颅内动脉瘤组织中Septin4的表达及其通过调节自噬对人脑血管平滑肌细胞的作用研究

目的:探究Septin4在颅内动脉瘤中的表达及其对人脑血管平滑肌细胞(HBVSMCs)的作用及可能的作用机制。方法:收集颅内动脉瘤组织和正常颅动脉组织各32份,通过免疫组化(IHC)、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法检测组织中Septin4的表达;免疫荧光染色(IF)检测平滑肌22α(SM22α)和平滑肌α肌动蛋白(αSMA)表达;分别将Septin4过表达载体(Septin4)、Septin4干扰序列(si-Septin4)及其阴性对照(NC和si-NC)转染HBVSMCs,RT-PCR和蛋白质印迹法检测HBVSMCs中Septin4的表达;蛋白质印迹法检测αSMA、SM22α、基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9、微管相关蛋白1轻链3(LC3)、sequestosome 1(p62)、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMPK)、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、磷酸化哺乳动物类雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)和哺乳动物类雷帕霉素靶蛋白(mTOR)蛋白表达。结果:与正常颅动脉组织相比,颅内动脉瘤组织中Septin4阳性细胞数、mRNA表达、蛋白表达及SM22α和αSMA荧光强度明显降低(P<0.05)。与NC组相比,Septin4组细胞中Septin4 mRNA表达及Septin4、αSMA、SM22α、p62、p-mTOR/mTOR蛋白表达明显升高(P<0.05),MMP2、MMP9、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和p-AMPK/AMPK蛋白表达明显降低(P<0.05);与si-NC组相比,si-Septin4组细胞中Septin4 mRNA表达及Septin4、αSMA、SM22α、p62、p-mTOR/mTOR蛋白表达明显降低(P<0.05),MMP2、MMP9、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和p-AMPK/AMPK蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论:Septin4可能通过调节AMPK/mTOR信号通路抑制自噬,促进HBVSMCs向收缩型表型转化,在颅内动脉瘤中发挥保护作用。

Septin4_I2基因活化肝星状细胞中的表达及序列生物信息学分析

目的观察活化的肝星状细胞中Septin4_I2基因的表达,并对其进行生物信息学分析。方法采用实时荧光定量PCR法观察活化的肝星状细胞LX-2中Septin4_I2基因的表达,利用网络平台和生物软件分析Septin4_I2序列。结果活化的肝星状细胞中Septin4_I2基因表达上调。Septin4_I2基因序列含有5个内含子及保守的GTP结合位点。Septin4_I2蛋白以loop结构为主,氨基酸序列中含有数个丝氨酸、苏氨酸及酪氨酸磷酸化位点,含有特异性的蛋白激酶K、蛋白激酶C及酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点,含有N-豆蔻酰化位点。结论活化的肝星状细胞Septin4_I2基因表达上调,编码蛋白可能与细胞分裂相关。