豆渣细胞壁中伸展蛋白纯化的研究

本文主要研究了通过CM-纤维素柱和SephadexG-75柱色谱纯化豆渣细胞壁中的伸展蛋白。用CM-纤维素柱色谱纯化豆渣细胞壁蛋白时,得到3个组分;对某个组分进一步采用SephadexG-75柱色谱纯化。并对这些组分进行氨基酸含量及分子量测定,再根据各组分的氨基酸含量及其分子量来初步鉴定属于伸展蛋白的组分。

水分对头孢地嗪钠中高分子聚合物含量的影响

采用凝胶色谱法,考察了不同含水量对头孢地嗪钠中高分子聚合物含量的影响。色谱柱为SephadexG-10,流动相A为0.02mol·L^-1磷酸盐缓冲液（pH=7.0）;流动相B为超纯水;流速为1.0mL·min^-1;检测波长为254nm。头孢地嗪钠供试品溶液在10.536~34.461 mg·mL^-1范围内,溶液的浓度与高分子聚合物峰面积呈良好的线性关系（r=0.9986）。随着头孢地嗪钠含水量的增加,高分子聚合物的含量明显增加,研究证明水分是控制头孢地嗪钠高分子聚合物含量的关键因素。

根霉12^#发酵生产纤溶酶的分离纯化

本文研究了根霉12#固体发酵产生纤溶酶的特性,并通过SephadexG-75凝胶过滤对根霉12#纤溶酶进行分离纯化,最后用聚丙烯酰胺垂直板凝胶电泳验证纤溶酶的存在。

头孢米诺钠高分子聚合物的测定

目的建立分子排阻色谱法分析头孢米诺钠高分于聚合物的方法。方法色谱柱为SephadexG-10柱。内径1．6cm,柱长30cm，流动相A：0.05mol·L^-1磷酸盐缓冲液（pH7．0），流动相B2超纯水，流速：1ml·min^-1，检测波长：254nm，进样量：200μL。结果头孢米诺钠进样浓度在10-60mg·ml^-1范围内与头孢米诺钠高分子聚合物的峰面积呈赶好的线形关系（r=0．9992）。头孢米诺钠进样农度在25-500μg·mL^-1的范围内与头孢米诺钠缔夸物的峰面积也呈良好的线性关系（r=0．9997）。结论该方法能较好地分离头抱米诺钠与其聚合物，且精密度、准确度均能满足质量控制的要求。

不同培养基条件来源空肠弯曲菌外膜蛋白纯化及其表达差异

目的探讨不同培养基培养条件下空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni,CJ)Mr28000～31000外膜蛋白的纯化方案及表达差异。方法分别采用改良布氏血琼脂培养基(以下简称Bull’s)、改良卵黄培养基(以下简称Yolk)培养CJ,比较两者的生长特征。制备CJ全菌抗血清。0.2mol/L、pH2.2甘氨酸-HCl缓冲液抽取CJ外膜蛋白,Sephadex G-75层析法纯化其中的Mr28000～31000蛋白。SDS-PAGE技术检测Mr28000～31000外膜蛋白表达情况和含量差异,Western-blotting检测该类蛋白的抗原性。结果卵黄培养基培养的细菌生长更典型,SephadexG-75层析能够稳定可靠地纯化CJ细菌Mr28000～31000外膜蛋白,卵黄培养基培养来源的CJ的Mr28000～31000表达量占酸提取物的70%,大于改良布氏血琼脂培养基培养来源的表达量48%,两种培养基来源的CJ的Mr28000～31000蛋白成分均与CJ全菌兔抗血清发生免疫反应。结论不同培养基来源CJ的Mr28000～31000外膜蛋白均能被SphadexG-75分子筛纯化,该类蛋白能够在改良卵黄培养基上更高效表达,不同培养基来源的该类蛋白均具有良好的抗原性,该培养基的使用和该类蛋白有效提取为CJ感染的血清学特异性诊断及疫苗的研制奠定基础。

磷钒钼蓝-Sephadex G-25凝胶相双波长分光光度法测定微量磷

应用葡聚凝胶 (Sephadex)G - 2 5从水溶液中吸附富集磷钒钼蓝杂多酸 ,在 80 0nm和 70 0nm处应用固相分光光度法直接测定磷钒钼蓝 -凝胶相吸光度差 ,磷量在 0 - 8μg/ 5 0mL范围内符合比尔定律 ,用于分析高纯硫酸钠中微量磷 。

