雷帕霉素促进自噬减轻脓毒症相关性脑病(SAE)小鼠认知功能障碍

目的 明确雷帕霉素促进自噬在脓毒症相关性脑病(SAE)小鼠认知功能障碍中的作用。方法 通过盲肠结扎穿孔术(CLP)建立SAE小鼠模型,采用小鼠脓毒症严重程度评分(MSS)评估SAE小鼠脓毒症的严重程度,条件恐惧记忆实验观察小鼠认知功能。Western blot法检测SAE小鼠海马组织微管相关蛋白1轻链3(LC3)与P62的表达水平,免疫荧光组织化学染色观察LC3在海马区神经元中的表达和分布。结果 CLP术后14 d小鼠死亡率高达41.7%,而幸存小鼠存在显著认知功能障碍。同时,CLP术后14 d小鼠海马组织自噬水平降低。雷帕霉素可促进SAE小鼠海马神经元自噬,减轻其认知功能障碍。结论雷帕霉素促进SAE小鼠海马神经元自噬,减轻其认知功能障碍。

大麻素受体激动剂花生四烯酰氯乙胺(ACEA)通过抑制炎症反应改善小鼠脓毒症相关性脑病

目的 探讨大麻素受体激动剂花生四烯酰氯乙胺(ACEA)对脓毒症相关性脑病(SAE)小鼠认知功能的影响。方法C57BL/6小鼠随机分成人工脑脊液(ACSF)组和脂多糖(LPS)组,通过采用LPS侧脑室注射构建SAE模型,小鼠脓毒症严重程度评分(MSS)和体质量变化判断小鼠的基本情况;行为学范式评估小鼠运动能力(旷场实验)、认知功能(情景前置性条件恐惧实验、 Y迷宫实验)。评估ACEA干预效果中,小鼠随机分为ACSF组、 ACEA干预的ACSF组、 LPS组和ACEA干预的LPS组,ACEA干预组给与1.5 mg/kg ACEA,实时定量PCR检测小鼠海马组织白细胞介素1β(IL-1β)、 IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的mRNA表达水平;Western blot法检测小鼠海马组织IL-6、 TNF-α的蛋白表达水平;尼氏染色检测小鼠海马CA1区神经元损伤情况;行为学范式评估小鼠运动能力(旷场实验)、认知功能(情景前置性条件恐惧实验、 Y迷宫实验)。结果 侧脑室注射LPS 3 d后,小鼠存在显著认知功能障碍,证实SAE造模成功。与ACSF组相比,LPS组海马炎症因子IL-6、 TNF-α及IL-1β mRNA表达水平显著升高,IL-6、 TNF-α蛋白表达水平显著增加,CA1区可见神经元尼氏体减少,小鼠存在显著认知功能障碍;与LPS组相比,ACEA干预组IL-6、 TNF-α及IL-1β mRNA表达水平显著降低,IL-6、 TNF-α蛋白表达水平显著减少,神经元尼氏小体增多,小鼠认知功能改善。结论 ACEA通过抑制IL-6、 TNF-α炎症因子表达水平改善SAE小鼠认知功能。

白藜芦醇促进分子伴侣介导的自噬减轻神经炎症改善脓毒症相关性脑病小鼠情感功能障碍

目的 明确分子伴侣介导的自噬(CMA)减轻脓毒症相关性脑病(SAE)小鼠情感功能障碍的作用。方法 通过盲肠结扎穿孔术(CLP)构建SAE小鼠模型,采用小鼠脓毒症严重程度评分(MSS)评估小鼠脓毒症的严重程度,并进行旷场和高架十字迷宫相关行为学实验检测SAE小鼠的情感功能。Western blot法检测热休克蛋白同源蛋白70(HSC70)、溶酶体相关膜蛋白2A(LAMP2A)和高迁移率族蛋白B1(HMGB1)蛋白表达水平,免疫荧光组织化学染色检测LAMP2A与神经元的共定位情况。ELISA检测炎症因子白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的释放水平。同时按30 mg/kg剂量每天连续给予白藜芦醇灌胃直至第14天。结果 CLP小鼠14 d死亡率为45.83%,而幸存小鼠均存在情感功能障碍。CLP术后24 h海马神经元HSC70和LAMP2A表达水平显著降低,HMGB1表达水平以及炎症因子IL-6和TNF-α释放增加,CMA活性受损,而在灌胃给予白藜芦醇后,HSC70和LAMP2A表达水平增加,HMGB1表达水平降低,炎症因子释放减少,提示CMA活性提高且神经炎症减轻,行为学测试结果表明在给予小鼠白藜芦醇灌胃后小鼠情感功能障碍得到改善。结论 SAE小鼠海马神经元CMA活性显著降低,导致情感功能障碍;白藜芦醇能够促进CMA,从而抑制HMGB1的表达和炎症因子的释放,减轻神经炎症,从而改善SAE小鼠的情感功能障碍。

