α链Gly36Ser突变致异常纤维蛋白原血症家族的纤维蛋白原功能分析

目的 分析一个由α链Gly36Ser突变引起、患病成员症状有差异的遗传性异常纤维蛋白原血症家族的纤维蛋白原(fibrinogen, Fg)功能。方法 收集该遗传性异常纤维蛋白原血症家族患者外周血样本,常规凝血功能试验筛查家族成员凝血功能;NGS法筛查Fg基因(FGA、FGB、FGG)突变位点,Sanger法验证以确认突变;生物信息软件预测突变Fg功能;血栓弹力图(TEG)和功能性Fg TEG试验对家族所有患病者进行Fg凝聚功能评价;Fg动态凝聚试验和纤维蛋白溶解试验检测患病成员纤维蛋白聚集和溶解功能。结果 该家族共有突变基因携带者11名,常规凝血实验和基因突变检测均符合异常纤维蛋白原血症的诊断;11名突变基因携带者经Sanger法验证为同一突变位点;Uniprot和SWISS-MODEL等预测软件均表明该突变为影响纤维蛋白原聚合的有害突变;家族突变基因携带者中5名有症状者TEG相关参数与无症状者相比明显变化,Fg凝集试验显示该5名有症状者凝固曲线起峰时间明显延长且峰值降低;纤维蛋白溶解试验表明家系中多数(7/11)突变基因携带者纤维蛋白在限定时间中不能完全溶解。结论 α链Gly36Ser突变的异常纤维蛋白原血症患者症状可有差异,应全面分析该突变引起的异常纤维蛋白血症家系的基因型和表型,并长期观察患者纤维蛋白功能和凝血功能的变化。

DAB_(389)(Gly_4Ser)_2αMSH重组融合蛋白的构建及表达

利用含有白喉毒素N端序列的基因作上游引物、含有αMSH全序列和(Gly4Ser)2互补序列的基因作下游引物,以pET28a/DAB389(Gly4Ser)2EFG为模板,PCR扩增DAB389(Gly4Ser)2αMSH基因片段,用限制性内切酶EcoR和Nco酶切,并插入原核表达载体pET28a的相应位点,构建了重组表达载体pET28a/DAB389(Gly4Ser)2αMSH,在大肠杆菌中表达重组融合蛋白DAB389(Gly4Ser)2αMSH,转化菌经IPTG、30℃诱导5h,用SDS-PAGE和Western blot鉴定表达的重组蛋白。结果表明扩增的片段与理论值一致。重组质粒的DNA序列分析正确。SDS-PAGE表明,重组蛋白相对分子质量为45870,且表达量达菌体总蛋白量的29.2%。Western blot分析显示,重组蛋白能特异地与抗白喉抗体结合。成功构建表达了重组DAB389(Gly4Ser)2αMSH的工程菌株,表达产物具有生物学活性。

DAB_(389)(Gly_4Ser)_2-αMSH重组蛋白的构建表达及特异性细胞毒性研究

目的:构建重组毒素DAB389(Gly4Ser)2-αMSH,探讨其对过度表达αMSH受体的几种癌细胞的特异杀伤作用。方法:利用含有His.Tag和白喉毒素的基因序列作上游引物、含有αMSH全序列和(Gly4Ser)2的互补序列基因作下游引物,以pET28a-DAB389(Gly4Ser)2-EGF为模板,PCR扩增得到DAB389(Gly4Ser)2-αMSH片段,插入原核表达载体pET28a的相应位点,构建重组表达载体并在大肠杆菌中表达重组融合蛋白DAB389(Gly4Ser)2-αMSH。用SDS-PAGE和Western blot鉴定表达的重组蛋白,用结晶紫法检测重组蛋白对几种癌细胞和正常细胞的毒性作用。结果:构建了含有His.Tag重组表达质粒pET28a-DAB389(Gly4Ser)2-αMSH;SDS-PAGE表明,重组蛋白相对分子质量为45.32×103,其表达量占菌体蛋白总量的29.2%;Western blot分析显示,重组蛋白能特异地与抗白喉抗体结合;细胞活性检测表明重组蛋白对SP2/0,HeLa,A549,A375这4种癌细胞有明显的杀伤作用,4种癌细胞的IC50值分别是3.138,2.736,7.243和4.672μg.mL-1。结论:成功构建了具有生物学活性的重组蛋白DAB389(Gly4Ser)2-αMSH,为进一步的靶向性药物研究奠定了基础。

