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The 5-HT2c receptor gene Cys23Ser polymorphism influences the intravaginal ejaculation latency time in Dutch Caucasian men with lifelong premature ejaculation 被引量:3
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作者 Paddy KC Janssen Ron van Schaik +1 位作者 Berend Olivier Marcel D Waldinger 《Asian Journal of Andrology》 SCIE CAS CSCD 2014年第4期607-610,共4页
It has been postulated that the persistent short intravaginal ejaculation latency time (IELT) of men with lifelong premature ejaculation (LPE) is related to 5-hydroxytryptamine (HT)2c receptor functioning. The a... It has been postulated that the persistent short intravaginal ejaculation latency time (IELT) of men with lifelong premature ejaculation (LPE) is related to 5-hydroxytryptamine (HT)2c receptor functioning. The aim of this study was to investigate the relationship of Cys23Ser 5-HT2c receptor gene polymorphism and the duration of IELT in men with LPE. Therefore, a prospective study was conducted in 64 Dutch Caucasian men with LPE. Baseline IELT during coitus was assessed by stopwatch over a 1-month period. All men were genotyped for Cys23Ser 5-HT2c receptor gene polymorphism. Allele frequencies and genotypes of Cys and Ser variants of 5-HT2c receptor gene polymorphism were determined. Association between Cys/Cys and Ser/Ser genotypes and the natural logarithm of the IELT in men with LPE were.investigated. As a result, the geometric mean, median and natural mean IELT were 25.2, 27.0, 33.9s, respectively. Of all men, 20.0%, 10.8%, 23.1% and 41.5% ejaculated within 10, 10-20, 20-30 and 30-60s after vaginal penetration. Of the 64 men, the Cys/Cys and Ser/Ser genotype frequency for the Cys23Ser polymorphism of the 5-HT2c receptor gene was 81% and 19%, respectively. The geometric mean IELT of the wildtypes (Cys/Cys) is significantly lower (22.6s; 95% CI 18.3-27.8s) than in male homozygous mutants (Ser/Ser) (40.4s; 95% CI 20.3-80.4s) (P = 0.03). It is concluded that Cys23Ser 5-HT2c receptor gene polymorphism is associated with the IELT in men with LPE. Men with Cys/Cys genotype have shorter IELTs than men with Ser/Ser genotypes. 展开更多
关键词 5-HT2c receptor gene Cys23ser polymorphism intravaginal ejaculation latency time lifelong premature ejaculation
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利用CRISPR/Cas12a与SERS技术对HPV核酸的快速检测
