植物丝氨酸:乙醛酸氨基转移酶研究进展

在植物、动物、微生物的细胞内普遍存在丝氨酸:乙醛酸氨基转移酶,在高等植物中此酶是过氧化物酶体中的标志性酶,在植物的整个生命活动中起着重要的作用。对植物中丝氨酸:乙醛酸氨基转移酶的研究进展进行了综述。

浮萍植物中一个衰老下调基因的初步鉴定(英文)

本文报道对一个衰老下调基因的鉴定 .从绿色和正在衰老的紫萍叶状体组织中分别提取总 RNA,然后使用一个 oligo-d T引物进行逆转录合成 c DNA.c DNA用 oligo-d T和简并引物进行 PCR扩增 ,然后进行琼脂糖凝胶电泳 .电泳后发现 ,一条 c DNA带存在于由绿色组织而不存在于由正在衰老的组织所得到的样品中 .将这一 c DNA回收 ,克隆进 T-vector并且进行了测序 .Northern blot分析表明 ,该 c DNA对应基因的表达受衰老调节而减少 .根据第一个 c DNA序列设计了一个特异性引物 ,进行 RT-PCR扩增 ,并且克隆到另外一个部分 c D-NA.测序结果表明 ,第二个克隆具有与第一个 c DNA相重叠的 40 bp的片段 .将第一个 c DNA序列与删去 40 bp重叠区的第二个 c DNA序列连接 ,我们得到一个 3 2 2个核苷酸的 c DNA3′端部分序列 .用 BLASTN程序将该序列翻译后与 NCBI non-redundant database中已知的蛋白进行比较 ,结果表明所克隆的 c DNA代表的基因与光呼吸途径的丝氨酸 -乙醛酸氨基转移酶编码基因有很高的相似性 .

肾移植术后Ⅰ型原发性高草酸尿症复发致移植肾功能不全的多学科综合诊疗

目的探讨肾移植术后Ⅰ型原发性高草酸尿症(PH)复发的临床特点和多学科综合诊疗(MDT)的经验。方法对1例接受同种异体肾移植手术后不明原因移植肾功能短期内迅速下降的病例进行MDT讨论,总结MDT在诊断罕见遗传性疾病以及提高肾移植受者长期存活中的作用。结果经MDT讨论,患者确诊为Ⅰ型PH复发,排除排斥反应后恢复常规免疫抑制方案,嘱大量饮水,予优质蛋白和低磷饮食、维生素B6、钙剂等保守治疗措施并积极防治并发症。患者移植肾功能恶化延缓,但仍在肾移植术后5个月恢复规律血液透析至投稿日。结论肾移植术后Ⅰ型PH复发较为罕见,临床主要表现为复发性肾结石,移植肾功能下降,且并发症多,患者预后不良。通过MDT讨论患者病情,明确诊断,确定最佳治疗方案,延缓了病情进展,改善了患者预后。

磷酸丝氨酸氨基转移酶1在食管癌组织的表达及其对细胞增殖和耐药的影响

目的探讨磷酸丝氨酸转氨酶1在食管癌组织中表达及对细胞增殖和耐药的影响。方法收集郑州大学第一附属医院诊治的95例食管癌临床标本及癌旁组织作为研究对象,采用蛋白质免疫印迹分析癌旁组织和食管癌组织磷酸丝氨酸转氨酶1表达水平;人食管癌细胞系Ec-9706和顺铂耐药的Ec-9706随机分为对照短发卡RNA(shRNA)组和PSAT1 shRNA组,shRNA对照/耐药组和PSAT1 shRNA/耐药组,通过体内和体外细胞增殖实验分析磷酸丝氨酸转氨酶1对细胞体外增殖能力的影响;采用流式细胞术分析不同处理细胞的凋亡水平;采用蛋白质免疫印迹分析磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(Akt)、耐药相关蛋白P-gp、剪切型半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3的表达水平。计量数据比较采用t检验。结果癌旁组织中磷酸丝氨酸转氨酶1表达水平(0.91±0.20)明显低于食管癌组织表达水平(1.76±0.26),差异有统计学意义(t=25.230,P<0.05)。对照shRNA组细胞抑制率[(7.14±2.06)%]明显低于PSAT1 shRNA组细胞[(54.79±11.97)%],差异有统计学意义(t=9.610,P<0.05)。对照shRNA组细胞裸鼠成瘤体积和质量[(1289.19±131.71)cm^(3)、(5.36±0.67)g]高于PSAT1 shRNA组细胞[(705.66±65.88)cm^(3)、(3.27±0.26)g],差异有统计学意义(t=9.706、7.110,P<0.05)。shRNA对照/耐药组细胞抑制率[(21.80±3.39)%]明显低于PSAT1 shRNA/耐药组细胞[(41.12±3.59)%],差异有统计学意义(t=9.581,P<0.05)。shRNA对照/耐药组细胞裸鼠成瘤体积和质量[(799.52±61.71)cm^(3)、(3.68±0.51)g]高于PSAT1 shRNA/耐药组细胞[(558.62±44.97)cm^(3)、(2.07±0.27)g],差异有统计学意义(t=7.728、6.932,P<0.05)。对照shRNA组细胞抑制率[(3.78±0.81)%]明显低于PSAT1 shRNA组细胞[(26.73±4.64)%],差异有统计学意义(t=11.940,P<0.05)。shRNA对照/耐药组细胞抑制率[(16.75±4.95)%]明显低于PSAT1 shRNA/耐药组细胞[(35.04±4.05)%],差异有统计学意义(t=6.998,P<0.05)。对照shRNA组细胞磷酸化PI3K、磷酸化Akt、耐药相关蛋白P-gp蛋白表达水平(0.91±0.10、1.26±0.18、1.19±0.12)明显高于PSAT1 shRNA组细胞(0.61±0.11、0.91±0.06、0.74±0.07),差异有统计学意义(t=5.024、4.487、7.693,P<0.05)。结论磷酸丝氨酸转氨酶1在食管癌组织中表达水平显著上调,参与食管癌细胞的增殖和耐药过程。

