Ficoll分离液在Sephadex G-100微柱凝胶血型卡中的应用

目的 探讨Sephadex G-100微柱凝胶血型卡加入Ficoll分离液后的性能和应用.方法 在Sephadex G-100微柱凝胶血型卡中加入Ficoll分离液,制作成Ficoll分离液-微柱凝胶血型卡,对200例标本进行ABO和Rh（D）血型测定,并与进口的强生血型卡和Sephadex G-100血型卡法进行比对.分别用37℃孵育强生血型卡、45℃孵育强生血型卡和45℃孵育Ficoll分离液-微柱凝胶血型卡三种方法对6例低、中、高不同效价的冷凝集素标本进行ABO和Rh （D）血型测定,同时进行反定型血型检测.分别用强生血型卡、Sephadex G-100血型卡和Ficoll分离液-微柱凝胶血型卡对26例溶血标本进行ABO和Rh （D）血型测定.结果 自制Ficoll分离液-微柱凝胶血型卡检测200例标本的血型结果,A型55例,B型46例,O型92例,AB型7例,Rh （D）均为阳性,与强生血型卡和Sephadex G-100微柱凝胶血型卡结果相同.自制血型卡检测抗D抗体平均滴度为1：256,与Diana凝胶卡灵敏度相同,明显优于传统试管法（P＜0.05）.45℃孵育Ficoll分离液-微柱凝胶血型卡检测6例冷凝集素标本血型结果正确,正反定型一致,37℃和45℃孵育强生血型卡检测冷凝集素标本血型分别有3例和2例结果不正确,造成假阳性.Ficoll分离液-微柱凝胶血型卡检测26例溶血标本血型结果正确,强生血型卡和Sephadex G-100血型卡检测溶血标本血型分别有6例和10例结果不正确.结论 研制Ficoll分离液-Sephadex G-100微柱凝胶血型卡适用于血型鉴定.对于冷凝集和溶血标本血型鉴定有明显优势.该卡具有准确、灵敏、特异、试剂制备工艺简单、成本低等优点,具有较好的推广应用和开发价值.

商品果胶酶中endo－PG的分离纯化及其部分性质研究

以Ａ．ｎｉｇｅｒ来源的果胶酶为材料，经过ＣＭ－ＳｅｐｈａｄｅｘＣ－５０及ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００两步骤分离纯化得到电泳均一的ｅｎｄｏ－ＰＧ１及ｅｎｄｏ－ＰＧ２，其亚基分子量分别为３５ｋＤ及３７ｋＤ，含糖量为１１．２２％及８．３％，最大紫外吸收峰分别在２７４ｎｍ及２６９ｎｍ处，氨基酸组成分析结果表明Ｇｌｙ含量较高，Ｍｅｔ含量较低，不含Ｃｙｓ，并且酸性氨基酸含量高于碱性氨基酸，圆二色谱结果表明二级结构主要为α螺旋和β折叠，其中ｅｎｄｏ－ＰＧ１含α螺旋４５．１％，β折叠２４．９％；ｅｎｄｏ－ＰＧ２含α螺旋３９．６％，β折叠３６．５％。

凝胶排阻层析纯化破伤风抗毒素条件优化的研究

目的:探讨凝胶排阻层析纯化破伤风抗毒素的条件。方法:使用Sephadex G-100装柱,以紫外检测蛋白质特征峰A280nm绘制的散点图为评价指标,采用单因素试验考察不同流速、洗脱剂、样品浓度对破伤风抗毒素蛋白分离的影响;经非还原型SDS-PAGE凝胶电泳后对染色结果进行扫描对比;按照《中国药典》异常毒性检查法对纯化后的组分进行安全性检查。结果:凝胶排阻层析纯化破伤风抗毒素的最佳条件为以磷酸盐缓冲液(pH6.5)为洗脱液,样品浓度为100%,流速为0.3 mL/min;SDS-PAGE凝胶电泳结果表明在该条件下可以较好地纯化破伤风抗毒素有效成分F(ab')2;异常毒性检查结果为小鼠及豚鼠均正常存活,无异常毒性。结论:优化的凝胶排阻层析条件可以较好地纯化破伤风抗毒素有效成分,且安全无毒,为进一步推动该类生物制品的质量提高提供参考。

以Sephadex G-100制备微柱凝胶血型卡及其性能评估

目的本实验以Sephadex G-100制备血型卡并对其进行性能评估。方法用生理盐水浸泡等对Sephadex G-100凝胶进行预处理,通过控制浸泡时间、缓冲液、加入红细胞的量及其浊度等,制备血型卡。再对血型卡进行性能评估,包括符合率、灵敏度、批内重复率、批间重复性、有效期等。结果自制血型卡检测200例标本的血型结果和试管法、强生血型卡法全部符合。自制血型卡和强生凝胶卡检测抗B抗体平均滴度均为1:308,均明显优于传统试管法1:256(P<0.05)。自制血型卡检测抗B抗体滴度的批内重复性CV为8.1%,批间重复性CV为3.7%。自制血型卡稳定期约为8个月。结论以Sephadex G-100凝胶试剂制备血型卡具有重复性高、稳定性好、结果准确、试剂制备工艺简单、成本低等优点,具有较好的推广应用和开发价值。