中国汉族迟发型2型糖尿病与胰高血糖素受体基因Gly40Ser突变的关系

目的 :探讨胰高血糖素受体 (GCG R)基因外显子 2Gly40Ser突变是否与中国人迟发型非胰岛素依赖型糖尿病 (non -insulin -dependentdiabetesmillitus,NIDDM)相关。方法 :选择湖南地区汉族人NIDDM患者 82例及正常对照136例 ,应用聚合酶链反应———限制性片段长度多态分析方法 ,检测Gly40Ser突变。结果 :受检者均不存在Gly40Ser的错义突变。结论 :该突变不是引起中国人NIDDM的重要遗传因素。文献报道白种人GCG R基因Cly40Ser与NIDDM相关 。

多巴胺D_3受体Ser9Gly多态性与利培酮治疗首发精神分裂症患者疗效关系

目的探讨多巴胺D3受体基因多态性与首发精神分裂症患者精神症状严重度和抗精神病药疗效是否相关。方法对201例首发精神分裂症患者进行利培酮治疗[3～5 mg/d,平均(3.2±1.3)mg/d],疗程8周。采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性技术检测多巴胺D3受体基因Ser9Gly多态性。并用阳性和阴性症状量表(PANSS)评定患者治疗前和治疗第8周末的精神症状,分析基因型及其他临床指标与PANSS分值和减分率的关系。结果多巴胺D3受体基因Ser9Gly基因型在各患者组分布频率均符合H-W平衡定律(P>0.05);基因型在治疗显效和未显效组分布频率的差异无统计学意义(χ2=1.995,P=0.369);各基因型亚组临床指标的差异均无统计学意义(均P>0.05);基因型与患者治疗前PANSS总分(χ2=6.605,P=0.018)、治疗第8周末PANSS总减分率(χ2=6.471,P=0.021)和阳性症状减分率(χ2=6.239,P=0.023)均有统计学意义。结论多巴胺D3受体基因Ser9Gly功能多态性可能影响首发精神分裂症患者对利培酮的治疗效应。

无锡地区2型糖尿病患者RAGE基因Gly82Ser多态性与糖尿病视网膜病变的关联性研究

背景 晚期糖基化终末产物特异性受体（RAGE）在2型糖尿病及其微血管并发症的发病过程中发挥重要作用.RAGE基因Gly82Ser存在多态性,但其与糖尿病视网膜病变（DR）的相关性有待进一步研究.目的 探讨无锡地区汉族人群RAGE基因Gly82Ser多态性与DR的关系. 方法 采用横断面研究方法,于2013年3月至2014年2月在无锡纳入汉族无亲缘关系的2型糖尿病患者185例,依据2002年DR国际临床分型标准将患者分为非DR（NDR）组（93例）和DR组（92例）,同期纳入健康体检对照者120名.各位受检者均行眼部检查、血液生物化学指标及血脂等实验室检查和血压、体质量指数（BMI）及空腹血糖水平检测.采集受检者外周血各3 ml,采用PCR-直接测序法检测受检者的基因型及等位基因频率并进行组间差异比较.结果 DR组患者糖尿病病程明显长于NDR组,差异有统计学意义（t=2.25,P=0.01）.DR组、NDR组及健康对照组受检者RAGE基因Gly82Ser位点均存在G和A2种等位基因,其多态性分布符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律（DR组：χ2=0.51,P=0.48;NDR组：χ2=1.38,P=0.24;健康对照组：χ2=0.20,P=0.24）.DR组、NDR组患者和健康对照组受检者AA基因型频率分别为6.5％、3.2％和2.5％,DR组患者AA基因型频率高于NDR组及健康对照组,差异均有统计学意义（χ2=5.146,P=0.023;χ2=5.039,P=0.037）;DR组受检者A等位基因频率分布明显高于NDR组及健康对照组,差异均有统计学意义（χ2=5.494,P=0.019;χ2=5.235,P=0.023）,而GG基因型及G等位基因频率低于NDR组和健康对照组,差异均有统计学意义（GG：χ2=4.260,P=0.039χ2 =4.794,P=0.027;G：χ2 =5.309,P=0.021;χ2=5.476,P=0.032）;NDR组与健康对照组间受检者各基因型及等位基因频率的差异均无统计学意义（AA：χ2=5.346,P=0.127;GG：χ2 =6.981,P=0.137;A;χ2=5.618,P=0.082;G：χ2=4.860,P=0.088）. 结论 RAGE基因Gly82Ser位点单核苷酸多态性与无锡地区2型糖尿病患者DR的发生有一定的关联,A等位基因可能是促进其发病的危险因素.