Ⅰ型原发性草酸尿症家系AGT基因新突变鉴定

目的分析Ⅰ型原发性草酸尿症(PH)家系的遗传方式、临床特征及致病基因丙氨酸乙醛酸氨基转移酶(AGT)突变。方法以2012年11月上海交通大学医学院收治的1例PH患者为研究对象,通过家系调查和血尿草酸浓度离子色谱分析,直接测序法分析AGT基因。同时选取100名健康正常人作为对照。结果该家系共有2例患者确诊为Ⅰ型原发性草酸尿症(PH1),遗传特点符合复杂常染色体隐性遗传。AGT基因测序分析发现先证者与其父亲8号外显子均存在一个新的杂合插入突变(C.946_947insAG),在蛋白水平上该突变引起AGT第275位丝氨酸开始的移码突变,导致羧基末端的119个氨基酸替换缩短为异常的38个氨基酸(P.Ser275Arg fs*38),且先证者与其母亲第2号外显子第467位碱基均存在杂合点突变(C.467G>A),导致(P.Gly116Arg),此突变为已报道过的致病点突变。结论一个新的AGT突变位点被确定与隐性遗传性PH1有关。这是国内首次对遗传性PH1进行基因学研究。

新疆哈密瓜AT2基因的克隆及初步功能验证

本研究利用RT-PCR技术从抗霜霉病哈密瓜(Cucumis melo L.)品种MR-1中克隆到AT2基因,其整编码区为1 229 bp,编码401个氨基酸,同源比对结果为99%,将其编码的丝氨酸乙醛酸转氨酶蛋白序列与多种物种进行系统进化树分析,结果显示,甜瓜与黄瓜SGT蛋白同源性较高,遗传距离最近,推测在同属中该蛋白进化相对保守。在线分析表明SGT蛋白不含信号肽及跨膜区,即该蛋白为非跨膜蛋白。RT-PCR分析表明AT2基因随着植株生长时期不同表达量不同,开花期表达量最高,幼苗期至开花期表达量呈上升趋势;且不同组织中,叶片表达量显著高于茎、根。构建了p CAMBIA2300-AT2植物表达载体,运用农杆菌介导法转化烟草,抗性筛选获得7株阳性转基因烟草;经q RT-PCR检测,AT2基因在不同株系转基因烟草T0代中表达量均高于野生型。通过对转基因烟草进行抗病性鉴定,转基因烟草对靶斑病、赤星病的抗性高于野生型烟草。本研究表明,过表达AT2基因能够提高烟草对部分真菌性病害的抗性。

丙氨酸-乙醛酸转氨酶2类似物1对人肝癌97H和HCCLM3细胞增殖、凋亡和周期的影响

目的 观察丙氨酸-乙醛酸转氨酶2类似物1(AGXT2L1)对肝癌细胞增殖、凋亡和周期的调控作用。方法 实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测肝癌细胞株97H、HCCLM3和正常肝细胞株LO2中AGXT2L1的表达水平;设计并构建AGXT2L1的靶向siRNA,将AGXT2L1-siRNA转染97H和HCCLM3细胞株构建AGXT2L1靶向敲低组和阴性对照组,通过RT-qPCR验证敲低效果;采用细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测各组细胞在0、12、24、48、72、96 h的增殖能力;采用流式细胞周期实验检测各组细胞在G1、S、G2期的分布情况;采用原位缺口末端标记法(TUNEL)实验检测各组细胞的凋亡率。结果 AGXT2L1在肝癌97H和HCCLM3细胞中相对表达高于正常肝细胞LO2(1 350.04±91.36、1 710.64±92.34,t97H=25.574,P<0.01;tHCCLM3=32.068,P<0.01)。转染AGXT2L1-siRNA后,对比对照组及空白组,肝癌97H和HCCLM3细胞内AGXT2L1相对表达量明显降低(0.19±0.04比1.10±0.04,t97H=-28.722,P<0.01;0.20±0.01比0.93±0.09,tHCCLM3=-13.887,P<0.01)。CCK-8实验结果显示,敲低AGXT2L1后,97H和HCCLM3细胞的增殖率明显下降(0.71±0.01比0.95±0.12,t97H=-31.243,P<0.01;0.67±0.13比0.87±0.17,tHCCLM3=-17.083,P<0.01),差异有统计学意义。细胞周期实验结果显示,干扰AGXT2L1表达后,S期细胞比例低于对照组[(13.45±1.20)%比(18.73±0.28)%,t97H=-7.451,P<0.01;(15.26±0.52)%比(20.45±1.08)%,tHCCLM3=-7.483,P<0.01];G2期细胞比例低于对照组[(16.90±0.54)%比(19.99±0.54)%,t97H=-6.992,P<0.01;(16.23±0.28)%比(23.36±0.39)%,tHCCLM3=-25.720,P<0.01],抑制细胞从G1期向S期转变,抑制肝癌细胞增殖。细胞凋亡实验显示:干扰AGXT2L1表达后,97H和HCCLM3细胞凋亡率明显升高[(13.06±1.86)%比(1.06±0.75)%,t97H=14.673,P<0.01;(14.41±2.21)%比(0.80±0.32)%,tHCCLM3=14.947,P<0.01],差异有统计学意义。结论 敲低AGXT2L1的表达抑制肝癌97H和HCCLM3细胞株增殖,促进细胞凋亡。