滇产刺梨多糖的提取纯化及其结构分析

目的:探讨刺梨多糖提取和纯化的方法。方法:采用热水提取醇沉法从刺梨果实中提取多糖,在单因素实验的基础上,以响应面实验对刺梨多糖的提取工艺进行优化。采用Cellulose DEAE-52和Sephadex G-100柱对刺梨粗多糖进行分离纯化,Sevage法脱蛋白,D-101吸附树脂脱色素,FT-IR、HPGPC和HPLC测定分子量和单糖组成。结果:刺梨多糖是一种以Glc为主要成分的均一性酸性多糖。

大连湾牡蛎蛋白的分离提取及分子量测定

以大连湾牡蛎为实验材料.首先采用冰醋酸粗提法提取牡蛎蛋白,然后用葡聚糖凝胶(Sephadex-G100)进行柱层析分离,SDS—聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳分离蛋白,Kodak凝胶成像分析仪分析及测定分子量.结果显示大连湾牡蛎中含有分子量为55kd的牡蛎特征蛋白,同时分离出其它4种蛋白质,分子量介于33.0~63.4kd之间.

玉竹糖蛋白分离纯化及其体外抗氧化能力

采用磷酸缓冲液浸提法提取玉竹糖蛋白粗品(Polygonatum odoratum glycoprotein,PDG),经葡聚糖凝胶G-100和刀豆凝集素A分离纯化,得到糖蛋白组分PDG1和PDG3,经高效液相色谱测定其分子质量,并检测PDG、PDG1和PDG3的体外抗氧化活性。结果表明,PDG1和PDG3的分子质量分别为186 k D和28.3 k D;玉竹糖蛋白具有一定的还原能力,对羟自由基和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基具有较强的清除作用,对脂质过氧化具有抑制作用,且在一定质量浓度范围内(1~10 mg/m L)存在剂量关系,其抗氧化能力随着玉竹糖蛋白质量浓度的增加而增强,PDG1和PDG3的抗氧化能力优于PDG。

人工培养冬虫夏草胞外多糖的分离纯化研究

本文以乙醇沉淀法提取得到的人工培养冬虫夏草(Cs-HK1)粗胞外多糖为研究对象,采用DEAE-52纤维素(Cl-)离子交换柱层析和Sephadex G-100葡聚糖凝胶柱层析进行分离、纯化得到一水溶性胞外多糖分EPS-1A。紫外光谱、比旋光度和凝胶渗透色谱法研究表明该多糖为相对均一组分,中性糖含量为99.0%,重均相对分子质量为4.0×104。多糖特征反应表明该多糖为非淀粉类,不含单糖、糖醛酸、蛋白质、核酸和多酚类物质的中性多糖。

桑黄菌丝球多糖的分离纯化

桑黄菌丝球多糖经大孔树脂除蛋白、DEAE-纤维素初步纯化后得到三个组分,其中Ap2含量最多,且有两个峰部分重叠,将Ap2过Sephadex G-100凝胶柱层析进一步纯化,得到Ap2-1和Ap2-2两个单一多糖组分,纯化后的多糖各组分经紫外光谱分析不含蛋白质和核酸,整个分离纯化过程,多糖的回收率仅为48%,但纯度达到了96%。

魔芋甘露聚糖肽的分离纯化

以魔芋飞粉发酵所产多肽为原料,采用超滤法将其分离为M>200 ku、10 ku<M<200 ku和M<10 ku三个不同分子量区段的多肽;采用Sephadex G-100凝胶层析对10 ku<M<200 ku分子量区段多肽进一步进行分离,得到N1、N2和N3三个组分。通过对洗脱条件优化,确定了Sephadex G-100凝胶层析的最佳分离条件为:上样浓度150 mg/m L,洗脱流速0.8 m L/min;经高效液相色谱测定,N2组分的氨基酸图谱与甘露聚糖肽标准品相似度最高,确定发酵所产多肽中的甘露聚糖肽主要分布于N2组分,甘露聚糖肽含量为56.78%±2.41%。

远志多糖的纯化分离研究

目的:对远志多糖进行纯化分离,观察其具有药用功效的单一多糖,为其药用功效进一步研究奠定基础。方法:采用水提醇沉法提取远志粗多糖,用酶法和Sevage法除蛋白,活性炭脱色,葡聚糖凝胶Sephadex G-100分离纯化,并对分离得到的多糖进行初步的结构分析。结果:分离纯化得到的远志单一多糖,紫外可见光260 nm、280 nm处有多糖无蛋白质和核酸的吸收峰,在红外光谱也有表现出多糖的特征官能团。结论:推测该多糖为β-吡喃糖,而非α-吡喃糖,并且不含蛋白质。