多巴胺D3受体基因Ser9Gly多态性与抑郁症的相关研究

目的 探讨多巴胺D3受体基因（D3R基因）Ser9Gly多态性在抑郁症发病机制中的作用.方法 选取50例抑郁症患者作为抑郁症组,另外选取30例健康体检者作为对照组.采集全血标本,提取模板DNA,特定引物扩增D3R基因片断,用限制性内切酶Mls Ⅰ（Bal Ⅰ）进行酶切,鉴定基因型.所有结果数据均采用SigmaStat统计分析软件包进行统计分析.结果 抑郁症组与对照组之间D3R基因Ser9Gly多态性位点等位基因频率、基因型分布之间差异无统计学意义（P〉0.05）.抑郁症患者D3R基因Ser9Gly多态性基因型分布频率为：Ser/Ser 40%,Ser/Gly 46%,Gly/Gly 14%.D3R基因Ser9Gly多态性位点基因型分布的两两比较显示：Ser/Ser与Ser/Gly、Ser/Ser与Gly/Gly、Ser/Gly与Gly/Gly之间的差异均无统计学意义（P〉0.05）.结论 抑郁症患者的D3R基因Ser9Gly多态性与抑郁症的发病无相关性.

DRD3基因Ser9Gly多态性与中国帕金森病抑郁的关系

目的探讨多巴胺D3受体(DRD3)基因Ser9Gly多态性与中国帕金森病抑郁的相关性。方法 2016年6月至2018年6月,散发帕金森病患者312例根据汉密尔顿抑郁量表评分分为抑郁组(n=132)和非抑郁组(n=180)。同时招募性别和年龄匹配的健康体检者252例为对照组。留取外周血提取基因组DNA,采用限制性片段长度多态性-聚合酶链反应和限制性酶切方法检测DRD3基因Ser9Gly多态位点。结果三组DRD3基因Ser9Gly位点基因型和等位基因型分布无显著性差异(χ~2=3.095,χ~2=2.627, P> 0.05)。结论 DRD3基因Ser9Gly多态性并非中国帕金森病抑郁人群的遗传易感因素。

新生儿PGC-1α基因Gly482Ser多态性与产妇妊娠期糖尿病的关系

目的：探讨新生儿过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助激活因子-1α（PGC-1α）基因Gly482Ser多态性与妊娠期糖尿病（GDM）的关系。方法：选取在我院住院的50例GDM产妇分娩的新生儿作为实验组以及50例正常产妇分娩的新生儿作为对照组,采用聚合酶链反应—限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）技术,检测新生儿PGC-1α基因Gly482Ser多态性情况以及该多态性与产妇GDM的关系。结果：（1）实验组与对照组新生儿PGC-1α基因Gly482Ser多态性及等位基因的分布情况比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。（2）分娩GG基因型或GA基因型新生儿的产妇患GDM的风险是分娩新生儿为AA基因型的产妇的3.20倍（95%CI=1.172~8.735）。结论：尚不能表明GDM产妇所分娩新生儿的PGC-1α基因Gly482Ser多态性与正常产妇分娩的新生儿有差异,但通过研究发现新生儿的PGC-1α基因型为AA可能是产妇患GDM的保护因素之一。

PGC-1α基因Gly482Ser多态性与广西地区汉族人群妊娠期糖尿病的相关性分析

目的探讨过氧化物酶增殖物激活受体-γ辅助激活因子-1α(PGC-1α)基因Gly482Ser的多态性与广西地区汉族人群妊娠期糖尿病(GDM)的关系。方法研究对象为我院产科住院分娩的234例孕妇,其中GDM患者84例(病例组),糖耐量正常者150例(对照组)。采用PCR-RFLP法检测两组PGC-1α基因Gly482Ser多态性,并分析其与GDM的相关性。结果两组PGC-1α基因Gly482Ser的基因型频率及等位基因分布均无统计学差异。结论PGC-1α基因Gly482Ser多态性与广西汉族地区汉族人群GDM的发病无明显相关性。

DRD3基因Ser9Gly多态性与抗精神病药物疗效的Meta分析

目的系统评价DRD3基因Ser9Gly多态性与抗精神病药物的疗效,为临床提供循证参考。方法计算机检索Cochrane图书馆、Pub Med、Web of Science、中国知网、万方数据库、维普数据库,收集DRD3基因Ser9Gly突变与抗精神病药物疗效的非随机试验,提取资料并评价质量后,采用STATA 12.0统计软件进行Meta分析。结果共纳入11项,合计1 254例患者。Meta分析结果显示,DRD3基因Ser9Gly突变与抗精神病药物疗效有显著性差异。未见明显发表偏倚。结论 DRD3基因Ser9Gly多态性与抗精神病药物疗效有关。

