阴离子交换层析法纯化gp130单克隆抗体B-S12

目的:建立一种从小鼠腹水中获得高纯度、活性好、纯化过程易于放大的抗gp130单克隆抗体BS12的纯化方法。方法:经硫酸铵沉淀等预处理后的腹水样品,在阴离子交换层析柱上进行分离纯化,用MTT法检测纯化后抗体的生物学活性。结果:腹水样品经硫酸铵沉淀、PBS复溶,用pH7.0、20mmol/LTrisHCl缓冲溶液稀释10倍后上强阴离子交换层析柱,NaCl梯度洗脱,可获得纯度大于95%的BS12抗体,回收率达73%,在体外对XG2细胞有明显的促增殖作用。结论:建立了快速高效从小鼠腹水中纯化BS12的方法,为该抗体的进一步应用提供了必要的实验基础。

阴离子交换法去除类人胶原蛋白中的内毒素

采用响应面法优化阴离子交换层析去除重组类人胶原蛋白(HLC)溶液中内毒素的工艺。利用单因素试验考察HLC质量浓度、NaCl浓度和pH值对内毒素去除率的影响,以内毒素去除率和HLC回收率为指标,对三因素进行中心复合设计,并经响应面法优化,分析得到二次多项式回归方程的预测模型。去除内毒素的最佳工艺条件为:HLC质量浓度0.95 mg/mL,pH值7.6,NaCl浓度50 mmol/L。在该条件下,内毒素的去除率及HLC回收率分别可达到97.92%和98.01%。

用阴离子交换层析纯化牛皮蝇素A蛋白的研究

建立了用阴离子交换层析AKTAFPLC纯化果蝇S2细胞分泌的重组牛皮蝇素A(HypodermotinA,HA)的方法。将诱导培养3天的S2细胞上清液浓缩后,经25mMpH8.5Tris-HCl缓冲液透析,在MonoQ柱上以Tris-HCl+NaCl为流动相进行分离。在检测波长280nm处获得蛋白峰。经SDS-PAGE分析,第一峰的分子量与原重组蛋白HA分子量相符,并对明胶大分子具有酶活性;用斑点免疫金渗滤法检测证实对牛皮蝇抗体具有免疫原性。用阴离子交换层析纯化HA的方法具有获得的蛋白质纯度高、操作简便、生产效率高等特点。

测定果汁饮料中的糖类化合物——采用高效阴离子交换色谱层析法—脉动电流探测法(HPAEC-PAD)

随著科技日益进步·我们现已能准确地将食品或饮料的成份详细分析·从面提高品质检定的水平·本文介绍一种能在果汁中测定各种常见糖类化合物的含量的分析方法·集合了目前最先进的分离工艺和探测技术·以协助食品饮料工业发展高水平的品质检定系统

两步串联层析法纯化鼠抗人CD80单克隆抗体4E5

采用阴离子交换与凝胶过滤两步串联层析法，纯化了小鼠腹水来源的CD80阻断型单克隆抗体4E5。腹水样品经离心、过滤预处理后，在Tris-HCl缓冲溶液（pH8．0，50mmol／L）条件下，上阴离子交换柱对目的单抗进行捕集，采用0-0．5mol／L NaCl浓度分步洗脱；含目的单抗的洗脱馏分再上凝胶过滤柱纯化，用PB缓冲溶液（pH7．2，20mmol／L）洗脱，获得目的单抗4E5，其生物学活性高、纯度大于95％，抗体总回收率达61％。

Ⅰ型单纯疱疹病毒gG基因片段的高效表达、纯化

目的 获得具有优势抗原表位的Ⅰ型单纯疱疹病毒糖蛋白G的表达抗原并纯化鉴定。方法 用PCR技术扩增经分析筛选出的HSV1 gG蛋白中优势抗原决定簇较集中的基因片段。将该段基因克隆至PGEX 4T 2表达载体内 ,转化大肠杆菌TGl,对重组体进行诱导表达 ,表达产物主要以可溶性形式存在 ,使用硫酸铵沉淀后采用Sepharose阴离子交换层析进行纯化。纯化的蛋白抗原包被酶联板分别对抗HSV1 IgM阳性血清和正常人血清标本进行检测。 结果 在原核表达载体中成功地克隆了HSV1 gG ,电泳分析表明在相对分子质量 4 3 5kD处有HSV1 gG/GST融合蛋白的高效表达 ,并纯化获得了纯度达 90 %的表达蛋白。ELISA分析初步证实表达产物具有较好的抗原性和特异性。结论 成功地克隆、表达了高纯度的具有良好免疫原性的HSV1 gG蛋白 ,为研制高质量的HSV

蚯蚓组织成分对成纤维细胞增生作用的实验研究

通过蚯蚓组织成分对成纤维细胞增生作用的实验研究 ,探讨其对创伤愈合的作用机制。用醋酸盐缓冲液抽提蚯蚓组织成分 ,经硫酸铵分段盐析、阴离子交换层析、凝胶过滤层析等方法 ,分离提取到 1组蛋白质成分。采用MTT法分析各分离组分对小鼠成纤维细胞增生作用的影响。结果 :经分离提取促增生组分位于SephadexG1 0 0层析第 1峰 ,经SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳显示此促增生组分为 3条区带 ,相对分子质量范围 5 70 0 0、72 0 0 0、870 0 0。

不同分离提纯工艺对冬凌草多糖提取率与免疫活性的影响

目的:优选分离冬凌草多糖的方法,探究不同分离方法对冬凌草多糖分离效果的影响。方法:分别以DEAE-Sepharose Fast Flow(Cl-型)弱极性阴离子交换层析法、乙醇分级醇析法对冬凌草粗多糖进行分离纯化,以不同分离组分中多糖含量及其免疫活性比较优选冬凌草粗多糖的分离工艺。结果:DEAE-Sepharose Fast Flow(Cl-型)弱极性阴离子交换层析法分离得到5个组分,通过乙醇分级醇沉初步得到4个冬凌草多糖组分,前者分离产品纯度较高,而后者产品在体外小鼠脾淋巴T细胞的增殖实验中表现出较强生物活性。结论:为进一步研究冬凌草多糖的生物活性,可选用乙醇分级醇沉法对冬凌草多糖进行分离纯化。

番木瓜水溶性多糖的提取、分离与结构分析

分别采用常规水提醇沉和复合酶法,从番木瓜中提取水溶性粗多糖。苯酚-硫酸法测定多糖含量分别为36.48%和53.82%。粗多糖经脱蛋白,大孔吸附树脂脱色,透析及DEAE-纤维素52型阴离子交换层析,得到番木瓜精多糖CPP1和CPP2。Sepharose 6B琼脂糖凝胶柱层析和醋酸纤维素薄膜电泳初步表明CPP1和CPP2为纯度较高的均一组分。红外光谱分析发现典型多糖吸收峰。离子色谱分别测得CPP1、CPP2的主要单糖组成为鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖和甘露糖。