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作者 苏艾玲 曹修冕 +1 位作者 徐蔚青 徐抒平 《光谱学与光谱分析》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2023年第S01期191-192,共2页
为了有效预防宫颈癌的发生以及更好的术后跟踪治疗,实现对HPV病毒DNA快速可靠的检测是至关重要的。与传统方法相比,通过缩短检测时间和减少劳动力来进一步简化HPV病毒DNA检测仍然是一个挑战。该研究提出了一种基于CRISPR/Cas12a对基因的... 为了有效预防宫颈癌的发生以及更好的术后跟踪治疗,实现对HPV病毒DNA快速可靠的检测是至关重要的。与传统方法相比,通过缩短检测时间和减少劳动力来进一步简化HPV病毒DNA检测仍然是一个挑战。该研究提出了一种基于CRISPR/Cas12a对基因的SERS检测方法。主要利用目标病毒核酸与Cas12a、crRNA形成三元复合体,开启切割体系中的底物单链DNA(ssDNA)。ssDNA可以连接探针1(AuNPs@MBN@DNA1)和探针2(AuNPs@MBN@DNA2)。探针1和探针2是否被桥连可引起SERS信号的变化,即可知待检样品中是否含有目标核酸。利用特异性的crRNA可以实现对病毒核酸的准确快速检测。该传感方法可在40 min内实现对HPV基因的高灵敏度检测。由于DNA探针和crRNA设计的灵活性,该CRISPR/Cas-SERS传感系统可以扩展成一种通用的基因检测工具,有望在体外诊断领域和检测中具有广阔的应用前景。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas12a serS 病毒基因检测
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表面增强拉曼散射技术应用于基因分析的研究进展
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作者 王波 王宇春 +2 位作者 张超 郜洪胜 贺慧英 《光谱学与光谱分析》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2024年第6期1512-1517,共6页
基因是生物体中传递遗传信息的基本单位,对从分子水平上理解生命现象具有重要意义。近年来针对基因的高效检测及基因相关领域的研究备受关注,基因检测的常用方法是分子生物学方法,主要集中在实验室内开展。相对而言表面增强拉曼散射(SE... 基因是生物体中传递遗传信息的基本单位,对从分子水平上理解生命现象具有重要意义。近年来针对基因的高效检测及基因相关领域的研究备受关注,基因检测的常用方法是分子生物学方法,主要集中在实验室内开展。相对而言表面增强拉曼散射(SERS)实时表征技术在基因分析中具有很好的应用前景,在基因的检测与鉴别的一些领域逐渐发挥出明显的优势。SERS是一种重要的光谱分析技术,是基于光化学技术的生物活性分子传感器。20世纪70年代,SERS现象的发现给光谱技术的研究注入了新的活力。由于SERS技术不受水分子干扰,因此具有灵敏度高、选择性高、信息量大以及适合水溶液物质研究等优点,能够快速、准确地为生物提供丰富的结构信息,即分子的“指纹”信息。在生命科学领域,SERS技术越来越多地应用于目标样本的原位无损探测。通过对拉曼光谱技术的特点,结合基因的结构特征进行分析,简要介绍了拉曼光谱的原理,围绕SERS散射的原理综述了拉曼光谱信号放大的增强模式和增强介质材料,解决了其含量低检测难、灵敏度低、信号复杂、选择性和特异性差以及信号重现性和稳定性不佳等难点,因此在基因分析领域中得到迅速发展,成为国内外研究的热点,显示出独特的价值和作用;重点阐述了SERS在DNA分子结构、DNA作用机制等方面的探索;并且针对SERS技术结合最新生物技术用于基因分析进行分类综述,讨论了SERS基因分析技术在疾病诊断、病原检测、药物分析、转基因鉴定等方面的最新进展,总结了SERS技术在实际应用中面临的机遇与挑战,简要分析其存在的问题以及在生命科学领域发展的方向和潜力,并对SERS技术广阔的应用前景进行了展望。 展开更多
关键词 表面增强拉曼散射 基因 研究进展
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线粒体tRNA^(ser(UCN))基因突变致线粒体脑肌病1例并文献复习 被引量:1
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作者 苏玲 刘丽 +2 位作者 程静 李秀珍 戴津 《中国循证儿科杂志》 CSCD 2008年第4期286-291,共6页
目的分析1例线粒体细胞病患儿的临床表现及其基因突变特点。方法对1例临床诊断为线粒体脑肌病患儿归纳总结其临床表现及实验室检查结果,并运用PCR法扩增患儿外周血线粒体基因3243、8344和8993热点突变及已报道的62个常见突变位点所在片... 目的分析1例线粒体细胞病患儿的临床表现及其基因突变特点。方法对1例临床诊断为线粒体脑肌病患儿归纳总结其临床表现及实验室检查结果,并运用PCR法扩增患儿外周血线粒体基因3243、8344和8993热点突变及已报道的62个常见突变位点所在片段,对扩增片段采用直接测序方法检测突变。在某医院年度体检中选择70名无血缘关系的健康成人作为正常对照,采用PCR-RFLP方法进行多态性分析。结果男性患儿,1岁9个月时出现持续高乳酸血症、反复严重代谢性酸中毒和高氨血症,头颅CT扫描显示双侧额顶叶对称性空泡样低密度灶,考虑线粒体性脑肌病;脑萎缩。2岁时死亡。患儿外周血线粒体基因3243、8344和8993热点突变及已报道的62个常见突变位点均未见突变,患儿线粒体tRNAser(UCN)基因存在7496 T→C突变。为证实在正常人群中线粒体tRNAser(UCN)基因是否存在7496 T→C突变,70名正常对照组皆未发现这一位点突变。结论线粒体脑肌病可以表现为代谢紊乱和神经损伤,应提高警惕。线粒体tRNAser(UCN)基因7496 T→C突变可能导致线粒体细胞病。该突变尚未见报道。 展开更多