SR-BI基因Gly4Ser多态性对2型糖尿病血脂的影响

目的 探讨B族I型清道夫受体 (thescavengerreceptorclassBtypeI,SR BI)基因外显子 1的Gly4Ser多态性与 2型糖尿病血脂的关系。方法 用聚合酶链反应—限制性片段长度多态性分析方法 ,检测 15 0例 2型糖尿病患者 (糖尿病组 )和 12 0例糖耐量正常者 (对照组 )SR BI基因外显子 1Gly4Ser变异的基因型 ;全自动生化分析仪检测空腹血糖 (FBG)、甘油三酯 (TG)、总胆固醇 (TC)、高密度脂蛋白胆固醇 (HDL C)、低密度脂蛋白胆固醇 (LDL C)、脂蛋白A I(apoA I)和脂蛋白B(apoB)等。结果 ①糖尿病组的等位基因频率与对照组相比 ,差异无统计学意义 (P >0 .0 5 ) ;②SR BI基因外显子 1Gly4Ser变异对FBG、TG、TC、apoA I、apoB等均无影响 (P >0 .0 5 ) ;③两组中携带Ser等位基因的个体与Gly/Gly型相比 ,均有着较低LDL C浓度 ,且差异具有统计学意义 (P <0 .0 5 ) ;④在糖尿病组 ,携带Ser等位基因的患者有着较低HDL C浓度 (P <0 .0 5 )。结论 在糖尿病状态下 ,SR BI基因外显子 1Gly4Ser变异可能更容易发挥遗传影响 ,加重 2型糖尿病患者的脂质紊乱。

DAB_(389)(Gly_4Ser)_2-αMSH的纯化及细胞特异性毒性

重组表达载体pET28a/DAB389(Gly4Ser)2-αMSH在BL21(DE3)中以可溶形式表达重组蛋白,依次通过硫酸铵盐析、离子交换层析、亲和层析纯化、脱盐得93.26%重组蛋白纯品;细胞活性测试结果表明,该重组毒素只对SP2/0、HeLa、A549、A375等4种癌细胞有杀伤作用,对DK、BHK正常细胞没有杀伤力;重组蛋白对SP2/0、HeLa、A549、A375细胞的IC50分别为:3.138、2.736、7.243、4.672 mg/L。

DRD3基因Ser9Gly多态性与不同性别精神分裂症患者工作记忆的关联研究

目的:探讨DRD3基因Ser9Gly多态性与汉族人群不同性别精神分裂症患者工作记忆的关联。方法:选取符合美国精神障碍诊断与统计手册第4版(DSM-IV)中精神分裂症的诊断标准的汉族患者526例和415例汉族健康对照,检测DRD3基因Ser9Gly多态性,用中国修订韦氏成人智力量表(WAIS-RC)进行智商(IQ)评定,N-back任务测量工作记忆能力。采用协方差分析等方法分析DRD3基因Ser9Gly多态性与精神分裂症工作记忆的关联。结果:在全体被试中,男性的1-back[(0.50±0.27)vs.(0.56±0.25)]和2-back[(0.25±0.22)vs.(0.28±0.22)]任务错误率小于女性(均P<0.05)。男性患者中,Ser/Ser基因型的1-back任务错误率[(0.39±0.23)vs.(0.33±0.23)]高于Gly/Ser基因型,IQ[(97.4±15.1)vs.(101.9±13.4)]低于Gly/Ser基因型(均P<0.05);男性对照组中,不同基因型之间工作记忆及IQ得分差异无统计学意义(均P>0.05)。女性被试中,Ser9Gly多态性不同基因型的工作记忆与IQ得分差异无统计学意义(均P>0.05)。结论:精神分裂症患者的工作记忆可能存在性别差异,Ser9Gly多态性在汉族人群中与精神分裂症的工作记忆障碍有一定相关性。

DRD3基因Ser9Gly多态性与特发性震颤相关性的meta分析

目的系统评价DRD3基因Ser9Gly多态性与特发性震颤的相关性。方法计算机检索pubmed、Web of Science、中国知网(Chinese National Knowledge Infrastructure,CNKI)、维普数据库、中国生物医学文献数据库、万方数据库,收集2019年10月前有关DRD3基因Ser9Gly多态性与特发性震颤的病例-对照研究。应用统计学软件Stata14.0进行Meta分析。结果共纳入8项病例-对照研究,病例组1456例,对照组1651例。Meta分析结果显示,显性模型中GG+GA基因型的群体发病风险高于AA基因型的群体[OR=1.16,95%CI(1.00,1.35),P=0.043]。基于人种的亚组分析显示,DRD3基因Ser9Gly多态性与特发性震颤之间的相关性仅存在于高加索人群中。结论高加索人群中DRD3基因Ser9Gly多态性与特发性震颤具有相关性,且GG+GA基因型的存在增加发病风险。

