枇杷叶多糖的分离纯化及组分鉴定

提取纯化枇杷叶多糖,并对其组分进行研究。枇杷叶多糖提取液经大孔树脂除杂,醇沉后干燥即得枇杷叶可溶性总多糖。经DEAE-52纤维素柱层析及Sephadex G-200葡聚糖凝胶柱层析,得到纯化后多糖,并采用Sephadex G-200葡聚糖凝胶柱测定多糖的分子量,水解多糖后采用薄层层析对枇杷叶多糖进行组分鉴定及单糖的组成比例测定。通过DEAE-52柱层析得3个枇杷叶多糖酸性组分,分别经过Sephadex G-200柱层析得到3个乳白色组分,分别为PSL-1、PSL-2、PSL-3。3个组分的洗脱曲线均为单一对称峰,初步判断3个组分含有单一成分的多糖。PSL-1、PSL-2、PSL-3分子量分别约为700、500、400 k Da。经过薄层层析初步推断出PSL-1含有鼠李糖和葡萄糖,含量之比为1∶0.602;PSL-2含有葡萄糖、半乳糖、鼠李糖,含量之比为1∶1.415∶1.408;PSL-3含有半乳糖和鼠李糖,含量之比为1∶1.03。

纯品7S和11S蛋白结构与表面疏水性的相关性研究

以6个具有代表性的大豆品种作为实验材料提取7S和11S,经Superdex 200凝胶柱层析纯化制得纯品7S和11S,用凯氏定氮和SDS-PAGE电泳综合分析其纯度在90%以上。采用SDS-PAGE电泳测定纯品7S和11S的亚基组分,用圆二色光谱分析纯品7S和11S的二级结构,用ANS荧光探针法测定纯品7S和11S的表面疏水性。经分析得出如下结论:大豆蛋白质的表面疏水性与α/亚基含量不相关,与α亚基含量呈正相关,与β亚基含量呈负相关;与酸性亚基含量呈负相关,与碱性亚基含量呈正相关;与α-螺旋含量呈负相关,与β-折叠含量呈负相关,与β-转角含量呈正相关,与无规则卷曲含量呈正相关。

大豆7S和11S蛋白中氨基酸组成与表面疏水性的相关性研究

以6个具有代表性的大豆品种为实验材料提取7S和11S蛋白,经Superdex 200凝胶柱层析纯化制得纯品7S和11S蛋白,用SDS-PAGE和蛋白质纯化仪凝胶柱层析两种方法验证其纯度在90%以上。研究了7S和11S蛋白中氨基酸组成与表面疏水性的相关性。结果表明:7S和11S蛋白的表面疏水性与甘氨酸、脯氨酸、胱氨酸/半胱氨酸、丙氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、酪氨酸、天冬氨酸、苏氨酸、组氨酸的含量呈正相关;与异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、丝氨酸、赖氨酸的含量呈负相关;与谷氨酸和精氨酸的含量不相关。疏水性氨基酸总量与7S和11S蛋白的表面疏水性呈正相关,亲水性氨基酸总量与其表面疏水性不相关。

Mitsraria sp.1412产壳聚糖酶的分离纯化及性质研究

以实验室选育的Mitsuaria sp.1412菌株发酵产壳聚糖酶,采用硫酸铵分级沉淀,表明沉淀饱和度为60%～90%效果较好,壳聚糖酶纯化倍数达1.85倍。然后依次采用离心超滤、离子交换层析和Sephadex G-200凝胶柱层析进行纯化。SDS-PAGE凝胶电泳检测表明,产物仅有一条清晰的条带,显示该壳聚糖酶的分子量为33.6 kD.酶学性质结果表明,该酶的最适反应pH和温度分别为5.5、50℃,并且该酶在pH5.0～8.0和35～45℃范围内,稳定性良好。酶最大反应速度V_(max)为2.8μmol/min,常数K_m为168.4 mmol/L.对该酶的酶解产物进行分析发现其酶解产物为壳二糖和壳三糖。

美国红鱼免疫球蛋白的分离纯化

对灿烂弧菌灭活疫苗接种后的美国红鱼提取血清,采用硫酸铵沉淀和SephadexG-200凝胶层析结合的方法分离纯化出美国红鱼血清免疫球蛋白,并且通过SDS-PAGE对纯化蛋白的部分特性进行分析。结果表明,通过硫酸铵沉淀法可以沉淀血清中大部分的蛋白,电泳条带比较丰富,但仍然含有较多的杂蛋白,经过SephadexG-200凝胶柱层析方法分离,获得纯度较高的免疫球蛋白,经β—巯基乙醇处理后解离形成重链和轻链两个亚单位,分子量分别为69.2 kDa,29.5 kDa,表明美国红鱼血清IgM的分子量与硬骨鱼IgM的分子量范围（H链60~81kDa,L链20-30kDa）是一致。