关键词 线粒体细胞病 线粒体基因 高乳酸血症
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人tRNA^(ser)基因真核表达质粒的构建及对FRL-19肝癌细胞的高效转染 被引量:1
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作者 卜淑蕊 赵蔚明 王红 《山东大学学报(医学版)》 CAS 2003年第1期47-49,共3页
目的:构建人tRNAser(CGA)基因与真核表达载体pSV2neo的重组体,探讨细胞高效转染新方法,研究tRNA种类及丰度对转录后翻译水平的影响;为探索基因治疗新思路打下基础。方法:EcoRI酶切pGEM-TeasytRNAser(CGA)质粒释放目的基因tRNAser(CGA)片... 目的:构建人tRNAser(CGA)基因与真核表达载体pSV2neo的重组体,探讨细胞高效转染新方法,研究tRNA种类及丰度对转录后翻译水平的影响;为探索基因治疗新思路打下基础。方法:EcoRI酶切pGEM-TeasytRNAser(CGA)质粒释放目的基因tRNAser(CGA)片断,与pSV2neo载体构成重组体,双酶消化鉴定重组载体插入方向。扩增纯化构建的pSV2neotRNAser(CGA)质粒,经脂质体和Plus试剂混合包装,转染FRL-19肝癌细胞株。用Hirt方法提取胞浆DNA,做Southernblot。结果:用Nsil和BamHI双酶切鉴定获得正确方向的重组质粒pSV2neotRNAser(CGA),DNA测序显示其序列正确。Southernblot结果显示:在400bp处可见一条特异DNA条带,说明pSV2neotRNAser(CGA)已转入FRL-19细胞。结论:成功构建人pSV2neotRNAser(CGA)真核表达质粒。Plus试剂可明显提高脂质体转染FRL-19细胞的效率。 展开更多
关键词 基因 tRNA^ser 克隆 分子 细胞转染
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p53-Ser^392的磷酸化在肿瘤治疗中的作用 被引量:1
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作者 刘景利 石新丽 +3 位作者 崔澂 任来峰 郑文广 李明远 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期437-440,共4页
磷酸化是p53转录后修饰最常见的方式,但对p53-Ser392的磷酸化在肿瘤治疗中的作用及具体机制知之甚少。我们就p53-Ser392的磷酸化状态对野生型及突变型p53功能的影响、放疗化疗因素及蛋白激酶对p53-Ser392的磷酸化水平的调节和p53-Ser39... 磷酸化是p53转录后修饰最常见的方式,但对p53-Ser392的磷酸化在肿瘤治疗中的作用及具体机制知之甚少。我们就p53-Ser392的磷酸化状态对野生型及突变型p53功能的影响、放疗化疗因素及蛋白激酶对p53-Ser392的磷酸化水平的调节和p53-Ser392的磷酸化研究意义进行了阐述。 展开更多
关键词 P53 ser^392 磷酸化 肿瘤治疗 基因定点突变 免疫印迹法
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外源性tRNAser对人乳头瘤病毒E7基因表达的影响 被引量:1
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作者 赵蔚明 卜淑蕊 +2 位作者 王红 刘文军 于修平 《山东大学学报(医学版)》 CAS 2004年第1期5-8,共4页
目的:探讨哺乳动物细胞中特定外源性tRNAser(CGA)的表达对HPV6bE7蛋白转译的影响,为研究HPV抗原表达的机制提供实验依据。方法:提取重组真核表达质粒pSVtRNAser(含人tR-NAsercDNA的全部序列)、pcDNA3-WtE7(含野生型HPV6bE7ORF)、pcDNA3-... 目的:探讨哺乳动物细胞中特定外源性tRNAser(CGA)的表达对HPV6bE7蛋白转译的影响,为研究HPV抗原表达的机制提供实验依据。方法:提取重组真核表达质粒pSVtRNAser(含人tR-NAsercDNA的全部序列)、pcDNA3-WtE7(含野生型HPV6bE7ORF)、pcDNA3-HuE7(含优化密码人源化HPV6bE7ORF),EcoRI酶切鉴定pSVtRNAserKpnI和EcoRI双酶切鉴定pcDNA3-HuE7和pcDNA3-WtE7。将质粒DNApSVtRNAser分别与pcDNA3-WtE7或pcDNA3-HuE7混合,脂质体介导共转染COS-1细胞。转染后48h,做免疫荧光染色。结果:重组质粒酶切鉴定结果正确。免疫荧光检测显示:与野生型E7基因单独转染组相比,pSVtRNAser与pcDNA3-WtE7共转染的COS-1细胞中,E7蛋白的表达增强。pcDNA3-HuE7质粒单独转染的COS-1细胞中优化密码E7基因可获得有效表达,共转染后,荧光阳性细胞未见明显增多。Southernblot检测结果显示,在400bp处可见特异DNA条带,说明质粒pSV2tRNAser已转入COS-1细胞。结论:补充外源性pSVtRNAser对COS-1细胞中野生型HPV6bE7基因的表达有一定程度的增强作用。 展开更多