基于网络药理学探讨银杏叶提取物治疗脓毒症相关性脑病的作用机制

目的:本研究旨在探讨银杏叶提取物(GBE)治疗脓毒症相关性脑病(SAE)的作用机制。方法:利用TCMSP数据库,筛选出GBE的主要活性成分;从GeneCards、OMIM、Disgenet和Drugbank疾病数据库中寻找与SAE相关的靶点。获取银杏叶活性成分与SAE交集靶点,通过String数据库建立蛋白-蛋白互作(PPI)网络,利用Cytoscape 3.9.1软件筛选关键靶点。使用R语言Cluster Profiler软件包对关键靶点进行基因本体(GO)分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析;最后进行分子对接。结果:获取药物与疾病交集靶点101个,确定TOP 5关键靶点为丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(AKT1)、肿瘤抑癌基因p53(TP53)、V-Rel网状内皮增生病毒癌基因同源物A(RELA)、肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素-6(IL-6)。主要富集通路包括磷酸肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)、白细胞介素17(IL-17)、TNF、核因子κB(NF-κB)和Toll样受体(TLR)信号通路等。分子对接结果显示TNF-槲皮素、TNF-木犀草素、IL6-山奈酚均能稳定结合。结论:GBE可能通过AKT1、TP53、RELA、TNF、IL-6等靶点,调控PI3K/Akt、IL-17、NF-κB及TLR信号通路,发挥治疗SAE的作用。

安宫牛黄丸联合治疗脓毒症相关性脑病的临床观察

目的探讨安宫牛黄丸联合常规治疗对脓毒症相关性脑病(sepsis associated encephalopathy, SAE)患者的临床疗效,为中西医结合治疗脓毒症相关性脑病提供新的治疗思路。方法通过随机数字表法将医院60例入住于重症医学科的SAE患者,分为对照组(给予抗感染、器官支持等常规治疗)30例和观察组(于常规治疗基础上给予鼻饲中成药安宫牛黄丸)30例,两组疗程均为7 d。评价两组患者治疗前与治疗后意识障碍格拉斯哥昏迷评定量表(glasgow coma scale, GCS)评分及检测凝血功能指标(血小板、D-二聚体)、白介素-1(IL-1)的变化,统计两组临床疗效,以及随访两组患者治疗28 d后的蒙特利尔认知评估量表(Montreal cognitive assessment, MoCA)评分。结果 (1)治疗7 d后两组患者的GCS评分、凝血功能较治疗前有所改善,且观察组改善效果优于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);(2)治疗7 d后两组患者的IL-1较治疗前有所下降,且观察组下降效果优于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);(3)随访至患者入住于重症医学科后28 d,观察组MoCA评分高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论应用安宫牛黄丸联合常规对症治疗对于SAE疗效显著,有效提高SAE患者的GCS评分及MoCA评分,并可以有效降低SAE患者的IL-1,改善凝血功能。