凝胶色谱法测定注射用头孢唑肟钠中聚合物的含量

目的：建立Sephadex G-10凝胶色谱系统分析头孢唑肟钠高分子聚合物的方法。方法：色谱柱为葡聚糖凝胶G-10柱（16 mm×650 mm）,流动相A为0.01 mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.0）,流动相B为0.01%十二烷基硫酸钠溶液,流速：2.5 ml/min,检测波长：254 nm,进样量：200μl。结果：头孢唑肟钠进样浓度在5~200 mg/ml的范围内与头孢唑肟钠高分子聚合物的峰面积呈良好的线性关系（r=0.999 2）。结论：该方法简便准确、灵敏度高、重现性好。

美国红鱼免疫球蛋白的分离纯化

对灿烂弧菌灭活疫苗接种后的美国红鱼提取血清,采用硫酸铵沉淀和SephadexG-200凝胶层析结合的方法分离纯化出美国红鱼血清免疫球蛋白,并且通过SDS-PAGE对纯化蛋白的部分特性进行分析。结果表明,通过硫酸铵沉淀法可以沉淀血清中大部分的蛋白,电泳条带比较丰富,但仍然含有较多的杂蛋白,经过SephadexG-200凝胶柱层析方法分离,获得纯度较高的免疫球蛋白,经β—巯基乙醇处理后解离形成重链和轻链两个亚单位,分子量分别为69.2 kDa,29.5 kDa,表明美国红鱼血清IgM的分子量与硬骨鱼IgM的分子量范围（H链60~81kDa,L链20-30kDa）是一致。

龙胆多糖提取分离纯化及其组成糖分析

目的从龙胆中提取分离水溶性多糖,研究其组成糖成分,为进一步开发利用龙胆多糖提供参考。方法主要采用SephadexG-100凝胶色谱柱分离纯化,利用气相色谱法测定各糖的组成比例。结果从龙胆水溶性多糖中分离纯化得到2种不同的均一多糖组分TP-1、TP-2,组成糖均一样。结论 2种均一多糖首次从龙胆中分离得到,组成糖的比例并不一样。

沙葱多糖的SephadexG—100凝胶柱纯化和分子量的测定

对通过热水浸提、三氯乙酸除蛋白和活性炭脱色后的沙葱粗多糖,采用SephadexG—100凝胶柱层析纯化,收集合并单一峰溶液命名为SCSP,并对纯化产物SCSP进行相对分子质量的测定。结果表明,SCSP凝胶柱层析洗脱曲线为单一狭窄对称峰,说明为均一组分多糖;SCSP的相对分子质量为5.89×104克/摩尔。

Mitsraria sp.1412产壳聚糖酶的分离纯化及性质研究

以实验室选育的Mitsuaria sp.1412菌株发酵产壳聚糖酶,采用硫酸铵分级沉淀,表明沉淀饱和度为60%～90%效果较好,壳聚糖酶纯化倍数达1.85倍。然后依次采用离心超滤、离子交换层析和Sephadex G-200凝胶柱层析进行纯化。SDS-PAGE凝胶电泳检测表明,产物仅有一条清晰的条带,显示该壳聚糖酶的分子量为33.6 kD.酶学性质结果表明,该酶的最适反应pH和温度分别为5.5、50℃,并且该酶在pH5.0～8.0和35～45℃范围内,稳定性良好。酶最大反应速度V_(max)为2.8μmol/min,常数K_m为168.4 mmol/L.对该酶的酶解产物进行分析发现其酶解产物为壳二糖和壳三糖。

红芪多糖HG-2含量及联合透明质酸水凝胶的参数测定

目的制备红芪多糖HG-2及建立红芪多糖HG-2的含量测定方法,并联合透明质酸水凝胶测定凝胶时间、释药量、降解及溶胀率等参数。方法采用SephadexG-25纯化制备红芪多糖HG-2,苯酚-硫酸法测定含量,并用化学改性法制备透明质酸(HA)水凝胶,将二者联合制备红芪多糖HG-2HA水凝胶。结果红芪多糖HG-2的含量为95.97%,HA水凝胶的凝胶时间为(180±20)s;溶胀率为42.33%;并在第5天基本降解。红芪多糖HG-2HA水凝胶释药在第120h已趋于平稳,释药量为86.15%。结论选用葡萄糖作为对照品测定红芪多糖HG-2含量的方法简便、准确。红芪多糖HG-2HA水凝胶能够起到缓释作用,二者联用具有可行性,可以为后续动物实验提供理论依据。

间接血凝试验诊断旋毛虫病

本文采用经Sephadex G-200层析后的旋毛虫幼虫抗原对实验感染旋毛虫大鼠和旋毛虫病人血清作间接血凝试验(IHA)。结果表明,20只大鼠感染后第16天全部出现阳性反应。9例旋毛虫病患者为阳性。本试验用于囊虫病、华枝睾吸虫病和健康人及正常大鼠均为阴性。检查本地区31只狗,阳性符合率为66.7％。