关键词 乳头状瘤病毒 基因表达 E7 RNA 转移 丝氨酸
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SERS标记方法在生化分析中的应用 被引量:1
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作者 刘建芝 朱桂池 胡勇军 《激光生物学报》 CAS 2015年第1期17-24,共8页
表面增强拉曼散射(SERS)标记方法结合现代生物标记方法与SERS光谱技术,使吸附到金或银等贵金属表面的标记分子的拉曼信号显著增强,并将其作为标记示踪信号,具有生物兼容性好、灵敏度高、分子特征性强和快速简便等优点,已成为新颖的标记... 表面增强拉曼散射(SERS)标记方法结合现代生物标记方法与SERS光谱技术,使吸附到金或银等贵金属表面的标记分子的拉曼信号显著增强,并将其作为标记示踪信号,具有生物兼容性好、灵敏度高、分子特征性强和快速简便等优点,已成为新颖的标记示踪技术的研究热点之一。本文综述近年来SERS标记技术应用于基因分析、蛋白质检测、微生物检测、肿瘤靶向和小分子物质的最新进展,着重介绍蛋白质和小分子物质的检测,并展望了今后的发展方向。 展开更多
关键词 表面增强拉曼散射 标记 基因 蛋白质 微生物 肿瘤靶向 小分子
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家蚕miR-0047对丝胶蛋白基因BmSer-1表达的调控作用研究 被引量:2
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作者 钱平 蒋涛 +4 位作者 何平 陈晨 唐旭东 唐顺明 沈兴家 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期922-928,共7页
对家蚕中部丝腺小RNA高通量测序获得若干新miRNA,生物信息学分析发现Bmo-miR-0047可能对家蚕丝胶蛋白基因Bm Ser-1有调控作用。设计特异性茎环引物,利用半定量RT-PCR检测分析家蚕5龄3 d幼虫丝腺(包括前、中、后部丝腺)、头部、脂肪体、... 对家蚕中部丝腺小RNA高通量测序获得若干新miRNA,生物信息学分析发现Bmo-miR-0047可能对家蚕丝胶蛋白基因Bm Ser-1有调控作用。设计特异性茎环引物,利用半定量RT-PCR检测分析家蚕5龄3 d幼虫丝腺(包括前、中、后部丝腺)、头部、脂肪体、表皮、中肠、马氏管、精巢/卵巢、血淋巴细胞和气管等12个器官组织中Bmo-miR-0047的表达情况。结果显示,中部丝腺中Bmo-miR-0047的相对表达量明显高于其他组织,说明在家蚕5龄幼虫期Bmo-miR-0047对Bm Ser-1基因的表达调控存在时空特异性。为了进一步分析Bmo-miR-0047对Bm Ser-1基因表达的调控作用,构建重组表达载体pc DNA3.0(ie1-egfp-pri-miR-0047-SV40)和p GL3(A3-luc-Bm Ser-1 3'UTR-SV40),并以海肾荧光素酶报告质粒pRL-CMV为内参,利用家蚕卵巢培养细胞Bm N进行共转染。转染后检测发现实验组Bm N细胞中的荧光素酶活性与对照组相比显著减弱,表明Bmo-miR-0047在体外培养细胞中对Bm Ser-1基因的表达具有负调控作用。 展开更多
关键词 家蚕 微小RNA Bmo-miR-0047 丝胶蛋白基因ser-1 转录后调控
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白血病融合基因(b3a2) SERS光谱超灵敏检测研究
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作者 王运燚 林学亮 +5 位作者 许云超 谢佳文 秦添俤 黄鋆 黄慧芳 冯尚源 《光散射学报》 2019年第4期373-380,共8页
在慢性髓系白血病(CML)人体内,会出现融合基因并产生相应的蛋白质,这些蛋白质具有激酶功能,严重影响细胞的代谢,并导致细胞周期异常,最后恶化成癌细胞。BCR-ABL融合基因(b3a2)在临床上可作为慢性髓性白血病的诊断标志物,但目前临床检测... 在慢性髓系白血病(CML)人体内,会出现融合基因并产生相应的蛋白质,这些蛋白质具有激酶功能,严重影响细胞的代谢,并导致细胞周期异常,最后恶化成癌细胞。BCR-ABL融合基因(b3a2)在临床上可作为慢性髓性白血病的诊断标志物,但目前临床检测方法存在灵敏度和特异性低等缺陷。本研究采用硅烷偶联剂修饰二氧化硅片,并使其质子化,吸附合成的带负电的银纳米粒子(AgNPs),最终通过银和氨基行成化学键牢固组装在二氧化硅片上构建二维表面增强拉曼光谱(SERS)基底。接着通过修饰在带正电的AgNPs的信号链和修饰在SERS基底的捕获链一起结合BCR-ABL融合基因(b3a2),信号链上有Cy5拉曼标记分子,通过检测Cy5的拉曼光谱信号实现对BCR-ABL融合基因(b3a2)定量检测。实验结果表明,本研究可以实现BCR-ABL融合基因(b3a2)的高灵敏度、特异性检测,检测限可达到42.28 fmol/L。本方法为临床上超灵敏检测BCR-ABL融合基因提供了一个潜在方案,可以很好的解决临床上检测灵敏度低与特异性弱等问题。 展开更多
