枇杷叶多糖的分离纯化及组分鉴定

提取纯化枇杷叶多糖,并对其组分进行研究。枇杷叶多糖提取液经大孔树脂除杂,醇沉后干燥即得枇杷叶可溶性总多糖。经DEAE-52纤维素柱层析及Sephadex G-200葡聚糖凝胶柱层析,得到纯化后多糖,并采用Sephadex G-200葡聚糖凝胶柱测定多糖的分子量,水解多糖后采用薄层层析对枇杷叶多糖进行组分鉴定及单糖的组成比例测定。通过DEAE-52柱层析得3个枇杷叶多糖酸性组分,分别经过Sephadex G-200柱层析得到3个乳白色组分,分别为PSL-1、PSL-2、PSL-3。3个组分的洗脱曲线均为单一对称峰,初步判断3个组分含有单一成分的多糖。PSL-1、PSL-2、PSL-3分子量分别约为700、500、400 k Da。经过薄层层析初步推断出PSL-1含有鼠李糖和葡萄糖,含量之比为1∶0.602;PSL-2含有葡萄糖、半乳糖、鼠李糖,含量之比为1∶1.415∶1.408;PSL-3含有半乳糖和鼠李糖,含量之比为1∶1.03。

二氢嘧啶酶的分离纯化与性质研究

二氢嘧啶酶产生菌Pseudomonasputida 980 1经过超声波粉碎及分级盐析 ,DEAE 纤维素和羟基磷灰石柱层析 ,SephadexG 2 0 0凝胶过滤得到纯化 2 49倍的酶液。SDS PAGE显示为单带 ,单体分子量为 380 0 0 ,SephadexG 2 0 0凝胶过滤测得分子量为 15 6 0 0 0。二氢嘧啶酶对苯海因的km 为 2 .39× 10 -2 mol/L ,其最适 pH和最适温度分别是 8.5～ 8.7和 34℃～ 35℃。 1mmol/L的EDTA和 β 巯基乙醇对酶活力有强烈的抑制作用。

Mitsraria sp.1412产壳聚糖酶的分离纯化及性质研究

以实验室选育的Mitsuaria sp.1412菌株发酵产壳聚糖酶,采用硫酸铵分级沉淀,表明沉淀饱和度为60%～90%效果较好,壳聚糖酶纯化倍数达1.85倍。然后依次采用离心超滤、离子交换层析和Sephadex G-200凝胶柱层析进行纯化。SDS-PAGE凝胶电泳检测表明,产物仅有一条清晰的条带,显示该壳聚糖酶的分子量为33.6 kD.酶学性质结果表明,该酶的最适反应pH和温度分别为5.5、50℃,并且该酶在pH5.0～8.0和35～45℃范围内,稳定性良好。酶最大反应速度V_(max)为2.8μmol/min,常数K_m为168.4 mmol/L.对该酶的酶解产物进行分析发现其酶解产物为壳二糖和壳三糖。