提取部位进一步分离,得到4个黄酮类化合物和2个酚酸类化合物,经理化性质和NMR及MS谱学数据鉴定分别为槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷(Ⅰ)、金丝桃苷(Ⅱ)、槲皮素(Ⅴ)、异鼠李素(Ⅵ)、绿原酸(Ⅲ)和咖啡酸(Ⅳ)。化合物Ⅰ～Ⅵ均为首次从千里光属植物中分离鉴定。

千里光抗金黄色葡萄球菌作用机制的血清药理学研究

目的应用血清药理学方法研究中药千里光抗金黄色葡萄球菌的作用及其机制。方法从千里光中分离出黄酮类化合物,然后通过给小鼠灌胃制备千里光水浸液的含药血清和黄酮类化合物的含药血清。用扫描电镜观察各含药血清对金黄色葡萄球菌超微结构的影响,用同位素前体参入试验观察各含药血清对金黄色葡萄球菌生物合成的影响。同时设立生理盐水血清作为阴性对照。结果与阴性对照血清相比,两种含药血清作用后的金黄色葡萄球菌,其形态和超微结构均发生明显的变化,菌体塌陷,细菌融合成团,呈现肿胀模糊等变化;其DNA,RNA蛋白质和肽聚糖合成也均受到明显的抑制。结论千里光的抗金黄色葡萄球菌作用机制可能是通过抑制细菌的DNA,RNA,蛋白质和肽聚糖的合成有关,其作用的有效成分可能是黄酮类化合物。

改良千里光注射液的体内外抗菌作用及安全性

分别用 3种不同浓度乙醇进行醇提水沉法渗漉 ,制备了千里光原液。然后经高浓度乙醇法除去蛋白质、醇溶液调p H值法除去鞣质以及乙醚脱色等步骤进行除杂脱色 ,制备改良千里光注射液。对改良千里光注射液进行安全性检验、体外抑菌和体内抗感染试验 ,结果表明 ,用 78%乙醇提取、制备的改良千里光注射液对肠炎沙门氏菌、大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌均有明显的抑制作用 ,体内抗感染作用显著 。

不同采收期和部位黔产千里光中总黄酮、绿原酸和金丝桃苷含量动态比较

[目的]研究不同采收期及部位黔产千里光中总黄酮、绿原酸和金丝桃苷含量的动态变化规律,结合生物产量,为确定黔产千里光的采收期和药用部位提供科学理论依据。[方法]采用紫外分光光度法测定总黄酮,高效液相色谱法测定绿原酸和金丝桃苷的含量。[结果]不同采收期黔产千里光总黄酮的含量以6月份含量最高,绿原酸和金丝桃苷含量均以8月份最高,不同部位千里光叶中总黄酮、绿原酸和金丝桃苷的含量最高;8月份千里光的生物产量最大,茎、叶的产量占较大比重。[结论]综合考虑3种活性成分的含量和生物产量,建议黔产千里光在7—9月份采收地上部位为宜。

千里光的研究进展

综述了国内近年来对千里光化学成分、药理作用、毒理作用、临床研究及分析方法的研究状况。