关键词 慢性髓系白血病(CML) BCR-ABL融合基因(b3a2) 表面增强拉曼光谱(serS) 超灵敏检测
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猪链球菌真核样丝氨酸/苏氨酸激酶stk基因敲除株的构建 被引量:4
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作者 杜骁杰 王玲 +6 位作者 郑峰 李敏 王晶 胡丹 李先富 王长军 潘秀珍 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1162-1167,共6页
目的构建猪链球菌(Streptococcus suis,S.suis)2型强毒株05ZYH33真核样丝氨酸/苏氨酸激酶(eukaryoticlike Ser/Thr kinase,eSTK)stk基因敲除突变株。方法构建中间为壮观霉素抗性基因(Spcr),两侧为stk编码基因上下游同源序列的基因敲除质... 目的构建猪链球菌(Streptococcus suis,S.suis)2型强毒株05ZYH33真核样丝氨酸/苏氨酸激酶(eukaryoticlike Ser/Thr kinase,eSTK)stk基因敲除突变株。方法构建中间为壮观霉素抗性基因(Spcr),两侧为stk编码基因上下游同源序列的基因敲除质粒,通过同源重组筛选stk编码基因敲除突变株。结果组合PCR分析和基因测序结果均显示stk编码基因完全被壮观霉素抗性基因替代,基因敲除突变株△stk构建成功。逆转录PCR(RT-PCR)证实了stk在转录水平上的缺失。对筛选的突变株进行连续传代培养,证实△stk能够保持稳定的壮观霉素抗性表型。结论 stk基因敲除突变株的成功构建,为阐明该基因在猪链球菌致病过程中的作用奠定基础。 展开更多
关键词 猪链球菌 真核样丝氨酸 苏氨酸激酶 基因敲除 突变株
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小菜蛾p38 MAPK基因的克隆与生物信息学分析 被引量:2
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作者 胡霞 谷希树 +4 位作者 刘晓琳 白义川 徐维红 刘佰明 许静杨 《山东农业科学》 2013年第8期15-18,共4页
小菜蛾(PhttellaxylostellaL.)是一种危害十字花科植物的世界性害虫,研究其基因功能为寻找新的小菜蛾防治方法具有重要意义。本研究克隆了小菜蛾p38MAPK基因的开放阅读框(ORF),并根据其DNA序列推导出了蛋白一级结构,发现该基因... 小菜蛾(PhttellaxylostellaL.)是一种危害十字花科植物的世界性害虫,研究其基因功能为寻找新的小菜蛾防治方法具有重要意义。本研究克隆了小菜蛾p38MAPK基因的开放阅读框(ORF),并根据其DNA序列推导出了蛋白一级结构,发现该基因编码一个含有349个氨基酸残基的蛋白。通过SMART网站分析发现该蛋白在第20~304位氨基酸残基区域存在着一个典型的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶结构域,说明它是一个潜在的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。Blast比对发现Pxp38基因与家蚕Bmp38基因、酿酒酵母ScHOGl基因、人类Homosapiensp38基因在蛋白~级结构上的相似性分别是91.7%、51.6%和78.6%,说明p3sMAPK基因在进化上具有较高的保守性。· 展开更多
关键词 小菜蛾 p38基因 MAPK 丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶 生物信息学分析
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植物抗病基因的分子生物学研究进展 被引量:13
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作者 朱国峰 瞿礼嘉 +1 位作者 顾红雅 陈章良 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 1997年第6期561-569,共9页
植物在长期的进化过程中,需要不断地抵抗病原微生物、昆虫甚至食草动物的侵害。在这种长期相互作用、相互影响的共进化过程中,植物逐渐获得了一系列复杂的防御机制来保护自己。这里既有专一性的抗性,也有非专一性抗性,有的表达是组成型... 植物在长期的进化过程中,需要不断地抵抗病原微生物、昆虫甚至食草动物的侵害。在这种长期相互作用、相互影响的共进化过程中,植物逐渐获得了一系列复杂的防御机制来保护自己。这里既有专一性的抗性,也有非专一性抗性,有的表达是组成型的而有的是诱导型的。在植物抵抗病原侵染的过程中,关键环节是病原与寄主植物间的相互识别及其随后诱发的一系列反应。人们虽然对植物抗病机理及植物抗病性在生产应用等方面做了大量的工作,积累了相当多的资料,但由于一直未能克隆到植物的抗病基因,所以在90年代初期以前有关植物抗病性的分子生物学研究进展一直都很缓慢。而最近的几年里,人们克隆到了一些植物的抗病基因,使得对寄主-病原相互作用分子机理的研究得到迅速的发展,并为抗病基因在生产中的应用带来了新的前景。 展开更多