右美托咪定对脓毒症小鼠的脑保护作用

目的探讨右美托咪定对脓毒症小鼠存活率的影响及脑保护作用并探讨其机制。方法ICR雄性小鼠,体质量20~25g,采用随机数字表法分为四组(n=20):假手术(Sham)组、脓毒症(CLP)组、脓毒症+右美托咪啶(CLP+DEX)组及脓毒症+右美托咪啶+育亨宾(CLP+DEX+Y)组。CLP组通过盲肠结扎穿孔术(CLP)制备脓毒症小鼠模型,Sham组不进行盲肠结扎和穿孔,其余处理与模型组相同。CLP+DEX组于模型制备后0、2、4、6h分别腹腔注射10μg/kg右美托咪定,CLP+DEX+Y组除术后右美托咪定治疗还需于模型制备前30min腹腔注射育亨宾3mg/kg,其他组给予等量生理盐水。于术后24h取小鼠脑组织,对其分别进行脑组织含水量、脑组织匀浆中丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性、脑组织病理和脑细胞凋亡情况的检测。结果CLP组小鼠脑组织含水量增加,脑组织匀浆中MDA含量明显增加,SOD活性明显降低,组织病理学细胞破坏增多、TUNEL染色阳性细胞数增多,10μg/kg的右美托咪啶治疗可使这些变化明显缓解(P<0.05)。育亨宾能拮抗右美托咪定的保护效果。结论右美托咪定通过作用于Ⅸ:肾上腺素受体对脓毒症小鼠脑损伤有明显的保护作用,其机制可能与其抗凋亡作用以及对内源性氧化还原平衡状态的维持有关。

脓毒症相关性脑病的发病机制与监测方法

脓毒症相关性脑病（SAE）是脓毒症常见的一种并发症，不仅增加患者死亡率，而且导致长期的认知功能障碍。揭示SAE的发病机制、早期发现并监测SAE的发生与发展，将有助于降低患者死亡率，提高患者的生存质量。

Morris水迷宫联合神经功能评分法构建脓毒症脑病大鼠模型的研究

目的 在脑电生物监测方法构建脓毒症脑病动物模型的基础上，进一步探讨和改良脓毒症脑病大鼠模型。方法 80只SD大鼠放置脑电监测电极后采用经典盲肠结扎穿孔（cecal ligation and puncture ，CLP）方法诱发脓毒症，术后分别根据脑电图（electroencephalogram，EEG）监测法（简称EEG法）和Morris水迷宫（Morris water maze, MWM）实验联合神经功能评分法（简称MWM法）将大鼠分为脓毒症脑病（sepsis associated encephalopathy, SAE）组和非脓毒症脑病（non-sepsis associated encephalopathy，NSAE）组，比较两种诊断方法的差异。结果 两种诊断方法具有较高一致性，且与后期标本病理改变相符。结论 SAE大鼠EEG方法模型稳定性欠佳，而MWM法鉴别脓毒症脑病与EEG法具有较好的一致性，可以用于脓毒症脑病动物模型筛查。

脓毒症患者发生脓毒症相关性脑病的危险因素

目的探讨脓毒症患者发生脓毒症相关性脑病(SAE)的危险因素。方法根据是否合并SAE,将60例脓毒症患者分为SAE组和非SAE组,记录2组患者呼吸频率、平均动脉压、体温等一般临床资料,比较2组患者序贯器官衰竭评估(SOFA)评分、急性生理学与慢性健康状况评分系统Ⅱ(APACHEⅡ)评分、高尿酸血症、凝血功能障碍、高同型半胱氨酸血症、28 d死亡率及血清GFAP、NSE、S100β水平;将其中有统计学意义的因素纳入多因素分析,采用多因素logistic回归分析SAE发生的危险因素。结果60例脓毒症患者发生SAE 28例,SAE发生率为46.67%;单因素分析结果显示,SAE组患者SOFA评分、APACHEⅡ评分、伴高尿酸血症、凝血功能障碍、高同型半胱氨酸血症患者占比、28 d死亡率高于非SAE组(P<0.05),血清GFAP、NSE、S100β水平高于非SAE组(P<0.05);多因素logistic回归分析SOFA评分、APACHEⅡ评分升高、高水平GFAP、NSE、S100β及伴高尿酸血症、凝血功能障碍、高同型半胱氨酸血症是SAE发生的危险因素(P<0.05)。结论脓毒症患者发生SAE与SOFA评分、APACHE II评分、血清GFAP、NSE、S100β水平偏高及伴高尿酸血症、凝血功能障碍、高同型半胱氨酸血症密切相关。