重组人IL-31蛋白纯化方法的比较研究

目的比较两种方法纯化rhIL-31的效果。方法将含pET32a/rhIL-31的重组菌E.coli.BL21(DE3)经IPTG诱导表达,通过超声波破碎,包涵体的提取溶解,分别经G75凝胶层析和镍琼脂糖凝胶FF层析进行蛋白纯化,通过SDS-PAGE对纯化结果进行比较分析。结果镍琼脂糖凝胶FF层析法的杂蛋白去除率高于凝胶层析法,所得蛋白纯度略高。结论比较重组人IL-31蛋白的纯化效果,镍琼脂糖凝胶FF层析的效果比G75凝胶层析的效果好。

荧光分光光度法测定尿中微量碘

尿样用ＳｅｐｈａｎｅｘＧ－１０小柱分离，收集含Ｉ－部分，然后用Ｉ－催化砷－铈氧化还原反应和标准添加直线外推荧光分光光度法测定。本法最低检出限０．０１ｍｇ／Ｌ，尿样中Ｉ－含量在０．００１～０．０３μｇ范围内，批内相对标准偏差＜４％，批间相对标准偏差＜６％，尿样加标回收率８８％～１０４％，用本法测定１０人份随意尿样，Ｉ－浓度范围为０．０７５～０．

注射用头孢孟多酯钠聚合物测定方法研究

目的:建立分子排阻色谱法测定注射用头孢孟多酯钠高分子聚合物。方法:色谱柱为SephadexG-10柱,内径1.2mm,柱长40cm,流动相A:磷酸盐缓冲液(pH值7.0),流动相B:0.01%十二烷基硫酸钠,流速:1ml/min,检测波长:254nm,进样量:200μl。结果:头孢孟多酯钠在22.6～226.0μg/ml范围内线性关系良好(r=0.9999)。结论:本测定方法简便,结果准确,重复性好,可有效测定注射用头孢孟多酯钠中头孢孟多聚合物的量。

葡聚糖凝胶色谱法测定注射用头孢美唑钠中聚合物

目的建立凝胶色谱法测定注射用头孢美唑钠中聚合物。方法色谱柱为玻璃柱(内径1.3cm,柱长40cm),葡聚糖凝胶G-10(40～120μm)为填充剂;流动相A为pH7.0的0.1mol/L磷酸缓冲液,流动相B为水;体积流量为1.5mL/min;检测波长为254nm;蓝色葡聚糖2000溶液的质量浓度为0.1mg/mL;进样量200μL。结果 A相中头孢美唑钠进样质量浓度在10～40mg/L与头孢美唑钠高分子聚合物峰面积呈良好的线性关系(r=0.9986)。B相中头孢美唑酸进样质量浓度在3.994～79.88μg/mL线性关系良好(r=0.9999)。3批样品中高分子聚合物质量分数为0.02%～0.03%。结论该方法的精密度和准确度均能满足注射用头孢美唑钠中高分子聚合物质量控制的要求。

绿豆中ACE抑制肽的分离纯化及抗氧化研究

在绿豆中提取蛋白,以成熟的提取工艺提取ACE抑制肽,用SephadexG-25凝胶柱色谱对酶解产物分离纯化,纯化后得到3个组分,并确定其分离条件。结果表明,以SephadexG-25为分离介质的色谱条件是:上样体积,2 mL;样品浓度,9 mg/mL;洗脱剂,超纯水;流速,0.7 mL/min。通过试验证明绿豆中的ACE抑制肽可以清除DPPH自由基和ABTS自由基,且清除率效果较好。

反相HPLC法替代分子排阻法测定阿莫西林聚合物的方法研究

目的:对比分析分子排阻Sephadex G-10方法(以下简称G-10法)和RP-HPLC方法检测阿莫西林中聚合物杂质的准确性,探讨RP-HPLC法替代G-10法检测阿莫西林聚合物的可行性。方法:采用溶液稳定性考察方法,考察和对比2种方法中聚合物含量的变化情况及影响因素;分别采用2种方法测定43批阿莫西林产品中聚合物杂质的含量,并对2种检测方法的结果进行相关性分析和多元线性回归,探索2种方法检测结果的关系。结果:阿莫西林杂质J(n=1)为阿莫西林产品中含量最大的聚合物杂质,各聚合物在室温下相对稳定,但温度升高可加速各聚合物的生成,其中杂质J(n=1)增加速度最快,其次为杂质K、杂质L和杂质J(n=2);SPSS软件分析2种方法检测结果发现,G-10方法检出的阿莫西林聚合物含量与RP-HPLC方法检出的杂质L、杂质J(n=1)和杂质J(n=2)含量相关性显著;建立多元线性回归模型得到方程:Y=0.136X_(1)-0.241X_(2)+1.915X_(3)+0.006。结论:建议在有关物质项下优化杂质K、杂质L、杂质J(n=1)和杂质J(n=2)的限度替代阿莫西林聚合物检测。