云南省楚雄州汉坦病毒宿主动物及分子流行病学研究

目的掌握汉坦病毒（HV）在云南省啮齿动物中的流行情况及其遗传特征。方法采用笼夜法捕鼠，鼠肺标本用直接免疫荧光法检测HV抗原，用RT-PCR法检测HV核酸及分型，对产物进行序列测定，用PHYLIP软件包进行系统发生分析。结果2005--2006年在云南省楚雄州10个县（市）居民区共捕获鼠类4属8种1421只，其中褐家鼠1056只，构成比高达74.31％，其次为黄胸鼠（19．70％）。检测鼠肺组织1029份，HV抗原阳性53份，总带病毒率为5．15％，带病毒鼠种为褐家鼠（5．08％，38／748））、黄胸鼠（5．97％，12／201）、大足鼠（7．69％，2／26）和斯氏家鼠（6．25％，1／16）。HV汉城型（SEO）核酸检测阳性21份（褐家鼠15份，黄胸鼠4份，大足鼠2份）。获得的12个病毒S片段核苷酸序列与GenBank中国SEO型病毒R22、L99和HLD65株同源性较高，为87．1％～99．7％；与汉滩型（HTN）76—118株同源性仅为64．4％～69．1％。系统进化分析显示，楚雄州12个病毒S片段核苷酸序列与SEO型亲缘关系较近，与HTN型及其他型HV相距较远，证实这12份病毒标本均为SEO型病毒，并可分S1和S3两个亚型。结论首次证实楚雄州10个县（市）广泛存在以褐家鼠为主要传染源的HFRS家鼠型疫源地及SEO型病毒的流行。分析发现SEO型不同亚型病毒的分布有其地域特点和独立性。

天台县汉坦病毒宿主动物调查及病毒分离结果

目的了解2011—2018年浙江省天台县汉坦病毒(HV)宿主动物的种群分布、带毒情况和病毒型别,为防制肾综合征出血热(HFRS)提供依据。方法在天台县HFRS监测点采用夹夜法捕获鼠形动物,对鼠种和鼠龄进行鉴定,分析当地鼠种构成和鼠密度。取鼠肺和鼠血,采用免疫荧光法检测HV抗原和抗体,HV抗原阳性鼠肺用HV S片段特异性引物进行RT-PCR核酸检测,并进行分离病毒和鉴定型别。结果 2011—2018年天台县平均鼠密度为4.44%,野外鼠密度为4.94%,居民区鼠密度为2.23%。捕获鼠形动物10种,野鼠优势鼠种为黑线姬鼠,家鼠优势鼠种为褐家鼠。鼠肺HV抗原阳性67份,阳性率为4.13%,其中1份来自褐家鼠,其他66份均来自黑线姬鼠;鼠血抗体阳性79份,阳性率为4.86%,均来自黑线姬鼠。67份HV抗原阳性鼠肺标本经RT-PCR扩增后,阳性34份,阳性率为50.75%。分离到22株HV,其中汉滩型(HTN) 21株,汉城型(SEO) 1株,均分离自黑线姬鼠。结论天台县存在以黑线姬鼠为主要传染源的HFRS疫源地,主要流行型别为HTN型,同时首次在天台县发现黑线姬鼠携带SEO型病毒。

一株汉城型汉坦病毒的分离及基因鉴定

目的从鼠肺中获得汉坦病毒分离株并进行基因鉴定与分型,为地区分离株特性研究提供基础。方法用Vero-E6细胞分离病毒,进行荧光和RT-PCR鉴定,之后对目的片段进行序列测定和分析。结果从褐家鼠鼠肺中分离到一株汉坦病毒,编号SC106。用汉城型(SEO)汉坦病毒M基因特异性引物检测得到预计大小的片段,此片段的核苷酸序列分析表明,SC106与SEO型参考毒株的同源性较高,均在94%以上;与汉滩型(HTN)参考毒株的同源性较低,均在67%以下。进化树分析表明SC106位于SEO型所在的支系。结论SC106为SEO型汉坦病毒。

深圳市啮齿动物感染汉坦病毒的基因特征研究

目的:研究深圳市啮齿动物所携带的汉坦病毒分子流行病学特征,分析汉坦病毒基因型别。方法:采用笼日法布点捕鼠,收集鼠肺标本后研磨提取RNA。运用实时荧光PCR方法进行分型检测,进一步采用反转录-巢式PCR扩增部分M片段G2区和S片段核苷酸序列,并进行同源性和系统进化树分析。结果:共捕获200只鼠类动物,包含褐家鼠189只、黄胸鼠9只和小家鼠2只。汉坦病毒检出率为21.0%(42/200),均为汉城病毒,其中宝安区鼠肺检出率最高,达45.7%( χ^(2)=25.60, P<0.05)。从阳性鼠肺标本中分别扩增出25条汉坦病毒M片段G2区和S片段序列,核苷酸同源性分别为95.3%~100.0%和97.6%~100.0%,与来自广州市的参考序列核苷酸相似性较高。系统进化树显示此次研究深圳市鼠类动物所携带的汉坦病毒均为汉城病毒的S2亚型。氨基酸突变位点分析发现,在S基因编码的核衣壳蛋白中存在1个位点突变,为BA-111第973位由丙氨酸(Ala)变为苏氨酸(Thr)。 结论:深圳市鼠类动物所携带的汉坦病毒为汉城病毒的S2亚型,与深圳市历年以及周边省市汉坦病毒代表病毒毒株相比变异不大。