关键词 植物 抗病性 抗病基因 分子生物学
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人细胞增殖相关激酶plk3基因逆转录病毒载体的构建及对细胞增殖的影响
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作者 江汕 冯振卿 +3 位作者 江千里 李玉华 彭韬 印虹 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期29-32,共4页
目的:构建人细胞增殖相关激酶基因plk3的逆转录病毒载体(RV),观察该基因对细胞增殖和细胞周期的影响。方法:将plk3基因亚克隆至pMSCV-puroR载体中,经酶切和测序鉴定,制备高滴度的RV,以流动感染法高效感染,半固体集落培养法测... 目的:构建人细胞增殖相关激酶基因plk3的逆转录病毒载体(RV),观察该基因对细胞增殖和细胞周期的影响。方法:将plk3基因亚克隆至pMSCV-puroR载体中,经酶切和测序鉴定,制备高滴度的RV,以流动感染法高效感染,半固体集落培养法测定基因导入率:用嘌呤霉素筛选后,获得K562-plk3-puroR和HL60-plk3-puroR细胞。以野生型细胞和导入空载体的K562-puroR和HL60-puroR细胞作为对照,用PCR鉴定基因的导入,并测定细胞周期及凋亡率等,研究plk3基因导入对细胞的影响:结果:获得pMSCV—plk3-puroR质粒并经酶切和测序证实。对K562和HL60细胞的基因导入率,分别达82.3%±3.70%和62.9%±4.94%(n=3)。经嘌呤霉素筛选后,转基因细胞的阳性率〉99%。K562-plk3-puroR和HL-60-plk3-puroR转基因细胞的增殖曲线比对照细胞降低(P〈0.01);而导入空载体的K562-puroR和HL60-puroR细胞的增殖曲线与野生型细胞相比较无显著差异.与K562细胞相比较,常规培养时,处于G0~G1期的K562-plk3-puroR细胞增多[(49.7±3.38)%vs(43.9±2.34)%,P=0.03].以无血清培养堆培养10h后,进入S期的K562-plk3-puroR细胞减少[(43.6±3.74)%vs(54.5±1.52)%,P=0.02],凋亡率降低[(1.3±0.31)%vs(3.4±0.37)%,P=0.01],结论:构建了plk3基因的逆转录病毒载体,发现plk3基因的导入叮延缓细胞增殖,并抑制细胞进入增殖周期. 展开更多
关键词 逆转录病毒载体 plk3基因 细胞周期 丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族
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Chromosomal localization of silkworm (Bombyx mori) sericin gene 1 and chymotrypsin inhibitor 13 using fluorescence in situ hybridization 被引量:2
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作者 Yutaka BANNO Hiroshi FUJII 《Science China(Life Sciences)》 SCIE CAS 2008年第2期133-139,共7页
The chromosomal locations of two single-copy genes, Ser-1 and CI-13, in silkworm (Bombyx mori) were detected at the molecular cytogenetics level by fluorescence in situ hybridization in the study. The results showed t... The chromosomal locations of two single-copy genes, Ser-1 and CI-13, in silkworm (Bombyx mori) were detected at the molecular cytogenetics level by fluorescence in situ hybridization in the study. The results showed that Ser-1 is located near the distal end of the 11th linkage group, relatively at the 12.5±1.4 position in pachytene; and that CI-13 has been mapped near the distal end of the 2nd linkage group, relatively at the 8.2±1.2 position in pachytene. Furthermore, their location model map-FISH map on silkworm chromosome was drawn. The FISH technique and its application to silkworm are also discussed in this paper. 展开更多