水牛梭形住肉孢子虫包囊抗原的纯化技术

应用萄聚糖凝胶柱层析对水牛梭形住肉孢子虫包囊包溶性抗原进行了纯化。结果表明：纯化水牛梭形住肉孢子虫包囊抗原的最适条件为：选用萄聚糖凝胶Ｇ—１００柱层析系统；洗脱液为０３ＭＰＢＳ（ｐＨ７２），床体积为１０ｃｍ×１６５ｃｍ，上样体积为５００ＨＬ；流速为１２ｍＬ／ｈ。纯化抗原可使琼脂凝胶双扩散试验的阳性检出率提高３０％。

大型食药用真菌松茸多糖的分离纯化研究

大型真菌松茸(Tricholoma matsutake)子实体经过除杂、粉碎、预处理、热水浸提、醇沉处理后,得到了松茸多糖粗提物(TMP),并运用DEAE-cellulose column和Sephadex G-100 column进行柱层析分离纯化,结果显示:以酶法与Sevage法交替法除蛋白后,可见在260nm和280nm附近均无明显吸收峰,表示除蛋白后多糖溶液中均无蛋白、核酸等杂质.从四川省小金县松茸子实体分离提取粗多糖(TMP)得率为16.4%,分离纯化后得到一种新型水溶性杂多糖(TMP-A)纯品,其得率为0.22%.

绣球菌酸性多糖的分离纯化、结构鉴定及抗氧化活性研究

采用超声波辅助水提醇沉法提取绣球菌(Sparasis crispa)多糖,并通过HZ-830大孔树脂、DEAE-52纤维素及Sephadex G-100凝胶纯化,收集绣球菌多糖SCP-Ⅱ;采用苯酚硫酸法和间羟基联苯法分别测定SCP-Ⅱ中总糖和糖醛酸含量;采用紫外-可见光谱、高效凝胶渗透色谱、离子色谱、红外光谱、扫描电镜和原子力显微镜对其结构进行鉴定;通过测定总还原力、清除DPPH、OH和O-2自由基的能力来研究其体外抗氧化活性。结果表明:SCP-Ⅱ的总糖、糖醛酸含量分别为98.7%、17.8%,相对分子质量为5.8×10^3,单糖组成为半乳糖、葡萄糖、木糖、果糖(摩尔比为2∶7∶1∶2);其具有一定的清除自由基能力,清除DPPH、OH、O2^-自由基的IC 50分别为1.64、0.94 mg/mL和7.25 mg/mL。

巨噬细胞条件培养基神经营养活性成分的分离、纯化和鉴定

用快速自动比色微量分析法检测巨噬细胞条件培养基（ＭφＣＭ）对体外培养的生后７ｄＳＤ大鼠小脑皮质神经元的作用。结果表明，ＭφＣＭ内分子量大于３０ｋＤ的组分（加入量４０μｌ／孔）对神经元（细胞密度１×１０＾６／孔）具有明显的神经营养活性，与对照组相比有显著性差异（Ｐ〈０．０１）。盖片培养法证明，此组分还具有促神经元突起生长的作用。另外，把ＭφＣＭ进行Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００凝胶层析及生物活性鉴定，

分离亲水气单胞菌外毒素的聚丙烯酰胺凝胶色谱填料

由丙烯酰胺和甲叉丙烯酰胺在水油悬浮液中共聚得到聚丙烯酰胺凝胶 (ZSP)系列 ,并用红外、溶剂吸收实验等对合成的ZSP的结构进行了研究。以商品葡聚糖凝胶SephadexG 10 0为对照 ,研究了ZSP 10对使中华鳖致病的亲水气单胞菌外毒素的分离性能。结果表明 :ZSP 10对毒素分离效率高 ,洗脱峰不拖尾 ,且结构和膨胀度可调 ,成本低廉 ,不易染菌霉变。经SephadexG 10 0和ZSP 10提纯的外毒素蛋白均保留了生物活性。根据SDS -PAGE的分析 ,确认经提纯的毒素蛋白的分子量为 3.2× 10

晋产藜麦糖蛋白的提取纯化及含量测定

目的:从晋产藜麦中提取糖蛋白并且进行纯化,推出糖蛋白之间的键连接方式及含量测定。方法:提取工艺条件为提取温度95℃、提取时间1 h、提取次数2次,得到藜麦中粗品糖蛋白;通过DEAE-52纤维素柱层析、Sephadex G-100葡聚糖凝胶层析分离纯化,最终得出1种藜麦糖蛋白;经过薄层色谱法对纯度进行检验,并对其进行定性鉴定,根据苯酚-硫酸法测得藜麦糖蛋白含糖量,利用β-消去反应测定藜麦中糖蛋白中糖肽键连接方式,通过黏度法确定藜麦糖蛋白的分子质量。结果:糖含量为16.41%,糖肽键连接方式初步定为O-糖苷键,通过黏度法确定藜麦糖蛋白的分子质量为7624.95。