脓毒症患者相关脑病预测模型的建立和验证

目的探讨脓毒症患者发生脓毒症相关脑病(SAE)的危险因素,建立简便、易用的预测模型并进行验证。方法回顾性分析徐州医科大学附属医院2017年1月至2021年12月入住重症监护病房(ICU)脓毒症患者的临床资料,根据纳入排除标准,确定最终入选病例,将2017年1月至2019年12月收集的病例作为训练队列组(n=640),将2020年1月至2021年12月收集的病例作为验证队列组(n=300)。将训练队列组患者资料进行Logistic回归分析,确定SAE发生的危险因素,建立回归方程,并可视化为列线图。验证队列组对建立的回归方程进行验证,通过绘制受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线及计算ROC曲线下面积(area under the curve,AUC)评价模型的区分度,通过Hosmer-Lemeshow检验和校准图评价模型的校准度。结果本研究共纳入940例患者,单因素及多因素Logistic回归结果表明,高龄、使用升压药、高中枢神经特异蛋白(S100β)水平、低脉搏血氧饱和度(SpO_(2))和低蛋白血症5个因素为SAE发病的独立危险因素(P<0.05),纳入预测模型,该预测模型的AUC在训练和验证队列组分别为0.810(95%CI 0.763~0.857)和0.813(95%CI 0.740~0.885),模型的校准曲线在训练和验证队列组均与平面直角坐标系中45°的直线重合度较高,提示该模型的表现良好。结论本研究建立的预测模型可以科学、有效地对SAE的发生进行预测,操作简便、快速,具有重要的临床价值。

基于肠-脉络丛血管屏障探讨桃核承气汤对脓毒性脑病的治疗作用

目的:探讨桃核承气汤对脓毒性脑病(SAE)的治疗效果及作用机制。方法:70只雄性SD大鼠随机分为假手术组,模型组,0.5倍、1倍、2倍桃核承气汤组。采用盲肠结扎法(CLP)构建模型。采用旷场实验观测各组大鼠运动及探索能力;ELISA法检测大鼠血清及海马组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6和脂多糖(LPS)的含量;尼氏染色法观察海马组织中尼氏小体的形成;免疫荧光法检测肠、脉络丛组织切片中PV-1的表达;Western Blot法检测肠、脉络丛组织中PV-1、HIF-1α、VEGF-A的蛋白表达。结果:与假手术组比较,CLP术后24 h模型组腹腔感染明显、大鼠运动能力明显下降,血清和海马组织中炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6、LPS释放显著增加(P<0.01,P<0.05),肠、脉络丛组织中PV-1、HIF-1α、VEGF-A蛋白表达显著升高(P<0.01)。与模型组比较,不同浓度桃核承气汤均能改善大鼠腹腔感染情况,增加运动及探索能力,改善海马神经元损伤,显著降低血清及海马组织中TNF-α、IL-1β、IL-6、LPS的含量,其中1倍剂量效果最佳。此外,桃核承气汤能够显著降低模型组肠、脉络丛组织中PV-1、HIF-1α、VEGF-A蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。结论:桃核承气汤能够通过改善肠-脉络丛血管屏障功能治疗SAE,而HIF-1α、VEGF-A很可能为关键调控分子。

脓毒症相关性脑病雄性小鼠学习记忆障碍与海马区α7nAChR表达及M1/M2型小胶质细胞比例有关

目的 探索脓毒症相关性脑病(SAE)雌雄小鼠认知差异及其内在机制。方法 6~8周龄雌雄小鼠分别进行盲肠结扎穿刺术(CLP)诱导SAE模型,通过新物体识别和恐惧记忆实验检测小鼠学习记忆功能。采用免疫荧光组织化学染色法检测SAE雌雄小鼠海马区域α7烟碱型乙酰胆碱能受体(α7nAChR)表达和分布,M2型小胶质细胞比例,Western blot法检测α7nAChR蛋白水平。结果 SAE雄性小鼠学习记忆功能较SAE雌性小鼠明显降低,且SAE雄性小鼠海马区域α7nAChR蛋白表达水平较SAE雌性小鼠显著下降。同时海马区SAE雄性小鼠M2型小胶质细胞所占比例较雌性小鼠明显降低。结论 SAE雄性小鼠海马区域α7nAChR蛋白表达水平较SAE雌性小鼠显著下降,且M2型小胶质细胞比例相对降低,导致SAE雄性小鼠学习记忆功能障碍的发生。