PGC-1基因Gly482Ser多态与心肌梗死的相关研究

目的:旨在探讨过氧化物酶增殖物激活受体-γ共激活蛋白-1(peroxisome proliferator-activated receptor-γcoactivator-1,PGC-1)基因Gly482Ser多态与心肌梗死发生的相关性。方法:随机选取内蒙古地区汉族人255例,其中对照组134例,心肌梗死组121例。采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术(PCR-RFLP)进行基因型检测,并用直接测序法加以证实。结果:PGC-1基因Gly482Ser多态GG、GA、AA基因型频率在对照组分别为0.455、0.388、0.157,在病例组分别为0.099、0.843、0.058(P<0.01),GG vs.GA+AA,P<0.01),等位基因频率分布有明显差异(P=0.003);GA/AA基因型的心梗患者,其血清总胆固醇(TC)水平较GG基因型者明显升高(P<0.05)。结论:PGC-1基因Gly482Ser变异与心梗的发病危险显著相关。

表面增强拉曼光谱技术在细菌生理活性因子和代谢产物分析领域的研究进展

表面增强拉曼散射(SERS)技术作为一种高灵敏度和高分辨率的分析方法,在细菌研究领域展示出广阔的应用前景。SERS技术不仅可在极低浓度水平上进行细菌含量检测,且其微观分辨率可以深入细菌内部,为深刻理解细菌组成和代谢行为提供了机会;无需进行复杂的前处理步骤,即可同时监测多种细菌代谢产物,提高了分析的效率和准确性。这些特性使得SERS技术成为一种强大的工具,用于全面理解细菌的生理活性和代谢产物。该文首先介绍了SERS技术的概念、增强机制以及增强基底材料,然后重点综述了SERS技术在细菌生理活性因子和代谢产物分析领域的研究进展,最后在提出其局限性的同时也对未来发展趋势进行展望。

脂质体作为溶栓药物载体靶向抗血栓的实验研究

为观察血小板膜蛋白受体拮抗剂RGDS肽 (精 甘 天冬 丝氨酸肽 )作为溶栓的归巢装置 ,连接包有溶栓剂的脂质体 (LIP)的溶栓效果 ,用FeCl3复制腹主动脉血栓模型 ,各组自股静脉滴注 :①缓冲液 (PBS) ;② 5 .2万IU/kg尿激酶 (UKl) ;③ 1 5 .6万IU/kg尿激酶 (UKh) ;④ 5 .2万IU/kg尿激酶、脂质体与RGDS的混合物 (ULR) ;⑤包裹 5 .2万IU/kg尿激酶的脂质体与RGDS的混合物 (U LR) ;⑥包裹 5 .2万IU/kg尿激酶的脂质体与RGDS偶连物 (U L R)。发现 :UKh组和U L R组的血压与其他各组相比差异有显著性 (P <0 .0 5 )。ULR组〔( 2 7.1± 5 .7)mg〕及U LR组〔( 2 6.6± 6.1 )mg〕的血栓湿质量与U L R组〔( 2 0 .3± 5 .1 )mg〕相比差异有显著性 (P <0 .0 5 )。UKh及U L R组与其他各组相比血栓缩小。提示 :脂质体作为溶栓药物载体 ,经RGDS修饰后 ,具有较好的靶向性抗血栓作用。

合成肽RGD和YIGSR的聚合衍生物对PG细胞侵袭重组基底膜能力的影响

目的 探讨 ＲＧＤ和 ＹＩＧＳＲ的聚合衍生物对 ＰＧ细胞侵袭重组基底膜能力的影响。方法 利用 Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ细胞培养小室。结果 适量 ＰＧ细胞经趋化剂作用 １０ｈ，侵袭细胞已达便于统计分析的数量范围；２５～１００μｇ／ｍｌ的合成肽 ＲＧＤ、ＹＩＧＳＲ及多数衍生物与细胞作用 ４８ｈ可对抗 ＰＧ细胞对重组基底膜的侵袭。结论 高转移性人肺白细胞癌 ＰＧ细胞系是肿瘤细胞体外侵袭实验筛选有关抗肿瘤转移药物的适用细胞。其中 ＲＧＤ和 ＹＩＧＳＲ的杂叉聚合肽及 ＹＩＧＳＲ均叉聚合肽的抗肿瘤侵袭活性较强。