关键词 Bombyx mori serICIN gene 1(ser-1) CHYMOTRYPSIN inhibitor 13 gene (CI-13) fluorescence in SITU hybridization chromosome mapping
原文传递
脱氧胞苷激酶Ser-74位点在辐射诱导的乳腺癌细胞死亡中的作用
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作者 梁楠 信瑞 +5 位作者 徐慧英 刘晓冬 高冰 侯威 张雪鹤 马淑梅 《中华放射医学与防护杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期565-569,共5页
目的研究脱氧胞苷激酶(dCK)S74位点在辐射诱导乳腺癌细胞MCF-7死亡中的作用。方法采用脂质体转染方法在MCF-7中分别构建dCK—Vector(空载体)、dCK—WT(野生型)、dCK-S74A(非磷酸化型)及dCK-S74E(过磷酸化型)4种细胞模型,均... 目的研究脱氧胞苷激酶(dCK)S74位点在辐射诱导乳腺癌细胞MCF-7死亡中的作用。方法采用脂质体转染方法在MCF-7中分别构建dCK—Vector(空载体)、dCK—WT(野生型)、dCK-S74A(非磷酸化型)及dCK-S74E(过磷酸化型)4种细胞模型,均分别予以0,2,4,6和8GyX射线照射。实时定量PCR(QPCR)及Westernblot验证细胞模型,CCK-8法和集落形成实验检测细胞存活率,单丹磺酰尸胺(MDC)检测自噬发生率,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果成功构建4种细胞模型;CCK_8结果显示,与0Gy组相比,MCF-7和dCK—Vector经8Gy照射后存活率下降(t=14.469和9.357,P〈0.05),dCK-WT、dCK-S74E和dCK-S74A没有改变(P〉0.05);与dCK-Vector比较,dCK-wT和dCK.$74E照射后的总死亡率降低(X2=3.857~3.971和3.857—3.859,P〈0.05),dCK-S74A则没有变化(P〉0.05);与各自0Gy组比较,MCF7、dCK—Vector和dCK-S74A照射后凋亡发生率升高(t=-4.531、-3.688和-7.076,P〈0.05),而dCK—wT和dCK-S74E使照射诱导的凋亡率逆转了66%和68%;dCK—wT和dCK-S74E照射后自噬率分别增加22%和26%(f=-9.051和-8.411,P〈0.01),dCK-S74A、MCF-7和dCK—Vector照射后的自噬率没有明显变化(P〉0.05)。结论riCK-WT和dCK-S74E使电离辐射诱导的凋亡率增加发生逆转,同时使自噬率增加,总死亡率降低,提示dCK在Ser.74的磷酸化与乳腺癌细胞MCF-7的辐射敏感性有关。 展开更多
关键词 dCK基因 ser-74 电离辐射 凋亡 自噬
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生防菌Act12铁载体合成酶Ser基因的功能 被引量:4
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作者 赵玉玲 董奉鑫 +2 位作者 李素俭 黄丽丽 颜霞 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期79-85,共7页
【目的】通过敲除生防菌Act12铁载体合成酶Ser基因,研究该铁载体在植物防病促生中的作用。【方法】以自杀型质粒p KC1132作为基本载体,两侧为Ser基因上下游片段作为同源交换臂,两个同源臂之间为卡那霉素抗性基因,构建重组质粒p CT12;借... 【目的】通过敲除生防菌Act12铁载体合成酶Ser基因,研究该铁载体在植物防病促生中的作用。【方法】以自杀型质粒p KC1132作为基本载体,两侧为Ser基因上下游片段作为同源交换臂,两个同源臂之间为卡那霉素抗性基因,构建重组质粒p CT12;借助接合转移技术,将该质粒导入Act12,筛选突变株并进行PCR验证;研究Ser基因缺失突变体和野生型菌株Act12在生长速率、铁载体产量、甜瓜种子促生、抗苹果轮纹病菌(Macrophoma kawatsukai)等方面的差异。【结果】经PCR验证及测序均证实Ser基因缺失突变体构建成功。Ser基因突变后,铁载体合成量明显减少,抑制甜瓜种子的萌发及生长,对苹果轮纹病菌拮抗作用降低。【结论】生防菌Act12 Ser合成酶基因参与控制合成的铁载体在对甜瓜种子促生作用和拮抗苹果轮纹病菌中发挥一定作用,为进一步研究Act12防病促生机制奠定基础。 展开更多
关键词 生防菌Act12 ser基因 基因敲除 防病 促生
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亲和标记DAB389(Gly4Ser)2-αMSH重组蛋白的构建、表达及纯化
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作者 李泽鸿 张国利 +1 位作者 岳玉环 朱平 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2008年第3期241-244,共4页
