青藤碱基于CASC11/AKT3轴对脑胶质瘤原位荷瘤裸鼠肿瘤生长及血管生成的抑制作用

目的观察青藤碱对脑胶质瘤原位荷瘤裸鼠肿瘤生长及组织血管生成的抑制作用,并基于癌易感候选基因11(CASC11)/丝氨酸/苏氨酸激酶3(AKT3)探讨相关机制。方法取对数生长期U87-MG细胞,将CASC11过表达质粒CASC11 mimics转染至U87-MG细胞,48 h后用于后续实验。取45只BALB/c裸鼠,随机抽取10只设为空白组;其余25只裸鼠给予U87-MG细胞悬液建立脑胶质瘤原位荷瘤模型,将成功建模的20只裸鼠随机分为脑胶质瘤组、青藤碱组,各10只;剩余的10只裸鼠注射转染48 h后的U87-MG细胞悬液,设为mimics联合青藤碱组。建模完成后7 d,给予青藤碱组、mimics联合青藤碱组裸鼠腹腔注射青藤碱(20 mg/kg),其余组腹腔注射等体量生理盐水。干预14 d后,测定抑瘤率与脾脏指数,检测肿瘤组织的微血管密度和AKT3蛋白的表达量。结果mimics联合青藤碱组、青藤碱组的抑瘤率分别为(30.29±4.46)%、(52.10±6.87)%,前者较后者降低(P<0.05)。与空白组相比,脑胶质瘤组的脾脏指数降低(P<0.05);与脑胶质瘤组比较,青藤碱组的脾脏指数升高,血管密度、AKT3蛋白的表达量均降低(均P<0.05);与青藤碱组比较,mimics联合青藤碱组的脾脏指数降低,血管密度、AKT3蛋白的表达量均升高(均P<0.05)。结论青藤碱可提升脑胶质瘤原位荷瘤裸鼠的免疫功能,抑制肿瘤血管生成和肿瘤生长,其可能通过抑制CASC11表达进而下调AKT3蛋白表达来发挥作用。

Peutz-Jeghers综合征临床及遗传学研究现状

Peutz-Jeghers综合征(PJS)是一种罕见的遗传性错构瘤性息肉疾病,以皮肤黏膜色素斑沉着、多发消化道错构瘤性息肉和随年龄增长肿瘤易感性增加为特征性表现。目前唯一确定的PJS致病基因为丝氨酸/苏氨酸激酶11(STK11),该基因是一种抑癌基因,在人体几乎所有组织中均表达,且在肿瘤组织中的表达水平显著高于正常组织。STK11基因突变导致STK11蛋白激酶功能障碍是PJS发病的根本原因。PJS患者临床特征不同,基因突变类型多样,建立特定的基因型-表型相关性,实现患者个性化的筛查和治疗,将成为未来的研究热点。

碳水化合物磺基转移酶11对胰腺癌细胞增殖、侵袭的影响及其机制

目的观察碳水化合物磺基转移酶11(CHST11)在胰腺癌组织中表达,对胰腺癌细胞的增殖、侵袭等生物学行为的影响,并探讨其作用机制。方法收集经手术切除的胰腺癌组织标本30例,免疫组织化学法检测组织中CHST11的表达。采用RNA干扰技术敲低胰腺癌细胞株PANC-1、AsPc-1中CHST11的表达,通过蛋白质印迹法(Western blot)实验筛选出转染效率最高的一条小干扰RNA(siRNA)进行后续实验。将实验分为CHST11-siRNA组和阴性对照组(NC组),细胞增殖实验(CCK-8法)、原位缺口末端标记法(TUNEL)方法、Transwell小室法分别检测敲降CHST11对PANC-1、AsPc-1细胞株增殖、凋亡、侵袭及迁移能力的影响;通过Western blot实验检测敲降CHST11对丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路中c-Jun氨基末端激酶(JNK)、细胞外信号调节激酶(ERK)激活水平的影响。定性资料使用χ^(2)检验,定量资料采取独立样本t检验或单因素方差分析。结果CHST11在胰腺癌组织中阳性检出率(43%)高于正常组织(16%),差异有统计学意义(χ^(2)=5.079,P<0.05)。相较于NC组,CHST11-siRNA组在24、48、72、96 h时间点细胞活性均较低,差异有统计学意义(PANC-1细胞株F=0.297、4.205、4.734、18.625,AsPc-1细胞株F=0.490、0.991、1.609、30.126,P<0.05);CHST11-siRNA组迁移及侵袭能力均明显低于NC组,差异有统计学意义(PANC-1细胞F=0.500、0.400,AsPc-1细胞F=0.727、10.811,P<0.05)。CHST11-siRNA组细胞凋亡率较NC组显著升高,差异有统计学意义(PANC-1细胞F=1.144、AsPc-1细胞F=2.148,P<0.05)。CHST11-siRNA组细胞磷酸化ERK(pERK)、磷酸化JNK(pJNK)表达水平明显低于NC组,差异有统计学意义(PANC-1细胞株F=0.682、0.020,AsPc-1细胞株F=3.547、4.082,P<0.05)。结论CHST11在胰腺癌组织中高表达,敲降CHST11在胰腺癌细胞中的表达,胰腺癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力降低,并促进细胞凋亡,这一调控机制可能与CHST11参与激活MAPK信号通路中ERK和JNK的活化有关。