目的:构建含有亲和标记His-tag的DAB389(Gly4Ser)2-αMSH重组蛋白,便于融合蛋白质的纯化。方法:利用含有His-tag序列、Factor Xa酶切识别序列、白喉毒素N端序列的基因作上游引物,含有αMSH全序列和(Gly4Ser)2互补序列基因作下游引物,以p... 目的:构建含有亲和标记His-tag的DAB389(Gly4Ser)2-αMSH重组蛋白,便于融合蛋白质的纯化。方法:利用含有His-tag序列、Factor Xa酶切识别序列、白喉毒素N端序列的基因作上游引物,含有αMSH全序列和(Gly4Ser)2互补序列基因作下游引物,以pET28a/DAB389(Gly4Ser)2EGF为模板,PCR扩增目的基因片段,并插入到原核表达载体pET28a中,构建了重组表达载体pET28a/亲和标记DAB389(Gly4Ser)2-αMSH,融合蛋白在BL21(λDE3)中以可溶形式表达,通过硫酸铵盐析、亲和层析纯化、脱盐、Factor Xa酶切得到重组蛋白纯品。结果:扩增的片段与理论值一致,序列分析正确;目的蛋白表达量约占菌体总蛋白量的30.6%;纯化得到纯度为94.36%的重组蛋白。结论:成功构建了含有His-tag的DAB389(Gly4Ser)2-αMSH重组蛋白,减少了纯化步骤,为进一步研究重组毒素、简便纯化途径奠定基础。 展开更多
关键词 亲和标记His-tag DAB389(Gly4ser)2-αMSH 重组蛋白 基因表达 免疫毒素类 白喉毒素
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应用于基因分析的最新SERS技术 被引量:6
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作者 胡娟 张春阳 《化学进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2010年第8期1641-1647,共7页
表面增强拉曼散射(SERS)是一种基于拉曼散射原理识别生物及化学分子的分析方法。SERS具有灵敏度高、水干扰小、分辨率高、稳定性好等优点,广泛应用于生物分析和生物医学研究领域。近年来,SERS技术在基因分析领域得到迅速的发展,成为国... 表面增强拉曼散射(SERS)是一种基于拉曼散射原理识别生物及化学分子的分析方法。SERS具有灵敏度高、水干扰小、分辨率高、稳定性好等优点,广泛应用于生物分析和生物医学研究领域。近年来,SERS技术在基因分析领域得到迅速的发展,成为国内外研究的热点。本文对应用于基因分析的一些最新SERS技术(包括基因的免标记检测和标记检测)进行较为全面的综述,着重介绍了免标记检测中基于金属纳米粒子和针尖增强拉曼散射的SERS技术,标记检测中基于拉曼活性物、PCR技术、分子信标、基底和标记物的SERS信号放大技术,并概括了基因多组分检测技术及SERS技术的应用前景。 展开更多
关键词 表面增强拉曼散射(serS) 基因分析 标记物 信号放大
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PTEN基因在宫内发育迟缓大鼠肝脏胰岛素敏感性变化中的作用 被引量:3
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作者 齐婧 王新利 +1 位作者 邢燕 关育红 《实用儿科临床杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第20期1554-1556,共3页
目的通过检测PTEN基因在宫内发育迟缓(IUGR)大鼠肝脏中的表达,探讨PTEN基因在IUGR致胰岛素抵抗(IR)中的意义。方法通过孕期低蛋白饮食法建立大鼠IUGR模型,检测90 d雄性IUGR大鼠胰岛素敏感性,采用反转录(RT)-PCR技术检测90 dIUGR组及对... 目的通过检测PTEN基因在宫内发育迟缓(IUGR)大鼠肝脏中的表达,探讨PTEN基因在IUGR致胰岛素抵抗(IR)中的意义。方法通过孕期低蛋白饮食法建立大鼠IUGR模型,检测90 d雄性IUGR大鼠胰岛素敏感性,采用反转录(RT)-PCR技术检测90 dIUGR组及对照组仔鼠肝脏PTEN基因mRNA表达水平,Western blot检测肝脏组织中丝氨酸/苏氨酸激酶(AKT)蛋白及磷酸化AKT蛋白表达水平。采用SPSS 13.0软件进行统计学处理。结果与对照组比较,IUGR雄性仔鼠平均出生体质量显著降低(t=14.73,P<0.05),空腹血糖显著升高(t=-3.11,P=0.011),空腹胰岛素显著升高(t=-5.01,P=0.001),胰岛素抵抗指数显著升高(t=-3.06,P=0.013),胰岛素敏感指数显著降低(t=2.80,P=0.019),PTEN基因mRNA表达显著升高(t=-2.40,P=0.04),AKT蛋白表达虽然无统计学差异,但磷酸化AKT蛋白表达显著下降(t=3.02,P=0.01),PTEN与胰岛素抵抗指数呈正相关(r=0.928,P<0.05),与磷酸化AKT的表达呈负相关(r=-0.411,P<0.05)。结论 PTEN可能是IUGR致IR的重要调节分子之一。 展开更多
关键词 宫内发育迟缓 胰岛素抵抗 PTEN基因 丝氨酸/苏氨酸激酶
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