丝氨酸-苏氨酸激酶11基因沉默对人前列腺癌RWPE-1细胞侵袭及迁移能力的影响及其作用机制

目的探讨丝氨酸-苏氨酸激酶11(liver kinase B1/serine-threonine kinase 11,LKB1)基因沉默对人前列腺癌RWPE-1细胞侵袭及迁移能力的影响及其作用机制。方法将质粒LKB1-sh RNA1及sh NC分别转染至RWPE-1细胞中,同时设空白对照组(未转染),经G418筛选出稳定表达细胞株。RT-PCR及Western blot法检测RWPE-1细胞中LKB1基因mRNA转录及蛋白表达水平;划痕试验及Transwell小室试验分别检测LKB1基因沉默对RWPE-1细胞迁移及侵袭能力的影响;RT-PCR及Western blot法检测RWPE-1细胞中转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)及MMP-9基因mRNA转录及蛋白的表达水平。结果与sh NC组及空白对照组比较,LKB1-shRNA1组RWPE-1细胞中LKB1基因mRNA转录及蛋白表达水平明显降低(P<0.001);细胞划痕愈合能力及侵袭细胞数明显升高(P<0.001);TGF-β1、MMP-2及MMP-9基因mRNA转录及蛋白表达水平均明显上升(P<0.01)。结论 LKB1基因沉默可显著提高RWPE-1细胞的转移及侵袭能力,可能是通过上调TGF-β1、MMP-2及MMP-9表达水平产生作用的。

非小细胞肺癌患者STK11突变与临床病理特征及预后的关系

目的探究非小细胞肺癌(NSCLC)患者丝/苏氨酸蛋白激酶11(STK11)基因突变与临床病理特征及预后的关系。方法选取2012年6月-2014年10月中国人民解放军联勤保障部队第910医院收治的NSCLC患者肺癌组织石蜡标本125例,提取DNA进行二代基因测序,分析STK11基因突变状态与NSCLC患者临床病理特征及NSCLC患者预后的关系。结果125例NSCLC患者STK11基因突变者共43例,变异检出率为34.40%,包括外显子错义突变、移码突变、无义突变、插入突变、缺失突变、同义突变、剪切位点突变,如错义突变包括2个突变位点:c.88G>A和c.869T>c,插入突变位点为c.735-10C>A,缺失突变位点为c.790;93,导致TTTG碱基缺失。STK11基因突变状态与性别、年龄、吸烟史、病理类型、分化程度无关(P>0.05),与NSCLC患者TNM分期、淋巴结转移有关(P<0.05);STK11基因突变NSCLC患者中位生存期为24.59月,显著低于非突变患者(48.23月)(χ^(2)=18.299,P=0.000)。单因素分析结果显示,STK11基因突变、分化程度低、TNM分期高、淋巴结转移是影响NSCLC患者不良预后的危险因素(P<0.05);多因素分析结果显示,STK11基因突变、淋巴结转移是影响NSCLC患者不良预后的独立危险因素(P<0.05)。结论STK11基因突变与NSCLC患者TNM分期、淋巴结转移及预后有关,是影响患者不良预后的独立危险因素。